卫生样品的采集与处理课件

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卫生样品的采集与处理,(ppt),样品的采集和保存样品的预处理*分析方法的选择及试样的测定,分析数据的处理分析报告的撰写,卫生分析工作的第一步:样品的采集,卫生样品分析的一般程序:,影响结果准确度,第一节,样品的采取和保存,总体:分析对象的全体,一、几个基本概念,样品:从总体中抽出部分个体,代表全部待分析物料的平均组成。,采样目的:获得能代表全部待分析总体平均组成的样品。,采样:按一定规则,从总体中抽取分析样品的过程。,二、样品采集的原则,代表性、典型性和适时性,1.,代表性,采集的样品必须能充分代表被分析总体的性质,2.,典型性,根据检测目的,采集的样品必须能充分说明此目的的典型样品,3.,适时性,某些样品的采集要有严格的时间概念,非典时期的支原体与衣原体之争,当广东开始非典流行时,国内权威机构报道非典是由“衣原体”导致的时候,我的第一个反应是怀疑。但基于以下理由觉得迷惑:,一、依据明显缺乏科学性:医学研究绝对不是这样的,仅仅从几个尸解病人的标本中发现衣原体“包涵体”(在细胞浆或细胞核内形成的具有一定形态的病变结构)就仓促下结论是违背科学精神的。,二、治疗效果:如果非典真的是衣原体造成的,那就一点也不可怕了。因为只要正确使用抗菌素,衣原体感染是可以控制的。当时那么多国内甚至国际一流的专家会不考虑到这个?,后来的发展证实了我的看法,相信国内很多医务人员也经历过和我一样的疑惑。,那么,为什么在非典的病人标本上会发现衣原体“包涵体”呢?这其实是病原学研究时,最基本的需要分辨的,即“宿主”还是“过客”这一最基本的问题。,“宿主”是指病原体是造成疾病的病因;“过客”是指病原体只是在疾病出现后,由于环境的改变,适合它在此繁殖,即上面文章中所说的“继发感染”。,具体到上述的在非典的病人标本上会发现衣原体“包涵体”的原因是这样:非典病人受到冠状病毒的侵犯后,肺部环境发生了巨大的变化。原来衣原体无法生存的地方变成衣原体生长的“沃土”,从而出现了继发衣原体感染。,三、各类样品的采集方法,(一)空气,大气监测,工作场所空气中有害成分监测,室内空气质量监测,公共场所空气质量监测,样品的采集方法,直接采集,浓缩采集,1.,直接采集法,容器预先抽真空,在现场采集样品;或通过采样泵将气体样品直接引进容器。,2.,浓缩采集法(富集法),空气样品中待测组分浓度较低时,使用此法。,溶液吸收法,固体吸收剂阻留法,滤纸滤膜阻留法,冷阱收集法,3.,采样装置,收集器,流量计,采样动力,基本组成,(二)水,见书,p10,(三)食品,检测项目,营养成分,功效成分,鲜度,添加剂,污染物,取样方法,随机取样,系统取样,指定代表性样品,小龙虾致肌溶解,肌溶解,(rhabdomyolysis),是当肌肉受伤时,肌肉中的一种叫做肌球素,(Myoglobin),的,蛋白质,被释放出来,进入血液循环系统。这种蛋白质在肾脏会被过滤,并可能被分解成有毒物质,危害肾脏,这可能就是为啥我们会看到酱油尿。,造成肌溶解的原因有很多,常见的是酗酒、外伤、癫痫、机体过劳、肌肉缺血性萎缩、,遗传,原因等等,但某些药物也可能造成这种病,几乎每个地方都提到的是降胆固醇药,statins,、可卡因、安非他明、海洛因,等等。,龙虾中毒引发的肌肉损伤和肌红蛋白血症有如下可能原因:,1),龙虾被重金属污染,,2),龙虾被某种细菌污染,,3),龙虾中还有某种化学物质能抑制线粒体的功能,具体原因等待卫生部的调查。,(四)生物材料,生物材料:人或动物的体液、排泄物、,分泌物和脏器等,1.,血,包 括:全血、血浆和血清,采样部位:手指血、耳垂血和静脉血,保存方法:,置于聚四氟乙烯、聚乙烯或,硬质玻璃管中密塞,,4,下,保存,长期保存在,-20,。,2.,尿,取样方法,24,小时混合尿,晨尿,某时间的一次尿,采样仪器:聚乙烯瓶或用硝酸溶液,浸泡过的玻璃瓶,3.,毛发,取样方法:枕部距头皮,2cm,左右的发段,4.,组织,取样:肝、肾、肺等脏器,冷冻保存,第二节,样品的处理,一、样品处理的目的和要求,1.,样品处理的目的,使被测组分从复杂样品中分离出来,制成可被测定的形式。