实验细菌的芽孢染色和鞭毛染色

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验三,细菌的鞭毛染色和芽孢染色,主 讲:徐尔尼,生命科学学院生物技术系,一、目的与要求,学习细菌的芽孢染色和鞭毛染色方法。,观察芽孢杆菌形态特征和鞭毛的形态特征。,巩固无菌操作技术和显微镜的油镜使用。,二、,基本原理,1、鞭毛染色法,细菌的鞭毛很纤细，其直径通常为,0.01,0.02m,，所以不能用光学显微镜直接观察到，必须采用特殊的染色方法，才能被观察。,鞭毛染色原理是在染色前先用媒染剂处理，使它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色。,二、,基本原理,2、芽孢染色法,由于,芽孢壁厚、透性低、不易着色,，因此用,着色力强,的染色剂孔雀绿或石炭酸复红，在,加热,条件下染色，使染料不仅进入菌体也可进入芽孢内，进入菌体的染料经水洗后被脱色，而芽孢一经着色难以被水洗脱，当用对比度大的复染剂染色后，芽孢仍保留初染剂颜色，而菌体和芽孢囊被染成复染剂的颜色，使芽孢和菌体更易于区分。,三、实验器材,1,、菌种：,普通变形,杆菌、枯草芽孢杆菌,2,、染色剂：,硝酸银鞭毛染色液:(A液、B液）、芽孢染色液:（5%孔雀绿染液、0.5%番红染液）,3,、仪器或其他用具：,载玻片、生理盐水、酒精灯、木夹、接种环、双层瓶、显微镜、擦镜纸、滤纸等,四、操作步骤,1、鞭毛染色（硝酸银染色法）,取一滴无菌水，滴于玻片一端取一环菌置于无菌水中，让菌体利用鞭毛运动开 然后玻片倾斜，让菌液缓缓流向玻片的另一端 室温自然干燥 滴加染液A,3-5min,水洗 用染液B冲去残水 滴加染液B,1-1.5min,水洗,干燥 镜检,结果：菌体深褐色，鞭毛淡褐色并呈波浪形。,操作要点：,菌种的培养时间为8-10h。,玻片要求光滑、洁净。,勿用接种环涂布制片。,制片后要自然干燥，不能放在火焰上干燥。,为使鞭毛清晰可见，水洗时尽量把载玻片冲干净。,四、操作步骤,2、芽孢染色,涂片 干燥固定 滴加孔雀绿染液,夹住玻片，微火加热至蒸汽冒出，维持5min,水洗 番红复染,6min,水洗 干燥 镜检,结果：芽孢绿色，营养体红色,。,操作要点：,加热过程中，要及时补充染液，切勿让涂片干涸。,在冒蒸汽的条件下，维持足够的时间，否则,染液不易进入芽孢内。,待玻片冷却后，用缓流自来水冲洗，以免细菌被水冲掉。,尽可能地把,孔雀绿染液冲洗干净，以免影响番红的复染。,五、实验数据及处理结果,1,、根据油镜观察结果，,绘出枯草芽孢杆菌的形态特征（注意芽孢的形状及着生位置）。,2、,绘出普通变形杆菌的鞭毛形态特征。,六、,思考与讨论,1、用鞭毛染色法准确鉴定一株细菌是否具有鞭毛，要注意哪些环节？,2、若涂片中观察到的只是大量游离芽孢，很少看到芽孢囊及营养细胞，你认为这是什么原因？,3、说明芽孢染色法的原理，用简单染色法能否观察到细菌的芽孢？,下次实验项目：,放线菌的形态观察、,酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别,