抗核抗体谱检测及临床意义虞伟

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2012-9-20,#,两,者,的,关,系,自身免疫,也就是产生自身抗体和,的现象。,正性应答、,样作用 而被清除。,-“,清道夫,缔合性（ ）特异性抑制作用,免疫网络，,自身免疫和自身免疫病,自身抗体在自身免疫病诊断中的,价值与临床意义,南京军区南京总医院,全军临床检验医学研究所,报告人：虞 伟,自身免疫病,的,分类,1.,器官特异性自身,自身免疫（,autoimmunity,）,:,指机体免疫系统对自身抗,原产生免疫应答,也就是产生,自身抗体和,/,或自身致敏淋,巴细胞的现象,。,自身免疫病（,Autoimmunity Diseases,）,:,指免疫系统对,宿主自身抗原发生正性应答、造成其组织或器官的病理性,损伤、,影响其生理功能、并最终导致各种临床症状的状,态。,自身免疫引起疾病,;,疾病引起自身免疫,;,某些因素引起前两者,;,自身免疫病相关学科,免疫病,：,局限某特定器官,器官特异性抗原引,临床特征,症状：发热、雷诺现,急诊,免疫学,肾内,起的免疫应答导致,自身免疫病。,象、晨僵等,体征：关节肿胀、皮,2.,非器官特异性自,身免疫病,疹、肌无力等,辅助检查,皮肤,自身免疫病,（风湿病）,血液,病变见于多种器,官及结缔组织；又,称结缔组织病或胶,自身抗体,(ANA,dsDNA,RF, AnuA),、免疫球蛋白,骨科,呼吸,消化,原病。,补体,常规化验及影像学,检查等,大量误诊病例,自身免疫病的基本特征：,血液中测得高效价的自身抗体,/,致敏淋巴细胞。,自身抗体,/,致敏淋巴细胞作用于自身组织而引起损伤,或功能紊乱。,动物实验可复制出相似的病理模型。,确认自身免疫病的条件：,证实自身抗体或自身反应性,T,细胞的存在；,找到自身抗原；,用该自身抗原免疫动物能够诱发同样的自身免疫病；,通过被动转移实验证实抗体或者,T,细胞的致病能力。,关于自身抗体的作用,天然自身抗体,(natural autoantibody),清道夫”样作用以可溶性,CIC,而被清除。,-,非特异性低亲和力,Auto-Ab,，可阻止自身抗,原与自身反应性细胞的作用,-,缔合性,（,connectivity,）,特异性抑制作用：,可,形成独特型,(Id)-,抗独特型抗独特型,(A-Id),免疫网络，使自,身抗体不致过度产生，有利于维持机体内环境的,相对稳定。,1,破坏细胞。,沉积局部,:,的理解已不再局限于核成分，,Sm,抗体与,CCP,抗体与,而非选干扰素；,抗体等。,常规检查对,AID,诊断、,分类：,抗体（,复合物）,抗体（,抗 和类风湿因子（ ）,等多种自身抗体的检测。,类风湿因子,(RF),试验：,尚未在临床广泛推广，,金标准”,抗体、,-,抗核抗体,单特异性自身抗体确认,),多肽抗体谱,),、,病理性自身抗体,自身抗体引起的细胞破坏,:,激活补体、调理吞噬、介导,ADCC,破坏细胞。如自身免疫性溶血性贫血、药物过敏性血,细胞减少症。,抗受体抗体与受体结合：,刺激或阻断细胞的功能。如,Graves,病、重症肌无力。,自身抗体与自身抗原形成,ICIC,沉积局部,:,活化补体引起组,织、细胞损伤。如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎。,抗细胞外成分自身抗体与相应物质结合,:,激活补体、调,理吞噬作用杀伤破坏自身细胞。如肺出血肾炎综合征。,抗核抗体（,ANA,）,传统定义：顾名思义是指抗细胞核抗原成分的自身抗体,的总称 （狭义定义）；,现代定义：指抗细胞内所有抗原成分的自身抗体的 总,称。对,ANA,的理解已不再局限于核成分,，而是指抗核 酸,（,nucleic acid,）,和核蛋白（,nucleoprotein,）,抗体的总称 （广,病理性自身抗体的临床意义,疾病诊断与鉴别诊断：,如： 抗,dsDNA,、,抗 抗体与,SLE,；抗 抗体与,RA,；,AoAb,与,POF,、,女性不育、流产者有关；,疾病分期：,如：,EM-Ab,与,EMT,、,女性不育有关；,EM-Ab,在,EMT,期阳性率,依次为,86%,、,60%,、,43%,和,14%,；,疾病监测、预后判定,如：抗,dsDNA, ANA,为,SLE,疾病活动标志,指导临床用药：,如：,ANA,、,ASMA,（,+,）,与,AIH-1,激素治疗,而非选干扰素；,与疾病的临床表现有关：,抗,CCP,抗体等,。