甲型HN流感病毒样品采集运送及检验技术课件

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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,一、标本的采集种类和要求,1,、,推荐采集的呼吸道标本种类,疾病发病后应尽快采集如下标本:鼻拭子、咽拭子、鼻腔吸取物、鼻腔冲洗液。气管插管的病人也应收集气管吸取物。标本应置于无菌病毒采样液,并立即用冰块或冰排保存或置于,4,(冰箱),并马上送至实验室。(临床样品采集人员及实验室检测人员的感染控制指导请见相关文件。)采样同时填写疑似人感染甲型,H1N1,感染病例标本采样单。(附表,1,),1,)鼻腔抽吸液的采集方法,抽吸器一端的管子连接在抽吸泵上,另一端的管子从外鼻孔完全插入鼻腔,启动抽吸泵采集鼻腔液在抽吸器中。,2,)鼻腔擦拭液的采集方法,将灭菌棉棒完全插入鼻腔中,摩擦鼻甲数次,采集粘膜表皮。,3,)咽喉擦拭液的采集方法,将灭菌棉棒从口腔完全插入咽喉中,以咽后壁、上颚扁桃的发红部位为中心,摩擦数次,采集粘膜表皮。,采集时,要注意不要触碰到唾液。(采样视频网址,2,、拭子的选择 标本应使用头部为合成纤维的拭子(例如,聚酯纤维),用铝或塑料做柄。不推荐棉拭子和木柄。标本采集管应包含,3,毫升病毒采样液(含有蛋白质稳定剂,阻止细菌和真菌生长的抗生素,缓冲液),填写疑似人感染甲型H1N1感染病例标本送检单(附表2)。,附表1 疑似人感染甲型H1N1流感病毒病例标本采样单,3、临床标本储存要求 保存在4(不能超过4天)或者-70或-70以下。,选项:参照传染病报告卡。,遵循生物安全三级个人防护。,三、病毒分离鉴定 可采用鸡胚和/或MDCK细胞进行流感病毒分离。,附表1 疑似人感染甲型H1N1流感病毒病例标本采样单,三、病毒分离鉴定 可采用鸡胚和/或MDCK细胞进行流感病毒分离。,#选项:A鼻咽拭子、B鼻咽吸取物、C鼻腔冲洗液、D鼻腔吸取物、E气管吸取物、F其他(如为其他,请在表格中注明)采集人员:采集单位(盖章):,附表2 疑似人感染甲型H1N1流感病毒病例标本送检单,如有不适,应立即向上级报告。,(实际操作:采集鼻拭子2份,咽拭子2份放在同一病毒采样液中,其目的为了增加阳性检出率),所有样本操作均应在生物安全柜(BSC)内进行。,2)鼻腔擦拭液的采集方法 将灭菌棉棒完全插入鼻腔中,摩擦鼻甲数次,采集粘膜表皮。,2)鼻腔擦拭液的采集方法 将灭菌棉棒完全插入鼻腔中,摩擦鼻甲数次,采集粘膜表皮。,采集时,要注意不要触碰到唾液。,(临床样品采集人员及实验室检测人员的感染控制指导请见相关文件。,#选项:A鼻咽拭子、B鼻咽吸取物、C鼻腔冲洗液、D鼻腔吸取物、E气管吸取物、F其他(如为其他,请在表格中注明),#选项:A鼻咽拭子、B鼻咽吸取物、C鼻腔冲洗液、D鼻腔吸取物、E气管吸取物、F其他(如为其他,请在表格中注明)采集人员:采集单位(盖章):,#选项:A鼻咽拭子、B鼻咽吸取物、C鼻腔冲洗液、D鼻腔吸取物、E气管吸取物、F其他(如为其他,请在表格中注明)采集人员:采集单位(盖章):,3,、临床标本储存要求 保存在,4,(不能超过,4,天)或者,-70,或,-70,以下。有条件的实验室均应保存在,-70,或,-70,以下。不应保存在,-20,。,4,、标本的分装处理标本送至实验室后,立即进行处理,避免反复冻融。将原始标本分为三份,一份用于核酸检测,一份用于病毒分离,一份保存待复核。(实际操作:采集鼻拭子,2,份,咽拭子,2,份放在同一病毒采样液中,其目的为了增加阳性检出率),5,、标本的运输 疑似人感染甲型,H1N1,感染病例列为,A,类,用,UN2814,包装运输。填写疑似人感染甲型,H1N1,感染病例标本送检单(附表,2,)。,二、核酸检测,基于,PCR,原理的核酸检测方法是一种快速有效的诊断方法,在突发传染病应急工作中发挥了巨大作用。