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Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,胶体金组研发(yn f)思路,第一页，共18页。,明确对象,检测方法(fngf)-胶体金法,胶体金的制备,标金过程,试纸条的组成,性能评估,投入市场,目录(ml),第二页，共18页。,1,明确(mngqu)对象,第三页，共18页。,猪瘟,犬细小,犬瘟,第四页，共18页。,猪瘟病毒是猪瘟的病原,主要通过直接接触，或由于接触污染的媒介物而发病。,临床表现：,最急性型：发病急，高热稽留(jli)，痉挛，抽搐，皮肤和可视粘膜发绀，有出血点，很快死亡。,急性型和亚急性型：高热，精神沉郁，食欲减退，初便秘，后腹泻，公猪包皮积液，离心端有出血点或红斑不褪色，少数神经症状，死亡率高。,慢性型：食欲时好时坏，体温时高时低，便秘与腹泻交替进行。耳尖、尾根和四肢皮肤经常发紫坏死，甚至干脱,消瘦，全身衰竭，后肢麻痹，行走不稳或不能立。,繁殖障碍型（母猪带毒综合症）：早中期感染，母猪流产、死产、木乃伊胎等；孕后期感染，外表正常，仔猪也终身带毒，免疫耐受（不产生免答）。,猪瘟(zh wn),第五页，共18页。,胶体金的制备(zhbi),从3个重复批次的试纸条中分别随机抽取一定数量试纸条，分别测试阴性检测液和阳性检测液，考察每一批次试纸条的线条是否均一、颜色深浅是否相当、检测结果是否一致。,急性型和亚急性型：高热，精神沉郁，食欲减退，初便秘，后腹泻，公猪包皮积液，离心端有出血点或红斑不褪色，少数神经症状，死亡率高。,将制作好的试纸条放入密封袋内，内置干燥剂片，置于45C烘箱内，分别于第7天、第14天、第21天、第28天、第35天、第42天取出，测试试纸条的稳定性。,采用化学还原法制备胶体金时，通过改变反应体系中氯金酸与还原剂的比例（增加(zngji)或减少还原剂的量）可得到所需不同直径的金颗粒。,不同环境下的稳定性好、易保存、运输，在室温下可长期保存，不需冷藏。,也需要在试验中进行梯度试验,反复比较不同标记量的标记物在破坏试验中的稳定性,确定最佳的标记量。,pH：在pH接近和稍高于蛋白质的等电点时,胶体金蛋白质的吸附力最强;pH过高过低都不利于两者的结合,因此标记时选择精密的酸碱度测定仪器或者试纸条,采用不同方法重复校正,并进行梯度试验找到最佳的标记pH。,不同环境下的稳定性好、易保存、运输，在室温下可长期保存，不需冷藏。,孕后期感染，外表正常，仔猪也终身带毒，免疫耐受（不产生免答）。,蛋白：过多蛋白质标记,造成浪费的同时引起试纸的拖带现象;过少蛋白质标记,导致胶体金标记不完全,从而降低试纸的灵敏度及假阳性现象的出现(chxin)。,不同环境下的稳定性好、易保存、运输，在室温下可长期保存，不需冷藏。,操作快速、短时间获得检测结果，一般1015 分钟即可得出结论，便于大批量筛查，取量少，检测成本均较低，无需特殊仪器。,胶体金的制备并不难，但要制好高质量的胶体金却也并非易事。,稳定性测试(csh)(加速老化试验）,适用范围广泛，检测标本种类多，可用于查血、尿液或粪便，因而适合各种检查。,2,检测(jin c)方法-胶体金法,第六页，共18页。,不同环境下的稳定性好、易保,存,、运输,，,在室温下可长期,保,存，不需冷藏,。,1,操作简便、易于肉眼观察结果，不需经过特殊复杂培训,，操作者安全，对环境无污染。,2,操作快速、短时间获得检测结果，一般1015 分钟即可得出结论，便于大批量筛查,，取量少，检测成本均较低，无需特殊仪器。