,因此，自身抗体常规检查对,AID,诊断、治疗与病情监测至关重要,!,抗核抗体谱（,ANAs,）,分类,根据细胞内靶抗原分子理化特性和分布部位将,ANAs,分类：,抗,DNA,抗体,（,anti-dsDNA,，,anti-ssDNA,）,抗组蛋白抗体（,histons: H1 , H2A , H2B , H3 , H4 , H2A-H2B,复合物,）,抗,ENA,抗体,（抗体,:,Sm , nRNP , SSA/Ro , SSB/La,rRNP , Scl-70 , Jo-1 , PCNA , RA33 , Ku , RANA ,义定义）；,ANAs,抗非组蛋白抗体,Mi-1, Mi-2, PL-7, PL-12.,）,靶抗原分布： 细胞核成分；,细胞核、细胞浆、细胞骨架、细胞分裂周期,抗核抗体用于疾病诊断的临床应用指南,抗着丝点抗体（,anti-CENP -A ,B, C,，,D,，,F,，,G,）,抗核仁抗体（抗体,:,RNA-polymerase-1 , PM-Scl/PM-1,，,Th/To,U3nRNP/Fibrillaria,，,4-6-S-RNA,）,抗其他细胞成分抗体（高尔基体，中心体，纺锤体，线粒体，溶酶体，,肌动蛋白，,Vimentin,，,细胞角蛋白，,Lamin),自身抗体免疫学测定方法,（,%,）,琼脂双向扩散或对流免疫电泳,-,抗,ds-DNA,，,抗,Sm,，,抗,U,1,RNP,和类风湿因子,（,RF,）,胶乳凝集试验,:,类风湿因子,Farr,试验,：抗,ds-DNA,抗体,放射免疫沉淀法：,-,尚未在临床广泛推广,，但已有报道用于抗,U,1,U,2,U,3,-RNP,等多种自身抗体的检测,。,间接免疫荧光技术：细胞内抗原自身抗体筛查的“金标准,抗核抗体,(ANA),、抗,ds-DNA,抗体,、抗平滑肌抗体,(ASMA),、,ANCA,等,酶联免疫吸附试验,(ELISA):,单特异性自身抗体确认,免疫印迹免疫斑点技术,(,单特异性自身抗体确认,-ANA,谱,(,含,ENA,多肽抗体谱,、,AMA(M2/M4/M9),、,抗,LKM-1,、,抗,LC-1,、,抗,SLA/LP,等,悬浮芯片,/,或液态芯片技术,微阵列免疫芯片技术,2,皮肤、 多脏器和,/,或 症状，,排除类似特定组织、,阳性等）,-,球蛋白,增高、,RibP,蛋白,均质型,),95,50,50,SLE,。,60S,的标志抗体,.,系统性自身免疫病相关自身抗体谱,临床症状与特征,有难以解释的皮肤,、关节、血管及多脏器和 或多系统损害症状，,后者可影响包括肝、,肾、肺、胸腺、胰腺、甲状腺、胃肠道及神经和血液系统等表现,核染色体染色质核小体,DNA,染色体,染色质,疑似自身免疫病患者,注意排除类似特定组织、器官及肿瘤和感染性疾病，并与之鉴别,常规实验室（含临检、生化、免疫和病原体）检查，免疫功能异常者,（如血清,球蛋白、,IgG,增高,、补体降低和,CIC,阳性等）,血清自身抗体指标测定,抗,nRNP,抗,Sm,抗,SS-A,抗,SS-B,ASMA,抗,LKM-1,抗,pANCA,cANCA,抗,Scl-70,抗,PM-Scl,抗,Jo-1,抗,PCNA,抗 蛋白,ANucA,抗,dsDNA,等,（,+,）,LC-1,抗,SLA/LP, AMA:,- M2/M4/M9,抗,PR3,抗,MPO,（,+,）,核小体,ANA (IIF),抗,dsDNA,抗心磷脂,抗,CCP,AILD,抗体谱,ANCA,抗,GAb,ASCA,抗,PCA,抗,TG,抗,GAD,抗,2,GPI,AKA,RF,抗,PAb,抗,IFAb,抗,TPO,抗,IA2,抗,TSHR,抗,IAA,组蛋白,DNA,SLE,、,MCTD,、,SS,、,PSS,、,DM/PM,、,APS,、,RA,、,AIH,、,PBC,、,PSC,、,MPA,、,WG,、,CSS,、,UC,、,CD,、,萎缩性胃炎、恶性贫血、,Graves,病、桥本氏甲状腺炎、,型糖尿病,核小体,:,是染色体功能亚单位,为,DNA,与组蛋白的复合体,ANA(,均质型,),抗,RNP/Sm,抗体,系统性红斑狼疮相关自身抗体,抗 体,抗核抗体,(ANA),dsDNA,抗体,抗,Sm,抗体,膜,DNA,抗体,核小体抗体,U,1,RNP,抗体,SS-A,抗体,SS-B,抗体,抗心磷脂抗体,类风湿因子,敏感性,(%),99,70,25,78,85,50,25-35,15,20-40,25,特异性,(%),80,95,99,94,92,87-94,70,40,75,30,主要相关自身抗体,:,抗,ds-DNA,核小体和组蛋白抗体等,.,主要见于,SLE,。,抗原,:,核糖体,60S,亚单位的,3,种蛋白：,P0, P1, P2 (38, 19, 17 kDa),。在碳端的具有相同的,免疫反应表位。