EDC交联羧甲基甲壳素-制备组织工程皮肤支架课件

Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,EDC,交联羧甲基甲壳素 制备组织工程皮肤支架,演讲人：邢涛,指导老师：吴奕光,EDC交联羧甲基甲壳素,1,组织工程皮肤,组织工程皮肤是一种较为完善的组织工程化组织，是将真皮成纤维细胞与细胞外基质替代物混合制成人工皮肤，或单纯使用多孔的细胞外基质替代真皮植入创面，上面移植上皮细胞覆盖或待自身上皮覆盖取代病损的皮肤。在组织工程中，种子细胞、可降解支架材料和细胞生长调节因子并称为组织工程的三大基本要素，其中支架材料在组织工程研究中起到中心作用，它为特定的细胞提供细胞支撑作用并起到模板作用，引导组织再生和控制组织结构。,组织工程皮肤 组织工程皮肤是一种较为完善的组织工程化,2,1,2,羧甲基甲壳素的制备及表征,3,组织工程支架的制备与表征,课题背景及意义,4,三维多孔支架生物学评价,12 羧甲基甲壳素的制备及表征3组织工程支架的制备与表征,3,国外已经成功制备用于深度烧伤的修复支架，美国已经有多个人工皮肤产品，并占据了许多世界市场份额，但价格昂贵,目前国内关于组织工程支架的研究尚处于摸索阶段，尽快开展组织工程支架的研究具有重要的理论与实际应用价值,.,课题背景,国外已经成功制备用于深度烧伤的修复支架，美国已经有多个人工皮,4,本课题创新点和意义：,一、首次用,EDC,交联无毒、生物相容性好、天然羧甲基甲壳素制备单一成分的皮肤组织工程支架,.,二、合成的三维多孔支架无毒，生物相容性好，成本相对较低，具有很强的实际应用价值,.,本课题创新点和意义：一、首次用EDC交联无毒、生物相容性好、,5,京尼平交联,辐射交联,EDC/DCC,交联,醛交联,DTH,交联,环氧类交联,组织工程支架,支架的交联方式：,京尼平交联辐射交联EDC/DCC交联醛交联DTH交联环氧类交,6,方案：,Second step,Third step,First step,不同取代度的羧甲基甲壳素的制备,EDC,交联支架及表征,支架的生物学评价,方案：Second stepThird stepFirst,7,羧甲基甲壳素的制备示意图：,羧甲基甲壳素的制备示意图：,8,不同取代度的羧甲基甲壳素的制备：,甲壳素：氯乙酸：氢氧化钠,(,摩尔比,),碱液浓度,碱化条件,温度,反应时间,脱乙酰度,（,DD,）,取代度,（,DS,）,1:3.7:8.27,45%(w/w),抽真空,0.5h,后，在,-20,下,12h,60,6h,0.4788,1.1980,1:3.7:9,45%(w/w),抽真空,0.5h,后，在,-20,下,12h,60,8h,0.4969,0.9442,1:3.5:8,45%(w/w),抽真空,0.5h,后，在,-20,下,12h,70,6h,0.5335,0.6886,1:1.8:7.6,45%(w/w),抽真空,0.5h,后，在,-20,下,12h,60,6h,0.4402,0.5613,1:2.8:8.6,45%(w/w),抽真空,0.5h,后，在,-20,下,12h,60,6h,0.4448,0.4273,不同取代度的羧甲基甲壳素的制备：甲壳素：氯乙酸：氢氧化钠(摩,9,FTIR:,a:CM-chitin;b:chitin;c:CMCHNa,FTIR:a:CM-chitin;b:chitin;,10,元素分析和电位滴定：,元素分析和电位滴定：,11,XRD:,XRD:,12,CM-chitin,的,DSC/TG:,CM-chitin的DSC/TG:,13,酸化的,CM-chitin,溶液,NHS,MES,EDC,搅拌,快速搅拌,CM-chitin,凝胶,冷冻干燥,多孔支架,0.1MNa,2,HPO,4,洗涤,24h,去离子水洗涤,72h,冷冻干燥,多孔支架,羧甲基甲壳素支架的制备过程示意图：,酸化的CM-chitin溶液NHS,MESEDC搅拌快速搅拌,14,EDC/NHS,与羧基和胺基的交联机理：,EDC/NHS与羧基和胺基的交联机理：,15,不同浓度制备的交联支架的吸水率：,不同浓度制备的交联支架的吸水率：,16,交联程度与孔隙率的测定：,交联程度（）,孔隙率（）,2,83.26,96.82,2.5,88.94,96.33,3,87.16,95.56,3.5,92.16,96.51,4,85.33,94.82,交联程度与孔隙率的测定：交联程度（）,17,支架的交联程度和孔隙率：,支架的交联程度和孔隙率：,18,三种不同取代度支架的体外酶降解：,三种不同取代度支架的体外酶降解：,19,SEM:,未交联的支架的,SEM,SEM:未交联的支架的SEM,20,交联后的支架的,SEM,交联后的支架的SEM,21,生物学评价,三维多孔支架,全身毒性急性实验,皮肤,原发,刺激性实验,细胞毒性试验,大鼠皮下埋植实验,人工真皮的构建,生物学实验部分：,生物学评价 三维多孔支架全身毒性急性实验皮肤原发刺激性实验细,22,Thank You!,Thank You!,23,