,1,、基于,real-time RT-PCR,的方法检测新的甲型,H1N1,流感病毒(引物和探针序列为美国,CDC,设计):,4,月,29,日,WHO,网站上公布了美国,CDC,设计的针对此次甲型,H1N1,流感病毒的,real-time RT-PCR,引物和探针,此实验用于检测疑似甲型,H1N1,流感病例的呼吸道样本,因此,用此,real-time RT-PCR,的方法,建议首先筛选甲型流感病毒并排除季节性流感病毒和,H5N1,禽流感病毒。,real-time RT-PCR,方法参考。,2,、基于,RT-PCR,的方法检测新的甲型,H1N1,流感病毒(引物序列为国家流感中心设计):,目前国家流感中心设计了,RT-PCR,方法检测新的甲型,H1N1,流感病毒,三、病毒分离鉴定 可采用鸡胚和,/,或,MDCK,细胞进行流感病毒分离。具备相应条件的网络实验室在收到标本后,24h,内进行病毒接种。,四、适用于实验室工作人员的甲型,H1N1,流感病毒生物安全(一)实验室级别及个人防护,1,、对采集自属于感染甲型,H1N1,流感病毒疑似病例的患者的临床标本进行的诊断性实验工作,在,BSL-2,实验室内进行。所有样本操作均应在生物安全柜(,BSC,)内进行。遵循生物安全三级个人防护。,2,、对采集自属于感染甲型,H1N1,流感病毒疑似病例的患者的临床标本进行的病毒分离培养工作,应在,BSL-3,实验室内进行,并遵循生物安全三级个人防护。,(,二)健康监测,1,、所有人员均应自测发热及其他症状。,2,、感染甲型,H1N1,流感病毒的症状包括咳嗽、喉咙痛、呕吐、腹泻、头痛、流鼻涕和肌肉疼痛。如有不适,应立即向上级报告。,3,、如有人员在无防护情况下暴露于甲型,H1N1,流感确诊病例的临床标本或活病毒,应考虑在暴露后的,7,天时间里使用奥司他韦或扎那米韦进行抗病毒药物预防。,五、附表和附件附表,1,疑似人感染甲型,H1N1,感染病例标本采样单附表,2,疑似人感染甲型,H1N1,感染病例标本送检单,附表,1,疑似人感染甲型,H1N1,流感病毒病例标本采样单,姓名,性别,年龄,职业,现住址,发病日期,标本,(#),种类,标本量(,g,或,ml),采集日期,备注,选项:参照传染病报告卡。,#,选项:,A,鼻咽拭子、,B,鼻咽吸取物、,C,鼻腔冲洗液、,D,鼻腔吸取物、,E,气管吸取物、,F,其他(如为其他,请在表格中注明)采集人员:采集单位(盖章):,附表,2,疑似人感染甲型,H1N1,流感病毒病例标本送检单,姓名,性别,年龄,职业,现住址,发病日期,标本,(#),种类,标本量,*,(,g,或,ml),采集日期,备注,选项:参照传染病报告卡。,#,选项:,A,鼻咽拭子、,B,鼻咽吸取物、,C,鼻腔冲洗液、,D,鼻腔吸取物、,E,气管吸取物、,F,其他(如为其他,请在表格中注明),*标本量:如果同一份标本有多个包装请注明。,填表人员:送样时间:单位(盖章,),谢谢!,一、标本的采集种类和要求,1,、,推荐采集的呼吸道标本种类,疾病发病后应尽快采集如下标本:鼻拭子、咽拭子、鼻腔吸取物、鼻腔冲洗液。气管插管的病人也应收集气管吸取物。标本应置于无菌病毒采样液,并立即用冰块或冰排保存或置于,4,(冰箱),并马上送至实验室。(临床样品采集人员及实验室检测人员的感染控制指导请见相关文件。)采样同时填写疑似人感染甲型,H1N1,感染病例标本采样单。(附表,1,),2)鼻腔擦拭液的采集方法 将灭菌棉棒完全插入鼻腔中,摩擦鼻甲数次,采集粘膜表皮。,(实际操作:采集鼻拭子2份,咽拭子2份放在同一病毒采样液中,其目的为了增加阳性检出率),2、对采集自属于感染甲型H1N1流感病毒疑似病例的患者的临床标本进行的病毒分离培养工作,应在BSL-3实验室内进行,并遵循生物安全三级个人防护。,(临床样品采集人员及实验室检测人员的感染控制指导请见相关文件。,所有样本操作均应在生物安全柜(BSC)内进行。,1)鼻腔抽吸液的采集方法抽吸器一端的管子连接在抽吸泵上,另一端的管子从外鼻孔完全插入鼻腔,启动抽吸泵采集鼻腔液在抽吸器中。,选项:参照传染病报告卡。