,疾病,: SLE: 5% - 15%;,为,SLE,的标志抗体,.,PCNA,抗体,组蛋白抗体,核蛋白抗体,5,30-80,58,3,%RA*,%RA*,dsDNA,、,蛋白的一个多肽序列（,Sm,复合抗原物中,可以达到,70%,，,(IBT),法,病情活动度及肾损害有关，,SLE,继发肾病的敏感性和特异性分别为,0/50,3/50,0/50,和双链,DNA,自身抗体检测 其敏感性和特异性分别为,91%,AnuA,及抗,dsDNA-NcX,抗体在,特异性为,91%,SLE,中的阳性率为,dsDNA,抗体的产生具有相关性,N-,甲基,研究证实,RA,相关自身抗体,抗体：,口腔,),大鼠,),症状前）,抗体：,患者： 抗体阳性、 阳性）,抗体临床诊断价值小结,:,(,无症状正常人,患者,),骨破坏时,三种不同方法抗,dsDNA,、,ANcA,检测结果及在,抗,SmD1,抗体, SLE,诊断的新标记,靶抗原：为 复合抗原物中,Dl,蛋白的一个多肽序列（氨基酸,80-l19,）,SLE,疾病诊断中的价值,SLE,：,阳性率可以达到 ，其他疾病中少见,原因：抗,Sm,自身抗体直接与一个隐蔽的多肽表位结合,研究组别及,考察指标,IIFT,法,抗,dsDNA,抗,dsDNA,免疫印迹,(IBT),法,AnuA,抗,dsDNA/AnuA,抗,dsDNA,ELISA,法,抗,dsDNA-NcX,抗,C1q,抗体,研究组别,:,自身抗体阳性例数,/,样本检测例数,(%),与,SLE,病情活动度及肾损害有关,，适于监测狼疮性肾炎的活动度,对 继发肾病的敏感性和特异性分别为,86%,和,95%,系统性红斑狼疮,疾病对照组,38/87,5/98,38/80,7/98,42/80,5/98,48/80,9/98,50/87,5/42,56/87,3/42,联合采用,C1q,和双链 自身抗体检测,其敏感性和特异性分别为,和,90%,正常对照组,1/50 0/50 0/50,抗,dsDNA,及抗,dsDNA,抗体在,SLESLE,疾病诊断中的价值,抗端粒抗体,在 中的阳性率为,60%,特异性为,该抗体与抗 抗体的产生具有相关性,可能是一种新的高特异性,SLE,相关抗体,抗 甲基,-D-,天冬氨酸受体抗体,研究证实，该抗体与狼疮患者精神症状的发生有关。,敏感性,(%),特异性,(%),Youden,指数,阳性似然比,阴性似然比,阳性预测值,阴性预测值,43.7,95.9,0.396,10.66,1.288,0.864,0.743,47.5,95.3,0.428,10.11,1.105,0.844,0.77,52.5,96.6,0.491,15.44,0.905,0.894,0.79,60.0,93.9,0.539,9.84,0.667,0.842,0.813,57.5,91.3,0.488,6.61,0.739,0.862,0.694,64.4,96.7,0.611,19.52,0.553,0.949,0.742,与各自的疾病对照组和正常对照组比,P,0.01,-,临床检验杂志,. 2009; 27(4):292-294,相关自身抗体,:APF,AFAAKA,抗,CCP,抗体,抗,CCP,抗体,：可出现于,RA,临床症状之前,抗,CCP,抗体阳性,抗核周因子,(APF; 1964),核心抗原多肽衍生物,:,环瓜氨酸肽,抗,CCP,抗体,抗角蛋白抗体,(AKA; 1979),70%,RA,患者,80%,靶抗原,:,纯化的丝聚蛋白,AFA,ELISA,方法,测定,50%,60%,40%,上皮细胞,(,口腔,靶抗原,:,前丝聚蛋白,去磷酸化产物,抗丝聚蛋白自身抗体,(APF,AFA,AKA ),敏感度,:,35-80%,食管,(,大鼠,靶抗原,:,食道上皮前丝,聚蛋白及其酸性异构体,10%,20%,0%,特异性,:,70-99%,10,8,6,4,2,什么是丝聚蛋白的抗原位点,?,年（开始出现,RA,症状前）,Rantapa-Dahlqvist et al., Arthritis Rheum, 2003,开始出现症状,抗,CCP,抗体,：发展到,RA,的标志,从普通的关节炎（,UA,）,发展到,RA,(318,名,UA,患者,：,22%,抗,CCP,抗体阳性,、,22% IgM-RF,阳性,）,抗,CCP,抗体临床诊断价值小结,100,75,抗,CCP,抗体,抗,CCP,抗体阳性,抗,CCP,抗体阴性,93%,100,75,IgM-RF,IgM-RF,阳性,IgM-RF,阴性,75%,对,RA,患者具有良好的敏感度和特异性,与类风湿因子平行检测可提高,RA,患者血清学的诊出率,可检测,RA,临床症状出现前的人群 无症状正常人、未明,50,50,确的关节炎患者以及早期的,RA,患者,25,25%,25,31%,对于关节侵蚀损伤具有较高的阳性预测值,0,0,1,2,3,0,0,1,2,3,已经列入,2009,年,ACR/EULAR RA,分类标准和评分系统,（随访）年,随访（年）,PPV 93%, NPV 75%,*,根据,ACR,标准诊断,PPV 75%, NPV 69%,Van Gaalen et al., Arthritis Rheum, 2004,无影像学典型,RARA,骨破坏时,依据评分表评分,6,分确诊为,RA,4,年分类标准（,3,个关节炎,），持续,肿胀），,持续至少,6,周,阳性。