化妆品微生物检验及安全技术规范比较

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,化妆品微生物检验,化妆品因含有水分，油脂，蛋白质，多元醇等，为微生物的生长创造了良好的条件，造成产品变质。,为了抑制微生物的繁殖和消费者使用过程中的产品污染，往往在化妆品中加入防腐剂,(,尼珀尔金,甲脂、乙酯、丙脂及苯氧乙醇等,),，但不能过量。,因此，化妆品一方面为微生物的生长繁殖提供了良好的环境；另一方面由于防腐剂的应用又可抑制微生物的生长。,为了避免测试结果可能出现假阴性（实际应该生长或是污染了，由于防腐剂的存在而导致结果不生长或是结果偏小），需要添加中和剂。,化妆品中常用的中和剂,样品中：,国际方法：尼泊金酯类防腐剂的中和剂：吐温,80,（,30g/L,）和卵磷脂,(3g/L)+,普通肉汤。化妆品安全技术规范：培养基成分中直接有卵磷脂（,1g,）吐温,80,（,7g,）。（稀释法也能同步起到中和的效果）,生产用水中的余氯：每,125ml,水样中加入,0.1mg,硫代硫酸钠。（注意添加方式和使用范围）,化妆品卫生标准,微生物检验方法,（,2015,版化妆品安全技术规范）,GB/T 7918.1-1987,化妆品微生物标准检验方法 总则,菌落总数 （,2015,版化妆品安全技术规范）,GB/T 7918.2-1987,化妆品微生物标准检验方法,耐热大肠菌群,（,2015,版化妆品安全技术规范）,粪大肠菌群：,GB/T 7918.3-1987,化妆品微生物标准检验方法,铜绿假单胞菌,（,2015,版化妆品安全技术规范）,GB/T 7918.4-1987,化妆品微生物标准检验方法 绿脓杆菌,金黄色葡萄球菌,（,2015,版化妆品安全技术规范）,GB/T 7918.5-1987,化妆品微生物标准检验方法 金黄色葡萄球菌,霉菌和酵母菌：,（,2015,版化妆品安全技术规范）,方法比较,2007,版化妆品卫生规范与,2015,版化妆品安全技术规范对比,：,总则,总则重点,1.具有代表性。2.,不少于2个包装,单位的取样中共取10g或10mL。3.,供检样品，应严格保持原有的包装状态。容器不应有破裂，在检验前不得打开，防止样品被污染。,4.,应置于室温阴凉干燥处，,不要冷藏或冷冻,。4.宜先取出部分样品做微生物检验。5.,严格上微生物无复测一说。（可能的因素多）,，因此对微生物检验人员要求严格。6.,生物安全,开始重视。,详细操作步骤,详细操作步骤重点,1.,所配制培养基可冷藏和冷却备用,为分步骤检测提供,基础。,2.,菌落总数和霉菌酵母菌总数,a.单位CFU/g,或,CFU/ml。,b.二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，应以四舍五入法计算。,c.“不可计”注明稀释度。Colony Forming Units,d.特有的形态和培养特性,（霉菌和酵母菌）。,样品的制备,液体样品,膏、霜、乳剂半固体状样品,固体样品,样品的制备注意事项,无菌容器、材料及操作,样品的均一性,玻璃珠,磁力搅拌,均质器,样品的检验及保管,及时检验,样品应放在室温阴凉干燥处,样品先进行微生物检验(原料)，再做其他指标,须防止微生物的再污染和扩散,测试方法：,菌落总数检验,菌落总数（,Aerobic bacterial count,）：化妆品检样,经过处理,，在一定条件下培养后（如培养基成分、培养温度、培养时间、,pH,值、需氧性质等），,1g,（,1mL,）检样中所含菌落的总数。所得结果只包括,一群,本方法规定的条件下生长的嗜中温的需氧性和兼性厌氧,菌落总数,。,测定菌落总数便于判明样品,被细菌污染,的程度，是对样品进行卫生学总评价的综合依据。,测试流程,48,小时出结果（,30-300,）：,数据,处理,混合平板的制备,细菌的培养,检查结果、观察与计数,供试液,的制备,书写检验,记录单,TTC,亦不可多加会抑制菌落生长,为便于区别化妆品中的颗粒与菌落，可在每 100mL 卵磷脂吐温 80 营养琼脂中加入 1mL 0.5的 TTC 溶液，如有细菌存在，培养后菌落呈红色，而化妆品的颗粒颜色无变化。,接种阳性菌计算回收率,推荐了解：,人员培训能力掌握的检验重要指标。,有条件可做视具体样品测试结果。,在,膏霜类化妆品,中,微生物都是吸附或附着于颗粒状的原料中,检测时不易洗脱,下来,因此,需要验证检测方法的有效性。,耐热大肠菌群,未检出,2,天，检出,3-4,天,耐热大肠菌群,Thermotolerant coliform bacteria,系一群需氧及兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌，在,44.5,培养,24h48h,能发酵乳糖产酸并产气。,该菌,主要来自人和温血动物粪便,，可作为粪便污染指标来评价化妆品的卫生质量,推断化妆品中有否污染肠道致病菌的可能。