,(实际操作:采集鼻拭子2份,咽拭子2份放在同一病毒采样液中,其目的为了增加阳性检出率),2)鼻腔擦拭液的采集方法 将灭菌棉棒完全插入鼻腔中,摩擦鼻甲数次,采集粘膜表皮。,具备相应条件的网络实验室在收到标本后24h内进行病毒接种。,3、临床标本储存要求 保存在4(不能超过4天)或者-70或-70以下。,#选项:A鼻咽拭子、B鼻咽吸取物、C鼻腔冲洗液、D鼻腔吸取物、E气管吸取物、F其他(如为其他,请在表格中注明)采集人员:采集单位(盖章):,气管插管的病人也应收集气管吸取物。,2、拭子的选择 标本应使用头部为合成纤维的拭子(例如,聚酯纤维),用铝或塑料做柄。,四、适用于实验室工作人员的甲型H1N1流感病毒生物安全(一)实验室级别及个人防护 1、对采集自属于感染甲型H1N1流感病毒疑似病例的患者的临床标本进行的诊断性实验工作,在BSL-2实验室内进行。,标本量*(g或ml),四、适用于实验室工作人员的甲型H1N1流感病毒生物安全(一)实验室级别及个人防护 1、对采集自属于感染甲型H1N1流感病毒疑似病例的患者的临床标本进行的诊断性实验工作,在BSL-2实验室内进行。,选项:参照传染病报告卡。,目前国家流感中心设计了RT-PCR方法检测新的甲型H1N1流感病毒,5、标本的运输 疑似人感染甲型H1N1感染病例列为 A类,用UN2814包装运输。,real-time RT-PCR方法参考。,四、适用于实验室工作人员的甲型,H1N1,流感病毒生物安全(一)实验室级别及个人防护,1,、对采集自属于感染甲型,H1N1,流感病毒疑似病例的患者的临床标本进行的诊断性实验工作,在,BSL-2,实验室内进行。所有样本操作均应在生物安全柜(,BSC,)内进行。遵循生物安全三级个人防护。,2,、对采集自属于感染甲型,H1N1,流感病毒疑似病例的患者的临床标本进行的病毒分离培养工作,应在,BSL-3,实验室内进行,并遵循生物安全三级个人防护。,附表,1,疑似人感染甲型,H1N1,流感病毒病例标本采样单,姓名,性别,年龄,职业,现住址,发病日期,标本,(#),种类,标本量(,g,或,ml),采集日期,备注,选项:参照传染病报告卡。,#,选项:,A,鼻咽拭子、,B,鼻咽吸取物、,C,鼻腔冲洗液、,D,鼻腔吸取物、,E,气管吸取物、,F,其他(如为其他,请在表格中注明)采集人员:采集单位(盖章):,#选项:A鼻咽拭子、B鼻咽吸取物、C鼻腔冲洗液、D鼻腔吸取物、E气管吸取物、F其他(如为其他,请在表格中注明)采集人员:采集单位(盖章):,将原始标本分为三份,一份用于核酸检测,一份用于病毒分离,一份保存待复核。,一、标本的采集种类和要求,选项:参照传染病报告卡。,填写疑似人感染甲型H1N1感染病例标本送检单(附表2)。,real-time RT-PCR方法参考。,2、对采集自属于感染甲型H1N1流感病毒疑似病例的患者的临床标本进行的病毒分离培养工作,应在BSL-3实验室内进行,并遵循生物安全三级个人防护。,附表2 疑似人感染甲型H1N1流感病毒病例标本送检单,4、标本的分装处理标本送至实验室后,立即进行处理,避免反复冻融。,1)鼻腔抽吸液的采集方法抽吸器一端的管子连接在抽吸泵上,另一端的管子从外鼻孔完全插入鼻腔,启动抽吸泵采集鼻腔液在抽吸器中。,附表1 疑似人感染甲型H1N1流感病毒病例标本采样单,4月29日WHO网站上公布了美国CDC设计的针对此次甲型H1N1流感病毒的real-time RT-PCR引物和探针,此实验用于检测疑似甲型H1N1流感病例的呼吸道样本,因此,用此real-time RT-PCR的方法,建议首先筛选甲型流感病毒并排除季节性流感病毒和H5N1禽流感病毒。,(临床样品采集人员及实验室检测人员的感染控制指导请见相关文件。,气管插管的病人也应收集气管吸取物。,气管插管的病人也应收集气管吸取物。,具备相应条件的网络实验室在收到标本后24h内进行病毒接种。,填表人员:送样时间:单位(盖章),遵循生物安全三级个人防护。,疾病发病后应尽快采集如下标本:
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