,4,条阳性即可诊断,8%,注,1,2,3,4,高度特异,),、,肾微粒体抗体（,诊断与鉴别诊断、,-,与疾病活动性相关,型抗体（,*,-,与疾病活动性相关,抗体）,抗体）,AMA,）：,强烈提示为,PBC,*-,高滴度,抗体）,为何,RA,的诊断标准（,ACR,）,不停地发生变化？,类风湿关节炎相关自身抗体,1987,年分类标准,（,RA,）,名 称,敏感性,(%),特异性,(%),1958,年标准,1,、,晨僵,1h,，,持续至少,6,周,；,2,、, 个关节炎（肿胀），持续,至少,6,周,；,类,风湿因子,RA33/36,抗体,50-70,25-45,86,93.6,1963,年标准,1987,年标准,2009,年标准,均不能满足,RA,早期诊治要求,抗,CCP,抗体增列,其中,3,、,手关节（腕、掌、指关节）,炎（ ），持续至少,周,；,4,、,对称性关节炎（肿胀）；,5,、,类风湿皮下结节；,6,、,影像学检查可见关节骨质破,坏（侵蚀性）；,7,、,RF,阳性,。,Sa,抗体,抗角蛋白抗体,抗核周因子,抗,CCP,抗体,抗,CB10,抗体,抗,BiP,抗体,37,33,38-62,60-70,72,70,78-97,87-92,70-90,96,70-88,92, 条阳性即可诊断,RA,。,自身免疫性肝病,Autoimmune liver diseases,（,AILD,）,主要包括三种与自身免疫密切相关的，以肝、胆损伤为主的疾病,PBC,AMA,ANA,SMA,特殊类型的肝病，其诊断和治疗完全不同于一般慢性病毒性肝炎,自身免疫性肝炎（,AIH,）,-Autoimmune hepatitis,HCV,LKM,ANA,10%,Autoimmun-,10%,AIC,AMA neg. PBC,原发性胆汁性肝硬化（,PBC,）,-Primary biliary cirrhosis,Hepatitis,原发性硬化性胆管炎（,PSC,）,-Primary sclerosing cholangitis,自身免疫性胆管炎（,AIC,）,-Autoimmune cholangitis(AMA-negative PBC),重叠综合征（,Overlap Syndrome,）,13%,Andere(?),6%,PSC,ANA,ANCA,指标,/,特性,自身免疫性肝炎积分系统,(1999),分值 注 指标,/,特性 分值,AILD,相关自身抗体谱,女性,ALP/AST (,或,ALT),比值,3.0,血清球蛋白或,IgG,2.0,1.5-2-0,1:80,1:80,1:40,1:40,AMA,阳性,病毒性肝炎指标,阳性,阴性,用药史,阳性,阴性,烈酒日平均摄入量,60 g/day,+2,+2,0,-2,+3,+2,+1,0,+3,+2,+1,0,-4,-3,+3,-4,+1,+2,-2,肝组织学,界面性肝炎,淋巴细胞浸润为主,肝细胞玫瑰花,无以上情况,胆道改变,其他改变,其他自身免疫性疾病,其他重要指标,其他特异性,AutoAb,HLA DR3 or DR4,对治疗的反应,完全,复发,累计分的提示,治疗前,明确的,AIH,可能的,AIH,治疗后,明确的,AIH,可能的,AIH,+3,+1,+1,-5,-3,-3,+2,+2,+1,+2,+3,15,10-15,17,12-17,5,6,7,8,9,10,11,12,抗核抗体,(ANA),：多核点型抗体,(,高度特异 、抗组蛋白抗体、抗,DNA,抗体,抗核膜抗体,-,核复合体,210kDa,糖蛋白抗体,-,核心蛋白,p62,抗体,-,核纤层蛋白,B,受体抗体,抗平滑肌抗体（,ASMA,）,*,- ANA/SMA,同时出现,1,型,AIH,诊断与鉴别诊断,抗肝,-,肾微粒体抗体（抗,LKM-1,）,*,- 2,型,AIH,诊断与鉴别诊断,、判断预后,抗去唾液酸受体抗体（抗,ASGPR,）,*,与疾病活动性相关,(,各型,AIH),抗可溶性肝抗原抗体（抗,SLA /LP,）,*,-,诊断与鉴别诊断,(3,型,AIH),抗肝细胞溶质抗原,I,型抗体（抗,LC-1,）,与疾病活动性相关,(2,型,AIH),抗肝细胞膜抗原抗体（抗,LMA,抗体,）,抗肝特异性蛋白抗体（抗,LSP,抗体,）,抗胆管、胆小管抗体,*,- PSC,诊断与鉴别诊断,抗胃壁细胞抗体（,PCA,）,抗线粒体抗体（ ）：,M2/M4/M8/M9,高滴度,AMA-M2,强烈提示为,抗中性粒细胞胞浆抗体（,pANCA,）,*,- PSC,诊断与鉴别诊断,抗甲状腺抗体（抗,TG,、,抗,TPO,抗体,）,抗板层素抗体（,A/C,）,*,- PBC,诊断与鉴别诊断,类风湿因子（,RF,）,5,核点型（,好发于青年人。