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单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,生物化学实验,酵母核糖核酸的分离及组份鉴定,实 验 七,一 实 验 目 的,1.,了解并掌握稀碱法提取,RNA,的基本,原理及方法。,2.,了解,RNA,的化学组成及定性鉴定的,原理与操作过程。,二 实 验 原 理,实验室,：,工业生产,：,核酸提取方法,（有活性的）,（无活性的）,苯酚法,去污剂法,盐酸胍法,稀碱法,-,-,本实验,浓盐法,组织匀浆用,苯酚,处理并离心后，,RNA,即溶于上层被酚饱,和的水相中，,DNA,和蛋白质则留在酚层中。向水层加入乙醇,后，,RNA,即以白色絮状沉淀析出，此法能较好的除去,DNA,和,蛋白质。,浓盐法使用,10%,左右,氯化钠,溶液，,90,提取,3-4h,，迅速,冷却，提取液经离心后,上清液用乙醇沉淀,RNA,。,稀碱,法使用稀碱使酵母细胞裂解，然后用酸中和，除去,蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀,RNA,。,二 实 验 原 理,酵母含,RNA,达,2.67-10.0%,，而,DNA,含量仅,为,0.03-0.516%,，为此，提取,RNA,多以酵母为原,料。,酵母中的核糖核酸可溶于碱，在碱提取液中,加酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，由,此得到粗核糖核酸。核糖核酸含有核糖，嘌呤,碱，嘧啶碱和磷酸各组分。加硫酸煮沸可使其水,解，从水解液中可以测出上述组分的存在。,二 实 验 原 理,鉴定方法：,(1),磷酸,与定磷试剂作用能产生蓝色的钼蓝沉淀。,(2),核糖,与地衣酚试剂反应呈鲜绿色。,(3),嘌呤碱,与硝酸银产生白色的嘌呤银化合物沉淀。,嘌呤碱的糖苷键比嘧啶碱的糖苷键易于水解,二 实 验 原 理,仪器：试管；试管架；烧杯；移液管；量筒；滴管；水浴锅；,离心机；离心管；锥形瓶。,原料：干酵母粉,试剂：（,1,）,0.04molL,氢氧化钠溶液；,（,2,）酸性乙醇溶液；,（,3,）,1.5molL,硫酸；,（,4,）,0.1mol/L,硝酸银溶液；,（,5,）,1mol/L,浓氨水；,（,6,）三氯化铁,-,浓盐酸溶液；,（,7,）,苔黑酚乙醇溶液,；,（,8,）抗坏血酸；,（,9,）钼酸铵试剂。,三,仪器、原料和试剂,四 操 作 步 骤,（一）,酵母,RNA,的提取,（,1,）将,2g,酵母悬浮于,10ml 0.04 mol,L,氢氧化钠溶液中；,（,2,）在沸水浴上加热,30,分钟后，将匀浆液转移至,10ml,离心,管中，冷却。配平离心,(3000r,min)15,分钟；,（,3,）将上清液缓缓倾人盛有,4ml,酸性乙醇溶液的另一,10ml,离,心管中。注意要缓缓倾入，且用胶头吸管吹匀；,（,4,）离心,(3000r,min)3,分钟，弃去上清液；,四 操 作 步 骤,（二）,RNA,成分的鉴定,在沉淀中，加入,1.5 mol,L,硫酸溶液,3ml,，在沸水浴中加热至少,10,分钟制成水解液并进行组分的鉴定。,（,1,）戊糖：取,1,支试管加入水解液,5,滴、三氯化铁浓盐酸溶液,10,滴和苔黑酚乙醇溶液,2,滴。用木夹夹好后放沸水浴中,10,分钟。注意溶液是否变成绿色，说明核糖的存在。,（,2,）嘌呤碱：在,1,支干净试管内加入水解液,5,滴，再逐滴加入,15,滴氨水，然后加入约,5,滴硝酸银溶液，放置片刻，观察有无白色嘌呤碱的银化合物沉淀。,（,3,）磷酸：取,1,支试管，加入水解液,10,滴和定磷试剂,10,滴。在水浴中加热，观察溶液颜色变化，溶液变蓝色，说明磷酸的存在。,五 思 考 题,1、如何得到高产量,RNA,的粗制品？,2、本实验,RNA,组分是什么？怎样验证的？,
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