高效液相色谱仪(HPLC)的保养课件

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,高效液相色谱仪,(HPLC),的保养,1,HPLC,的环境设置：,HPLC,的日常操作条件：温度：,10,30,；相对湿度,80,；最好是恒温、恒湿，远离高电磁干扰、高振动设备，有良好的通风设施。,2,HPLC,用水可以通过以下几个方面来得到：,1,专门的纯水机或超纯水机；,2,去离子水重蒸；,3,二次或三次重蒸水；,4,采用类似家用的纯水机；,5,市场上瓶装的纯净水或蒸馏水；,6,其它途径；,3,不管采用何种途径，配制流动相应用新鲜水，水质越高放置时间越短。,理想的,HPLC,用水应为,18.2,的超纯水，并通过,0.22um,的滤膜，除去热源、有机物、无机离子及空气等。,4,HPLC,六通阀进样器的使用及保养,六通阀进样器是高效液相色谱系统中最理想的进样器，它是由圆形密封垫,(,转子,),和固定底座,(,定子,),组成。美国,Rheodyne,公司的六通阀进样器最为通用，各大,HPLC,仪器制造商均以此产品作为仪器的进样器。,5,工作原理,手柄位进样,(Load),位置时，样品经微量进样针从进样孔注射进定量环，定量环充满后，多余样品从放空孔排出；,将手柄转动至进样,(Inject),位置时，阀与液相流路接通，由泵输送的流动相冲洗定量环，推动样品进入液相分析柱进行分析。,6,虽然六通阀进样器具有结构简单、使用方便、寿命长、日常无需维修等特点，但正确的使用和维护将能增加使用寿命，保护周边设备，同时增加分析准确度。如使用得当的话，六通阀进样器一般可连续进样,3,万次而无需维修。,7,手柄处于,Load,和,Inject,之间时，由于暂时堵住了流路，流路中压力骤增，再转到进样位，过高的压力在柱头上引起损坏，所以应尽快转动阀，不能停留在中途。在,HPLC,系统中使用的注射器针头有别于气相色谱，是平头注射器。一方面，针头外侧紧贴进样器密封管内侧，密封性能好，不漏液，不引入空气；另一方面，也防止了针头刺坏密封组件及定子。,8,六通阀进样器的进样方式有部分装液法和完全装液法两种。使用部分装液法进样时，进样量最多为定量环体积的,75,，如,20l,的定量环最多进样,15l,的样品，并且要求每次进样体积准确、相同；使用完全装液法进样时，,进样量最少为定量环体积的,3,至,5,倍，即,20l,的定量环最少进样,60,至,100l,的样品，,这样才能完全置换样品定量环内残留的溶液，达到所要求的精密度及重现性。推荐采用,100ul,的平头进样针配合,20ul,满环进样。,9,可根据进样体积的需要自已制作定量环，一般不要求精确计算定量环的体积，譬如，一根名义上,10l,的定量环，实际是,9l,还是,1ll,并不重要，因为被测样品和校正样品的进样体积保持一致，在计算结果时误差都被抵消了。,10,进样样品要求无微粒和能阻死针头及进样阀的物质，样品溶液均要用,0,45m,的滤膜过滤。防止微粒阻塞进样阀和减少对进样阀的磨损。为防止缓冲盐和其它残留物质留在进样系统中，每次结束后应冲洗进样器，通常用不含盐的稀释剂、水或不含盐的流动相冲洗，在进样阀的,Load,和,Inject,位置反复冲洗，再用无纤维纸擦净注射器针头的外侧。,11,泵的保养：,使用流动相尽量要清洁；,进液处的砂芯过滤头要经常清洗；,流动相交换时要防止沉淀；,避免泵内堵塞或有气泡；,每次分析结束后，要反复冲洗进样口，防止样品的交叉污染；,12,柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动；,当柱子和色谱仪联结时，阀件或管路一定要清洗干净；,要注意流动相的脱气；,避免使用高粘度的溶剂作为流动相；,进样样品要提纯；,严格控制进样量；,每天分析工作结束后，要清洗进样阀中残留的样品；,每天分析测定结束后，都要用适当的溶剂来清洗柱；,若分析柱长期不使用，应用适当有机溶剂保存并封闭；,柱的保养：,13,紫外灯的保养：,在分析前、柱平衡得差不多时，打开检测器；在分析完成后，马上关闭检测器。,样品池要保养,14,