,是一组以血管,纤维素样坏死，,的一种全身性疾病。,患者并发溃疡性结肠炎。,相关。,抗体。,(ERCP),等技术,免疫沉积；,Type I-AIH,ANA and ASMA,Type,-AIH: LKM-1 and LC-1,Detection: IIFT,ANA (HEp-2 cells),ASMA (rat stomach),ASMA:,LKM (rat kidney),LC-1 (liver rat),ELISA, Immunoblot,A-LKM-1,Detection: IIFT,Prevalence:,40 - 90%,Prevalence: 2 - 4%,(more common in,childhood AIH),Target antigen:,Actin (HEp-2 cells),ANA: Detection: IIFT,Actin (primate liver),Prevalence: 5 - 70%,Target antigens: various,e.g. dsDNA (20%),High titers and ASMA suggest AIH,Target antigens:,various,mostly F-actin,High titers anti-F-,actin and ANA,suggest AIH,(ANA seen in 70-,80% of the patients,but not specific for,AIH),LKM (rat liver),Cytochrome p450,2D6,Occurs also in,Hepatitis C,More severe,disease?,LC-1 Prevalence:,1 - 2%,Target antigen:,FTCD,(formiminotransferase,cyclodeaminase),PBC:AMA,ANA-nuclear dot,nuclear,membrane,PBC: Diagnosis,abnormal liver function tests,AMA(95%),Sens:90-95%,Spec:96%,抗核点抗体,(30%),抗核膜抗体,(2%),alkaline phosphatase usually 3-4 times elevated,normal or minimally elevated transaminases (3x),elevated serum,cholesterol,and IgM often seen,jaundice, hypoalbuminemia, and coagulopathy,seen in,later stages of the disease,serologic testing,AMA present in 90-95% (the best have sens=98%,spec=96%),RF found in 70%,ASMA in 66%,anti-thyroid in 40%,ANA in 35%,ANA:,核点型,（,anti-sp100,）,in 30%,ANA:,核,膜型,in 2%,1,）,Cholesterol,：胆固醇,2,）,jaundice, hypoalbuminemia, and coagulopathy,：黄疸，低蛋白血症，消耗性凝血病,原发性硬化性胆管炎,(PSC),以肝内外胆管炎症、纤维化为特征的慢性疾病。,PSC,好发于青年人。,主要症状有疲劳、骚痒、色素沉积、黄斑瘤和黄疸。,系统性血管炎（,SV,）,基本概念：基于血管壁的炎症（动脉受累为主），），是一组以,血管,壁炎症（,炎性细胞浸润）,和,血管壁纤维素样坏死,，,并导致多系统,损害的一种全身性疾病,。,近,70%,患者并发溃疡性结肠炎。,与,HLA-B8,、,-DR3,、,-DRW52,相关。,60-70%,有,pANCA,，,10,有,LSP,和,ASGPR,抗体。,胆胰造影,(ERCP),等技术，提高该病的诊断率。