免疫检测新技术课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,章节安排,A数,第一节生物素亲和素免疫检测新技术,第二节免疫胶体金检测新技术,第三节免疫电镜技术,第四节免疫转印技术,Valadon onry.,ch Asposeslides for NET 4o dient P,Evaluation only.,Created with Aspose Slides for NET 4.0 dient Profilo,71,Copyright 2019-2019Aspose Pty L,目的与要求,、了解标生物素亲和素免疫检测技术的原理及,种类,2、理解免疫胶体金检测技术的原理及常用的检,测方法。,3、了解免疫电镜技术的应用。,4、了解免疫转印技术的原理及应用。,难点与重点,重点:免疫胶体金检测技术的原理。,难点:免疫胶体金检测技术的原理,Valadon onry.,ch Asposeslides for NET 4o dient P,Evaluation only.,Created with Aspose Slides for NET 4.0 dient Profilo,71,Copyright 2019-2019Aspose Pty L,第一节生物素-亲和素免疫检测新技术,cce(dr,biotin label reagent,array support,涉涉、涉,incubation with,ce,Valadon onry.,ch Asposeslides for NET 4o dient P,Evaluation only.,Created with Aspose Slides for NET 4.0 dient Profilo,71,Copyright 2019-2019Aspose Pty L,利用生物素与亲和素专一性结合以及生物素、,亲和素既可标记抗原或抗体,又可被标记物所,标记的特性,可建立生物素-亲和素系统来显示,抗原抗体特异性反应的各种免疫检测技术。,Valadon onry.,ch Asposeslides for NET 4o dient P,Evaluation only.,Created with Aspose Slides for NET 4.0 dient Profilo,71,Copyright 2019-2019Aspose Pty L,生物素与亲和素的特性,1、生物素生物素(biotin是一种广泛分布于动、植物,组织的生长因子,亦称辅酶R或维生素H,尤以蛋黄、,肝、肾组织中含量较高。结构式中的咪唑酮环是与亲,和素结合的主要部位。利用生物素的羧基加以化学修,饰后,可以制成各种活性基团的衍生物,称为活化生,物素。针对不同的被标记物可以应用不同类型的活化,生物素,Vaudon onl.,ch Asposeslides for NET 4o dient P,Evaluation only.,Created with Aspose Slides for NET 4.0 dient Profilo,71,Copyright 2019-2019Aspose Pty L,生物素与亲和素的特性,2、亲和素(avidin):是一种存在于鸡蛋清中的碱性糖,蛋白,结晶呈白色粉末状,易溶于水。在pH213,缓冲液中性质稳定,消化道多种蛋白水解酶不能使其,失活。它对热的耐受性较强,经80温度作用2min,仍保持活性。亲和素是由4个相同的亚单位组成的四,聚体,富含色氨酸,通过色氨酸与生物素的咪唑环呈,十分牢固的结合。亲和素的每个亚单位可结合1个分,子生物素,因此1个亲和素分子可结合4个,链霉亲和素,Valadon onry.,ch Asposeslides for NET 4o dient P,Evaluation only.,Created with Aspose Slides for NET 4.0 dient Profilo,71,Copyright 2019-2019Aspose Pty L,、亲和素生物素系统免疫检测技术类型,1、亲和素-生物素-过氧化物酶技术(ABC法),(1)原理:ABC法是利用亲和素分别连接生物素,标记的第2抗体和生物素标记的酶。生物素标记的第,2抗体与ABC复合物相连接,最后加底物进行显色反,应。其中,ABC复合物是将过氧化酶结合在生物素,上,再将生物素-过氧化酶连接物与过量的亲和素蛋,白反应而制备的,+,Valadon onry.,ch Asposeslides for NET 4o dient P,Evaluation only.,Created with Aspose Slides for NET 4.0 dient Profilo,71,Copyright 2019-2019Aspose Pty L,亲和素生物素系统免疫检测技术类型,1、亲和素生物素一过氧化物酶技术(ABC法),(2)应用,组织切片和细胞悬液中抗原的检测,在免疫电镜中的应用标记抗体渗透性是免疫,电镜技术的关键,小分子的生物素就可得到更高的,渗透力,且生物素化抗体可在组织包埋前或包埋后,加入,因此ABC法进行抗原的亚细胞水平定位分析,得到较好的应用,思e图,Argon on,ch Asposeslides for NET 4o dient P,Evaluation only.,Created with Aspose Slides for NET 4.0 dient Profilo,71,Copyright 2019-2019Aspose Pty L,目前最灵敏的免疫组化二抗检测系统,由于亲和素和生物素有极强的亲和力(其亲和力,比抗体和大多数抗原的亲和力高100万倍),因而亲,和素和生物之间的结合是不可逆的。此外,亲和素,具有4个生物素结合位点,大多数蛋白质包括酶可以,和多个生物素分子结合。利用这些特征,可以把亲,和素和生物素化的酶结合为大分子复合物(ABCs),Valadon onry.,ch Asposeslides for NET 4o dient P,Evaluation only.,Created with Aspose Slides for NET 4.0 dient Profilo,71,Copyright 2019-2019Aspose Pty L,Add Primary Arlibod,使用步骤:1.加入一抗,与切片孵育。如加入兔抗,肿瘤相关抗原的抗体。2.加入生物素化二抗,如生物,素化抗-兔lgG。3.加入亲和素生物素化酶复合物,(ABC)。4.加入酶作用底物,定位抗原,Valadon onry.,ch Asposeslides for NET 4o dient P,Evaluation only.,Created with Aspose Slides for NET 4.0 dient Profilo,71,Copyright 2019-2019Aspose Pty L,