,产酸：黄色,产气：气泡,产酸产气,书写检验,记录单,不产酸不产气,增菌培养,供试液的制备,配培养基和稀释液,检查结果判断,44.50.5,24-,48h,分离培养,蛋白胨水培养,最终结果判断,44.50.5,24,2h,靛基质,特征菌落,361,1824h,双倍胆盐乳糖,EMB,琼脂,液面玫瑰红色,紫黑色,粪大肠菌群检查流程图,镜检,结果报告,根据发酵乳糖产酸产气，平板上有典型菌落，并经证实为革兰氏阴性短杆菌，靛基质试验阳性，则可报告被检样品中检出耐热大肠菌群。,铜绿假单胞菌,未检出,2,天，检出,4,天,铜绿假单胞菌（,Pseudomonas aeruginosa,）属于假单胞菌属，为革兰氏阴性杆菌，氧化酶阳性，能产生绿脓菌素。此外还能液化明胶，还原硝酸盐为亚硝酸盐，在,421,条件下能生长。,该菌对人有致病力，可使伤处化脓，引起败血症等。在自然界中分布甚广，空气、水、土壤,最终结果判断,增菌培养,供试液的制备,书写检验,记录单,分离纯化,无菌落或无特征菌落,配培养基和稀释液,革兰染色、镜检,氧化酶试验,绿脓菌素试验,生化试验 硝酸盐还原试验,42,生长试验,明胶液化试验,铜绿假单胞菌检查流程图,SCDLP,培养基,十六烷三甲基溴化铵琼脂,361,1824h,361,1824h,特征菌落,灰白色、扁平、周围有水溶性蓝绿色素,镜检,十六烷三甲基溴化铵平板,SCDLP,培养基,黄绿色菌膜,灰白色湿润,氧化酶试验,粉红,/,紫红色,绿脓菌素试验,盐酸层呈粉紫色氯仿层呈蓝绿色,硝酸盐还原产气试验,N,2,明胶液化试验,明胶培养基（高层）,明胶液化,结果报告,被检样品经增菌分离培养后，经证实为,革兰氏阴性杆菌,，氧化酶及绿脓菌素试验皆为阳性者，即可报告被检样品中检出铜绿假单胞菌；如,绿脓菌素试验阴性而液化明胶、硝酸盐还原产气和42生长试验,三者皆为阳性时，仍可报告被检样品中检出铜绿假单胞菌。,金黄色葡萄球菌,未检出,2,天，检出,3,天,金黄色葡萄球菌（,Staphylococcus aureus,）为革兰氏阳性球菌，呈葡萄状排列，无芽胞，无荚膜，能分解甘露醇，血浆凝固酶阳性。,该菌是葡萄球菌中对人类致病力最强的一种，能引起人体局部化脓性病灶，严重时可导致败血症。,革兰染色、镜检,生化试验,:,血浆凝固酶试验,甘露醇发酵试验,最终结果判断,增菌培养,供试品的处理,书写检验,记录单,分离纯化,无菌落或无特征菌落,配培养基和稀释液,361,361,SCDLP,培养基或,7.5%NaCl,肉汤,24,2,h,Baird Parkers,或血琼脂,2448h,特征菌落,金黄色葡萄球菌检查流程图,镜检,耐盐分,Baird Parkers,平板,灰,/,黑色,血浆凝固酶试验,血浆凝块,液态血浆,甘露醇高盐琼脂,结果报告,凡在上述选择平板上有可疑菌落生长，经染色镜检，证明为,革兰氏阳性葡萄球菌,，并能,发酵甘露醇,产酸，,血浆凝固酶,试验阳性者，可报告被检样品检出金黄色葡萄球菌。,霉菌和酵母菌,霉菌和酵母菌数测定（,Determination of molds and yeast count,）化妆品检样在一定条件下培养后，,1g,或,1mL,化妆品中所污染的活的霉菌和酵母菌数量，藉以判明化妆品被霉菌和酵母菌污染程度及其一般卫生状况。,本方法根据霉菌和酵母菌,特有的形态和培养特性,，在虎红培养基上，置,282,培养,5d,，计算所生长的霉菌和酵母菌数。（,5-50,）,革兰氏染色,检验结果正确的保证,设备方面：,恒温培养设备,高压灭菌器（验证）,超净工作台（生物安全柜）,均质器,(,旋涡混合器,),天平（,0.1g,）,显微镜（可要可不要无硬性要求）,压力灭菌器的检定（强检）,出厂合格证：只是表示该仪器设备符合出厂标准。,安全需要强检（安全阀和压力表）。,至于温度性能紧急时可以用厂家校准证书替代。,问题,1,：,量值得传递过程？结论？,量值溯源过程？,常规洁净工作台,？,试剂要求：,无菌容器（？）及溶液；,试剂充足；,空间充分（,10,平方米,2,人操作）；,培养基的制备（有效期的确认）与质量控制（促生长与回收率的验证）推荐项,；,目前大部分微生物实验室,人员操作方面：,无菌操作，避免污染；,一定专业技术或工作经验（招聘与外部审核时）,相互协作；,测试结果的证明。,日常维护,：,设备的计量与保证；,超净台及时清洁与杀菌（操作前后半小时）；,检验后材料的及时处理；,环境卫生（沉降菌的检测每周）。,油性样品如何处理,稀释液生理盐水-极性溶剂、液体石蜡-非极性溶剂、吐温80-非离子型表面活性剂，分子一端是亲水基团，一端是亲油基团，常用作增溶剂和油/水乳化剂。决定了加入的顺序。,问题2,微生物许可检验项目,问题3,注：,指甲油卸除液不需要测微生物项目。,乙醇含量75%（w/w）者不需要测微生物项目。,配方中没有微生物抑制作用成分的产品（如物理脱毛类产品、纯植物染发类产品等）需测微生物项目。,一个样品包装内有两个以上独立小包装或,分隔（如粉饼、眼影、腮红,等），且只有一个产品名称，原料成分不同的样品，应当,分别,检验相应项目；非独立小包装或无分隔部分，且各部分除着色剂以外的其他原料成分相同的样品，应当按说明书使用方法确定是否分别进行检验。,重点讨论,谢 谢 大 家！,