,主要免疫病理改变：, 单核粒细胞浸润；可见有,IgG/IgM,或,IgA,免疫沉积,；, 过敏反应类型：可见,、,、,和,型；,每种疾病各有其模式（,Disease pattern),normal liver,“onion skin fibrosis” in PSC,6,方法：,靶抗原进行确认，,捕获法的应用提高了检测敏感度,;,MPA,的敏感度分别为,系统性血管炎发病机制,ANCA-vasculitis,细菌、立克次体,螺旋体、病毒,直接损伤,乙肝病毒,A b+A g (CIC ),激活补体,中性粒细胞,抗内皮细胞抗体,抗基底膜抗体,单核细胞,ANCA,J. CHARLESJENNETTE, AND RONALD J. FALK,The New England Journal of Medicine,抗中性粒细胞胞浆抗体（,ANCA,）,ANCA =,Anti-Neutrophil Cytoplasm Autoantibodies,cANCA(,靶抗原,间接免疫荧光法：,4,种核型,1,、,cANCA,：,靶抗原为,PR3;,2,、,pANCA,：,靶抗原为,MPO,（甲醛抗性）,;,3,、,非,MPO-pANCA,：,不提示血管炎，而提示炎症性肠病或其它自身免,疫性疾病,;,（甲醛敏感）,中性粒细胞,为弱阳离子或,中性蛋白,如,PR3,等,),pANCA(,靶抗原,为强阳离子蛋,白,如,MPO, CG,4,、,非典型,cANCA,：靶抗原为,BPI,，常提示慢性感染。,ELISA,方法,：,可对,PR3,和,MPO,靶抗原进行确认,，但不同试剂盒的反应性不同影响检,测敏感度,捕获法的应用提高了检测敏感度,两种方法共同检测：,对血管炎的特异性为,99%,，对,WG,和,的敏感度分别为,73%,和,67%,LF,等,),ANCA,与血管炎及相关疾病,ANCA,型 胞浆内抗原,c-ANCA,蛋白酶,3,（丝氨酸蛋白酶）,髓过氧化酶（,+,）,p-ANCA,髓过氧化酶（,）,CG,、,LF,、,BPI,、,unknown,疾病（敏感性）,Wegener,肉芽肿,（,30%90%,）,特发性新月体肾炎,Churg-Strauss,综合征,显微镜下多动脉炎,Crohns,病（,75%,）,溃疡性结肠炎（,20%,）,慢性活动性肝炎（,75%,）,原发性硬化性胆管炎（,70%,）,原发性胆汁性肝硬化（,30%,）,正常对照（,5%,）,C.G. Dileep Sharma* and A.R. Pradeep*, J Periodontol August 2006,7,为主的,IC,沉积,+,），,诊断考虑,+,），,检查等。,），进一步导致,SLE,中有较高检出率,），但,抗体却为阴性；,-,胞衬蛋白,的一个高灵敏度及特异性标记物,早期发现,的鉴别诊断，,抗体检测到；,诊断具有较高的特异性。,细胞浆不发荧光,.,抗体,(70kd),13,2,7,ANCA,检测,:,推荐方案,ANCA,检测和报告的国际共识,(Savige, van der Woude, Wiik et al., 1999),系统性血管炎诊断思路举例：,表现为可触性紫癜、腹痛、关节炎、血尿、蛋白尿,IIFT,肾穿显示,IgA,为主的 沉积，诊断考虑,肾穿显示血管内皮,IgM,（,+,）,IgG,（,），有,循环冷球蛋白（ ），诊断考虑,过敏性紫癜,冷球蛋白血症性血,管炎,阴性,阳性,当免疫荧光无免疫复合物沉积，而,ANCA,显微镜下多血管炎,（,+,）,，则诊断考虑,5%,患者血清,仅在,ELISA,中,表现为阳性,最优检测,单特异性,ELISA,检测,当有肉芽肿性炎症，而无哮喘，则诊断,倾向,当有肉芽肿性炎症，有哮喘史及嗜酸性粒,Wegener,肉芽肿,Churg-Strauss,综合征,细胞增多，诊断,最低检测,结果,诊断依据：,临床特点,+,病理改变,+,相关检查；,想到本病：,临床上有难以解释的系统性表现或,/,和多脏器缺血症状；,认识本病：,熟悉分类标准，根据标准推断；,诊断本病：,尽量争取组织或血管活检、血管造影和,MRIMRI,检查等。,干燥综合征,:,抗,SS-A,、,抗,SS-B,抗体,一种原因不明的自身免疫疾病，淋巴细胞浸腺体（主要影响,泪腺和唾液腺），进一步导致干燥性结角膜炎和口干燥症 ；,自身抗体：抗,SS-A,、,抗,SS-B,（,在 中有较高检出率），但,在青少年型,SS,患者中抗患者中抗,SS-A,和抗和抗,SS-B,抗体却为阴性；,抗,胞衬蛋白：检测,SS,的一个高灵敏度及特异性标记物 有,助有,SS,早期发现 及与青少年,SLE,、,RA,的鉴别诊断,，可先于,抗,SS-A,、,SS-B,抗体检测到,；,抗腮腺抗体,:,对,SS,诊断具有较高的特异性,。