抗血清的制备实验

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,免疫血清的制备,选择合适的抗原,分离纯化抗原,选择免疫动物,确定免疫方案和程序,免疫动物,采血分离血清,抗血清的纯化与鉴定,抗血清制备的基本流程,设计实验方案的设计,1.,设计本实验的理由（实验目的）。,2.,实验方案设计。,3.,可行性（理论、人员、实验条件等）。,4.,创新性。,5.,本实验要解决的主要问题。,6.,预期目标。,每个组交一份实验方案（,3-4,个同学一组）,论文式实验报告,一、题目的选择,1,、准确、具体、简洁、醒目，使人一目了然，引起重视,2,、作者与单位,(,班级,),，并注明所在班级和指导教师姓名。,3,、摘要和关键词 摘要是对论文主要内容和观点的概括,论文式实验报告,二、关键词,又称主题词或索引词，一篇论著,(,论文,),一般选用,2,5,个关键词,论文式实验报告,三、引言,(,前言,),引言是论文正文的开场白,1,、引起读者对本论文的兴趣。,2,、为读者提供理解本论文所需的背景资料。,论文式实验报告,四、材料与方法材料,1,、实验对象,2,、实验材料,3,、实验分组,4,、实验过程和方法,6,、数据处理等内容。,论文式实验报告,五、结果：,结果是实验研究成果的结晶,论文式实验报告,六、讨论,1.1,1.2,1.3,对实验结果解释和评价,论文式实验报告,七、参考文献,期刊：著者文章名刊物名称，卷或年,(,期,),：文章的起讫页码,书籍：编著者书名版本出版地：出版者，年份,一、颗粒性抗原的制备（,2%5%RBC,的制备）,（,1,）静脉采血,2-3ml,，注入抗凝管中，轻轻混匀。,（,2,）洗涤,RBC,将上述抗凝血移至,10ml,试管中，加入,NS 6-7ml,，混匀，,2500r/min,离心,5min,去上清。重复上述操作三次，最后一次去上清后，将红细胞配制成,2%5%,的,RBC,悬液。,2,、取上述,RBC,悬液,1ml,免疫家兔。免疫部位：静脉、皮内、皮下等。每只兔子免疫,810,点，每点,0.1ml,左右。每隔,24,天免疫一次。,1,班免疫时间表,每隔,2,天免疫一次,2,班免疫时间表,每隔,3,天免疫一次,3,班免疫时间表,每隔,4,天免疫一次,3,、心脏采血,10ml,，凝固后，分离血清（,2000,转,/min,5,分钟,),。,4,、取两支小试管并以,A,、,B,标记之，将上述血清一半加入,A,管，另一半加入,B,管。将,A,管置于,56,水浴箱,30,分钟（灭活补体）。,5,、抗血清效价的鉴定。,凝集试验和溶血反应,凝 集 反 应,实验原理,指,颗粒性抗原,(RBC),与相应抗体特异结合，在适当电解质存在下，形成肉眼可见的凝集现象。,试管凝集试验过程,1.,取洁净小试管,8,支，排列于试管架上，依次编号。,2.,向各管中加入生理盐水,200ul,。,3.,向第一支试管中加入,A,管血清,200ul,，充分混匀，吸出,200ul,放入第二管，混匀后取出,200ul,加入第三管中，如此类推直至第七管，混匀后取出,200ul,弃去。第八管不加血清，为生理盐水对照管。至此，第,17,管的血清稀释度分别为：,1,：,2,，,1,：,4,，,1,：,8,1,：,128,。这种稀释方法称为连续倍比稀释法，为免疫试验中常用的稀释方法。,4.,向每管加入,200ul 2%RBC,悬液，此时每管的液体总量为,400ul,，血清稀释度又增加,1,倍。,5.,摇匀，置,37,30min,。,(,取出试管,1500,r/s 30,秒,),观察结果。,试管凝集操作程序,(,倍比稀释法,),管号,1,2,3,4,5,6,7,8,对照,生理盐水,200,200,200,200,200,200,200,200,血清,200,200,200,200,200,200,200,RBC,200,200,200,200,200,200,200,200,终稀释度,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64,1/128,1/256,-,弃去,单位：,uL,结果判断,选择适当的光暗对比背景，先不要振摇，观察管底凝集物的范围和上清液的浊度。然后轻轻摇动试管，注意观察凝集颗粒的大小、均匀度等。每一试管的观察，都应与对照管进行比较。盐水对照管诮无凝集现象，轻轻摇动试管则,RBC,分散成均匀混浊；而凝集块则沉于管底，轻摇时不易散开，凝集程度通常以,“,+,”,表示：,“,4+,”,很强，全部,RBC,凝集，凝集块全部沉于管底，液体澄清。,“,3+,”,强，,RBC,大部分凝集并沉于管底，液体稍混浊。,“,2+,”,中等强度，,RBC,大约一半凝集，液体较混浊。,“,+,”,弱，仅少量,RBC,凝集，液体明显混浊。,“,-,”,不凝集，液体混浊与对照管相同。,只要待测血清管出现,“,2+,”,以上的凝集现象，即可判断为反应阳性；以出现,“,2+,”,凝集的最大稀释度为待测血清的抗体效价。,溶 血 试 验,实验原理,溶血反应是指补体参与的抗体致红细胞的溶解反应,.,参与反应的成分有,红细胞,、,抗红细胞抗体,，也称溶血素、,补体。,溶血反应,实验过程,1.,取洁净小试管,8,支，排列于试管架上，依次编号。,2.,向各管中加入生理盐水,200ul,。,3.,向第一支试管中加入血清,200ul,，充分混匀，吸出,200ul,放入第二管，混匀后取出,200ul,加入第三管中，如此类推直至第七管，混匀后取出,200ul,弃去。第八管不加血清，为生理盐水对照管。至此，第,17,管的血清稀释度分别为：,1,：,2,，,1,：,4,，,1,：,8,1,：,128,。这种稀释方法称为连续倍比稀释法，为免疫试验中常用的稀释方法。,4.,向每管加入,200ul 2%RBC,悬液，此时每管的液体总量为,400ul,，血清稀释度又增加,1,倍。,5.,摇匀，置,37,30min,。观察结果。,溶血反应操作程序,(,倍比稀释法,),管号,1,2,3,4,5,6,7,8,对照,生理盐水,200,200,200,200,200,200,200,200,血清,200,200,200,200,200,200,200,RBC,200,200,200,200,200,200,200,200,终稀释度,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64,1/128,1/256,-,弃去,单位：,uL,观察结果时，应先观察对照管结果是否正确。对照管应不溶血，在对照管结果全部正确前提下观察待测血清管的结果，以出现,完全溶血,作为抗体的效价。,思考题,溶血反应与补体结合试验有何不同？,