,3,适用范围广泛，检测标本种类多，可用于查血、尿液或粪便，因而适合各种检查,。特异性较强、结果有可重复性。,4,第七页，共18页。,3,胶体金的制备(zhbi),第八页，共18页。,胶体金的制备并不难，但要制好高质量的胶体金却也并非易事。因此对每次制好的胶体金应加以检定，主要检查指标有颗粒大小，粒径的均一程度及有无(yu w)凝集颗粒等。,采用化学还原法制备胶体金时，通过改变反应体系中氯金酸与还原剂的比例（增加(zngji)或减少还原剂的量）可得到所需不同直径的金颗粒。,要还原材料,：,氯金酸,（,HAuCl4）,所,用还原剂,：,柠檬酸钠,还原制备金溶胶,第九页，共18页。,标金(biojn)过程,4,第十页，共18页。,复溶,PH,蛋白,封闭液,离心,调试,胶体金的标记,第十一页，共18页。,pH：在pH接近和稍高于蛋白质的等电点时,胶体金蛋白质的吸附力最强;pH过高过低都不利于两者的结合,因此标记时选择精密的酸碱度测定仪器或者试纸条,采用不同方法重复校正,并进行梯度试验找到最佳的标记pH。,蛋白：过多蛋白质标记,造成浪费的同时引起试纸的拖带现象;过少蛋白质标记,导致胶体金标记不完全,从而降低试纸的灵敏度及假阳性现象的出现(chxin)。也需要在试验中进行梯度试验,反复比较不同标记量的标记物在破坏试验中的稳定性,确定最佳的标记量。,第十二页，共18页。,5,试纸条(zh tio)的组成,第十三页，共18页。,检测线,质检线,吸收垫,样品垫,硝酸纤维素膜,连接垫,（胶体金垫）,背衬,（底板）,第十四页，共18页。,特异性较强、结果有可重复性。,不同环境下的稳定性好、易保存、运输，在室温下可长期保存，不需冷藏。,猪瘟病毒是猪瘟的病原,主要通过直接接触，或由于接触污染的媒介物而发病。,蛋白：过多蛋白质标记,造成浪费的同时引起试纸的拖带现象;过少蛋白质标记,导致胶体金标记不完全,从而降低试纸的灵敏度及假阳性现象的出现(chxin)。,试纸条(zh tio)的组成,特异性检验是正确认识试剂盒对结构类似物抗干扰能力的指标。,将制作好的试纸条放入密封袋内，内置干燥剂片，置于45C烘箱内，分别于第7天、第14天、第21天、第28天、第35天、第42天取出，测试试纸条的稳定性。,操作快速、短时间获得检测结果，一般1015 分钟即可得出结论，便于大批量筛查，取量少，检测成本均较低，无需特殊仪器。,检测方法(fngf)-胶体金法,最急性型：发病急，高热稽留(jli)，痉挛，抽搐，皮肤和可视粘膜发绀，有出血点，很快死亡。,胶体金的制备并不难，但要制好高质量的胶体金却也并非易事。,6,性能(xngnng)评估,第十五页，共18页。,性能(xngnng)评估,从3个重复批次的试纸条中分别随机抽取一定数量试纸条，分别测试阴性检测液和阳性检测液，考察每一批次试纸条的线条是否均一、颜色深浅是否相当、检测结果是否一致。,将制作好的试纸条放入密封袋内，内置干燥剂片，置于45C烘箱内，分别于第7天、第14天、第21天、第28天、第35天、第42天取出，测试试纸条的稳定性。,重复性测试(csh),稳定性测试(csh)(加速老化试验）,特异性测试,特异性检验是正确认识试剂盒对结构类似物抗干扰能力的指标。,第十六页，共18页。,7,投入(tur)市场,第十七页，共18页。,谢谢(xi xie)聆听！,THANK YOU VERY,MUCH!,第十八页，共18页。,
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