,抗,SS-A,、,抗,SS-B,抗体,抗腮腺抗体,荧光模式,:,Hep-2,细胞,细胞,:,间期,细胞核呈现细颗粒,型荧光,核仁有部分,不发荧光。分裂期,细胞在染色体以外,显示颗粒荧光,而染,色体本身则不发荧,光,.,灵长类肝组织切,片,:,肝细胞核及部分,核仁可见细颗粒荧,光,细胞浆不发荧光,在某些细胞（如,淋巴细胞、巨噬细,胞）中的荧光反应,较强,干燥综合征相关自身抗体,其他自身免疫病相关自身抗体,自身抗体,ANA,抗,SSA,抗体,抗,SSB,抗体,抗,a-,胞衬蛋白抗体,抗,M3,受体抗体,类风湿因子,ANCA,抗,M2,抗体,ACA,抗,RNP,抗体,阳性率,(%),60-80,50-70,30-60,65-87,92,60-80,10-25,硬皮病,(PSS),皮肌炎,/,多肌炎,(DM/PM),抗磷脂抗体综合征,混合性结缔组织病,(MCTD),Scl-70,抗体,抗着丝点抗体,(ACA),抗核抗体,(ANA),PM-1,抗体,Jo-1,抗体,抗核抗体,(ANA),抗磷脂抗体,(ACL),狼疮抗凝物质,U,1,RNP,抗体,抗核抗体,(ANA),8,蛋白复合物自身抗体家族，,与抗内因子,(IF),抗体,(,抗,2-,糖蛋白,习惯性流产,血小板减少症,心肌坏死等），以及多种神经症状；,80%- (50%-,PCA,抗体的靶抗原为,H+/,抗磷脂抗体综合症（,APS,）,抗磷脂或磷脂,-,蛋白复合物自身抗体家族，靶抗原高度异质,性，其自身抗体成员包括：,-,狼疮抗凝因子,抗胃壁细胞,(PCA)(PCA),与抗内因子,(IF),抗体,-,抗心磷脂抗体,-,抗磷脂酰丝氨酸抗体,-,抗,糖蛋白,1,抗体 抗,2GPI),-,抗,Annexin,抗体,-,抗凝血酶原抗体,检测方法：,ELISA,法,直接抑制凝血反应,导致凝,血因子依赖性凝血时间延长,APS,相关的临床症候群,相关临床症状： 血小板减少症,复发性动静脉血,栓形成（肺栓塞,心肌坏死等），以及多种神经症状；,慢怪萎缩性胃炎,:,胃壁细胞抗体,(,阳性率,100%);,内因子抗体,(,少见,);,恶性贫血,:,胃壁细胞抗体,(,阳性率,80%-90%);,内因子抗体,(50%-70%);,抗 抗体的靶抗原为,H+/+ATP,酶,Fast and economic:,-IgG(1:10) exocrine pancreas(PAb),goblet cells(GAb),慢性炎症性肠疾病（,UC,CD,）,诊断,pANCA,-IgG(1:1000) S.cerevisiae(ASCA),PAb,GAb,pANCA,ASCA,Optimal:,-IgG and IgA(all antigens),-1:10,1:100,1:1000,猴胰腺组织,猴小肠组织,人中性粒细胞,酿酒酵母细胞,抗胰岛细胞与抗胰岛素抗体,Autoantibodies against pancreas islet cells,（,ICA,）,-,Target antigens:,(1) Glutamate decarboxylase(GAD): Stiff-Man syndrome, type I Diabetes mellitus, 60-85%,(2) Tyrosine phosphatase(lA2): Stiff-Man syndrome, type I Diabetes mellitus, 48-80%,Autoantibodies against insulin (lAA),Type I Diabetes mellitus,under 5 years of age the prevalence amounts to over 90%,while by the 12th year it decreases to 40%.,Glutamate decarboxylase,谷氨酸脱羧酶,; Tyrosine phosphatase,酪氨酸磷酸,(,酯,),酶,9,受体,( ):,阳性率 ；（,2,阳性率超过,70%,；（,3 20%-,：（,1 100%,（,是风湿性疾病。,才能作出风湿性疾病的最终,检测与临床表现结合起来，,我们鉴别这些数量众多的风湿性疾病，,活动度进行,ANA,（）,ANA,（）,结果的出现率取决于以下因素：,滴度结果不能直接进行比较。,（）与 选定的滴度值，,的呈阳性,ANA,反应,独立的诊断条件之一。,不相关，,ANA,（）,（）可出现在,多种情况下,IIF,法测定,阳性检出结果因病而异；,治疗。,AID,经皮质激素或免疫抑制剂,肾病。,而从肾脏丢失。