级DNS法测定还原糖含量最终版

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,目的,掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法,原理,1.还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖。,2.在NaOH和丙三醇存在下，,DNS,与还原糖共热后被还原生成氨基化合物，在过量的碱性溶液中此化合物呈桔红色，,在一定范围内，还原糖的量与桔红色物质颜色的深浅成正比关系,，利用分光光度计，在550nm波长下测定吸光度，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。,3.由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。,反应化学方程式,桔红色,黄色,实验材料、主要仪器和试剂,1、试剂,（1）1mg/mL葡萄糖标准液,准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100mL,（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂,将6.3g DNS和262mL 2Mol/L NaOH溶液，加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。,（3）碘-碘化钾溶液,（4）6mol/l NaOH,（5）0.1%酚酞指示剂,（6）6mol/l HCl溶液,2、材料,淀粉,3、器材 分光光度计，天平，水浴锅，电子万用炉，试管若干,实验步骤,一、制作葡萄糖标曲线,取10支试管，按下表加入试剂,试剂,0,1,2,3,4,5,6,7,8,9,葡萄糖标准液/ml,0,0.2,0.4,0.5,0.6,0.7,0.8,1.0,1.2,1.4,蒸馏水/ml,2.0,1.8,1.6,1.5,1.4,1.3,1.2,1.0,0.8,0.6,DNS/ml,1.5,1.5,1.5,1.5,1.5,1.5,1.5,1.5,1.5,1.5,葡萄糖含量/mg,0,0.2,0.4,0.5,0.6,0.7,0.8,1.0,1.2,1.4,混合均匀,沸水中加热5min取出,冷水冷却至室温,各管加入21.5ml蒸馏水,测定吸光度并绘制标准曲线,（550nm波长处）,二、样品中还原糖提取,准确称取0.65g面粉，,放在100ml烧杯中，先,以少量蒸馏水调成,糊状，然后加入15ml,蒸馏水，混匀，于50恒温保温20min，时搅拌，使还原糖浸出，过滤，将滤液全部收集在25ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，即为还原糖提取液。,锥形瓶（0.5g面粉+10ml盐酸+蒸馏水15ml）加热,30min,检验水解是否完成,（,I-KI,溶液）,冷却至室温后,中和并定容到,50ml,过滤取,10ml,于,100ml,容量瓶,取滤液又定容至刻度,（即为稀释,50,倍）,三,.,总糖提取,四、样品中含糖量的测定,试剂,空白,还原糖,总糖,样品溶液/ml,0,1.0,1.0,蒸馏水/ml,2.0,1.0,1.0,水杨酸/ml,1.5,1.5,1.5,将各管溶液混合均匀后在沸水中加热5min，取出后立即用冷水冷却至室温，在向各管加入21.5ml蒸馏水，摇匀,在波长为550nm处测定吸光度，并比对标准曲线得出糖的含量,结果处理,按下列公式计算样品中还原糖与总糖的百分含量：,还原糖%=(m*100)/(M*1000),总糖%=（m*稀释倍数*0.9*100）/(M*1000),式中：m根据标准曲线所得糖含量，mg,M所称样品质量，g,祝实验成功！,The end,谢谢！,