,可通过衍生化使难测定物质转化为易于测定的物质形式,去除干扰测定的物质,必要时进行浓缩富集,2.,样品处理的要求,必须使样品分解完全,回收率足够高,不能引入干扰测定的物质和待测物质,方法简单易行,速度快,二、样品溶液的制备方法,1.,溶解法,水溶法,酸浸出法,碱浸出法,有机溶剂浸出法,2.,分解法,低温灰化法(高频等离子,体技术,),高温灰化法(,450-550,),硝酸,-,硫酸法,硝酸,-,高氯酸(,H,2,O,2,),法,硝酸,-,硫酸,-,高氯酸法,密封加压消化法,干灰化法,湿消化法,微波溶样法,部分分解法,三、常用的分离与富集方法,问题的提出,实际样品的复杂性,干扰的消除,控制实验条件,使用掩蔽剂,分离,分析方法灵敏度的局限性,满足对灵敏度的要求,选择灵敏度高的方法,富集,例:,海水中,U,(,IV,)的测定,C,=1 3,g/L,难以测定,富集为,C,=100 200,g/L,可以测定,分离效果,干扰成分减少至不再干扰,待测组分有效回收,分离效果的好坏用回收率衡量,常量组分,含量,1%,,,回收率,99%,以上,微量组分,含量,95%,或更低,常用分离方法,沉淀与共沉淀分离法,溶剂萃取分离法,固相萃取与微萃取法,色谱分超临界流体萃取法,挥发和蒸馏分离法,膜分离法,(一)溶剂萃取分离法,在含有被分离物质的水溶液中,加入萃取剂和与水不相混溶的有机溶剂,振荡,利用物质在两相中的分配不同的性质,使一些组分进入有机相中,使另一些组分仍留在水相中,从而达到分离的目的。,1.,萃取分离的基本原理,物质,亲水性,疏水性,离子型化合物,极性,共价键化合物,弱极性或非极性,相互转换,萃取分离的实质,将待萃取组分由亲水性转化为疏水性,使其萃入有机相中。,例,.8-,羟基喹啉,-CHCl,3,对,Al,3+,的萃取,萃取的反过程(将组分从有机溶液中萃取到水溶液中)。,反萃取,例,.8-,羟基喹啉,-,CHCl,3,对,Al,3+,的萃取,3,亲水,疏水,溶于,CHCl,3,8-,羟基喹啉,CHCl,3,萃取剂,溶剂,水合离子的正电性被中和,亲水的水分子被疏水有机大分子取代,(1),分配系数,有机溶剂从水相中萃取溶质,A,,若,A,在两相中的存在形态相同,平衡时,在有机相的浓度为,Ao,水相的浓度为,Aw,之比,用,K,D,表示。,A(w)A(o),萃取平衡,分配定律,(2),分配比,如果溶质,A,在两相中存在多种型体,如离解、缔,合、络合、聚合等,则把溶质,A,在两相中各种型体的浓度之和相比,称为分配比,D,。,溶质在两相中存在形式完全相同时,,D,K,D,。,两相体积相等时,若,D,1,,溶质进入有机相的量多。,在实际工作中,一般要求,D,至少大于,10,。,(,3,)萃取率,E,萃取效率和分配比的关系是:,式中,V,w,/,V,o,称为相比。,萃取率由分配比和相比决定,在实际分离工作中,萃取率,E,最有意义。,最常采用,-,等体积溶剂进行萃取,即相比为,1,,此时萃取率可写成,:,如果,D,值较小而要得到较高的萃取效率,可以采取连续多次萃取。,一次萃取:,E,90%,以上,,D10,E,90%,以上,,D100,n,次萃取后,式中,,n,为萃取次数,,m,为被萃取物质的总量,,m,n,为经,n,次萃取后留在水相中被萃取物质的量,,V,w,为水相体积,,V,o,为每次萃取所用有机溶剂的体积。,例,2.,用,8-,羟基喹啉氯仿溶液,于,pH=7.0,时从水溶液中萃取,La,3+,,已知它在两相中的分配比,D,=43,。现取含,La,3+,为,lmg,mL,-1,的水溶液,20.00mL,,用,20.00mL,萃取液,计算一次萃取和分两次萃取(每次,10.00mL,)的萃取效率。,解,:,一次萃取,两次萃取,上例结果说明,用同样数量的萃取液,分多次萃取比一次萃取的效率高。,2.,重要的萃取体系,根据组分的性质不同,萃取体系分:,用于萃取的有机溶剂称为萃取溶剂,简单分子萃取体系,螯合物萃取体系,离子缔合物萃取体系,溶剂化合物萃取体系,3.,萃取条件的选择,萃取溶剂的选择,溶液酸度的选择,其它试剂的选择,4.,萃取操作,(二)固相萃取法,Solid,phase extraction,,,SPE,固相萃取:液,-,固分离,分离载体:一般为硅氧基甲烷,,颗粒直径,40-80,m,分离原理,:,利用样品中被分离组分与萃取柱中固定相的作用力(吸附、分配和离子交换等)不同而进行分离。,固相萃取柱,固相萃取装置:,由柱管、筛板和固定相三部分组成,图,2-3,固相萃取过程,四个步骤:活化 装样 清洗 洗脱,选适宜,SPE,管,加入样品溶液到载体,洗涤除去共存物,洗脱待分离物质,润湿载体,固相萃取法一般程序为:,固相萃取柱,始于,1992,年,加拿大的,Janusz Pawliszyn,(三)固相微萃取技术,(四)超临界流体萃取法,1.,原理,超临界流体萃取,:,气,-,固萃取,萃取剂,:,超临界条件下的气体,特 点:粘度低,接近零的表面张力,比很多液体容易渗透固体颗粒,易于除去。,超临界萃取分离设备组成及流程:,
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