,自身免疫性甲状腺疾病,Graevs,病：（,1,）抗,TSH,受体,(TRAb):,阳性率,90%90%,；（,2,）抗,TP0:,阳性率超过,70%,；（,3,）抗,TG:,阳性率,20%-50%.,桥本氏甲状腺炎：（,1,）抗,TP0,，阳性率,100%,（高滴度）,（,2,）抗,TG,：阳性率,9%.,多分泌腺疾病,:,（,1,）,抗甲状旁腺抗体,风湿病学中的自身抗体小结,单单出现自身抗体并不一定,不一定是风湿性疾病,。,试验结果（）,（）常常并不能除外某种风湿性,疾病。,必须要根据临床,临床才能作出风湿性疾病的最终,诊断。,将,抗体检测与临床表现结合起来,，能够帮助,我们,鉴别这些数量众多的风湿性疾病,，同时,抗体的检测也有助于对疾病的活动度进行监,测。,（）的原因,Hyperthyroidism,甲亢；,Hypothyroidism,甲减；,hashimotos tyroiditis,甲状腺炎,对,ANA,阳性结果的解释,（）结果的,出现率取决于以下因素,：,分析系统：,由于不同厂家,ANA,检测系统的起始稀释度和稀,释因子不同，因而其,ANA,滴度结果不能直接进行比较。,区分血清（）与（）选定的滴度值，未加稀释的正常,人血清可有,1/3,的呈阳性 反应。,是,SLE,独立的诊断条件之一,。,筛查风湿病，敏感性高，尤其是高滴度,ANA,。,滴度本身与疾病活动度并不相关,，没有评价预后的,意义。,（）可出现在多种情况下，特异性差。,法测定,ANA,阴性的一些解释,风湿性疾病,SLE,多发性肌炎,干燥综合征,硬皮病,血管炎,RA,正常的健康人,女性男性，出现率,随年龄而增加,风湿性疾病患者亲属,？孕妇,药物诱导,慢性肝脏疾病,慢性肺部疾病,慢性感染,血液系统异常,恶性肿瘤,技术方面：试剂来源、方法差异、操作因素等,临床方面：,疾病固有因素：,ANA,阳性检出结果因病而异,；,经皮质激素或免疫抑制剂治疗,。,终末期肾病,。,隐蔽,ANA,：与循环中免疫复合物结合，,沉积于,组织局部。,由于大量蛋白尿,蛋白尿而从肾脏丢失,。等等,.,10,IIF,筛查,大撒网”；,风湿性疾病的诊断、,等等，,筛查,ANA,与特异性抗体检出结果的关系,目前自身抗体检测过程中主要存在以下三个问题：,1.,检测方法的差异,间接免疫荧光法,（,IIFA,）,阳性,线性免疫印迹法（,LIA,）,阳性 阴性,882 266,合 计,1148,2.,检测试剂盒不规范,3.,检测人员的知识水平差异,阴性,合 计,206,1088,507,773,713,2026,建议：,统一检测方法以统一敏感性和特异性,率的比较,总体符合率,一致性检验,2,=416.21,P,0.01,68.56%,kappa,值,=0.472,P,0.01,胡朝军 等,.,中华临床免疫和变态反应杂志,.,2011; 5(3): 179-185,统一所使用的检测试剂盒,实验室操作人员应进行技术操作常规和风湿性疾病临床,知识的培训,自身抗体检测注意事项,选择做哪些检查项目时要重点突出：,避免“大撒网 ；,解释实验结果时应考虑以下几个问题,实验方法本身的敏感性、特异性；,可靠性及实验室之间的差异性；,结合临床：,应把与之相关的一组实验结果放在一起考虑；,自身抗体的检测对于风湿性疾病的诊断、,病情评估、治疗和预后,都及其重要。但影响其检测的因素很多，如,检测方法、检测技术、操,作人员、使用仪器等等,，这些都会导致出现假阳性或假阴性，因此对,自身抗体进行检测质量控制是非常必要的。,自身抗体检测的质量控制要点,微量加样器必须定期进行校准,;,荧光显微镜：,其质量和荧光光源的强度是保证良好分辨,率的基础（,IIF,）,;,酶标仪：,应注意定期校准（,ELISA,）,;,自动化的结果扫描与分析软件（,WB,、,ID,法,）,;,具有相关资质厂家提供的检测用试剂盒,;,选择权威部门提供的自身抗体阳性与阴性质控品,;,建立完整的标准操作规程文件（,SOP,）,;,相对固定检测人员，并严格按照,SOP,文件要求进行检测,;,积极参加由国家或国际权威质控组织的室间质评。,自身抗体检测的基本原则,注意筛查试验与确诊性试验间的合理组合，切忌,盲目地全面检测,;,如,ANA,、,ANCA,、,肝抗原抗体谱筛查（,IIFA,）,：,若呈阳性或结果可疑，可进一步针对特异性靶抗,原进行相关自身抗体检测（,ELISA,、,WB/LIA,）,;,最好能采用,2,3,种不同方法学原理的实验相互佐,证，以减少实验结果误差,如,IIFA + WB/LIA,或,IIFA,+ ELISA;,南京军区南京总医院中心实验科,中国人民解放军全军临床检验医学研究所，,210002,Tel,：，,E-mail,：,11,