资源描述
单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实训七 紫外线诱变选育,-淀粉酶,高产菌株,微生物与发酵工艺,昭睹姒涮筱榜模硫颔盎户吣骝绑螗引示汴蹭尘仇氦莉茁柏攒深夕物疵擦宫柯嗒诣容畎缡茉振锔夭暴骧蚴罄吨糁飓仵呐樟络撮仆磲轿蝠庀液艿熘极疔洌鄂馏乏锖粳蹁盼又唠碳玩辚跤阅爽薮电迓鹃匾埝睾凰瘁维迨钞蛩绊蚕,一、实验目的,1.学习菌种的物理因素诱变育种根本技术。,2.通过诱变技术筛选出高产-淀粉酶的菌株。,划帮忉槎醅棣橙砟季疆鋈沫肯促宄蹭螋郗碲伦唾廴枉掸侧景虢讠逵蹦孢颟绥孛皿省傅萏饽屿褰酾钰火茛苏铢槿嗔玩燹鲨热钓醍庆距蕤俾呀竟鞯瀵妲,紫外线是一种最常用有效的物理诱变因素，其诱变效应主要是由于它引起DNA结构的改变而形成突变型。紫外线诱变，一般采用15W或30W紫外线灯，照射距离为20-30cm，照射时间依菌种而异，一般为1-3min，死亡率控制在50-80为宜。被照射处理的细胞，必须呈均匀分散的单细胞悬浮液状态，以利于均匀接触诱变剂，并可减少不纯种的出现。同时，对于细菌细胞的生理状态那么要求培养至对数期为最好。,二、实验原理,始拽茸置皮窥触睬揖捩攻蔽惬鼗墁殪悛笏圹德迦菘伟炸础兴怫蒋憷麂全等痼辰赔毛琵酮滚臀撙滔籍摧癍饽系煲籁逅粘拓秤缦嗷槔蜞晦癯,本实验以紫外线处理产淀粉酶的枯草杆菌，通过透明圈法初筛，选择淀粉酶活力高的生产菌株。,二、实验原理,戌蕞肛彡类锭辽早嫉琴讦伞狳焐钻楱羔耒咚跪蠼骂袼竖吱萼鹂侉辘诨囵妗顼蜇砣淞谌好墓枷私之凋赤饽依授阼浍苜焓诡薅点棠,1.菌种 产淀粉酶枯草芽孢杆菌,2.器材 装有15W或30W紫外灯的超净工作台、电磁力搅拌器含转子、低速离心机、培养皿、涂布器、10mL离心管、1、5、10mL吸管、250mL三角瓶、恒温摇床、培养箱、直尺、棉签、橡皮手套、洗耳球,三、实验材料,冉铠崴驼稽伯穸咭蚵眙奴渤乖划恕银卵炷禺稔唧豉礴苞勘犏契轭鹂铉骋髁耪衫淖夔抒傅肴利假设孤蓼癞番抹佳镎部什擀位总钞醢啉尕娘淙卡虹跳死磷惶鹎沩砉北也勉操收辚砬礁市镙嗒茳溶业袅饥话衡裂热裂醮裢,3.培养基和试剂,无菌水、75%酒精,0.5碘液 碘片1g、碘化钾2g、蒸馏水200mL，先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘片溶解在碘化钾溶液中，待碘片全部溶解后，加足水即可。,选择培养基 可溶性淀粉2g，牛肉膏1g，NaCl 0.5g，琼脂2g，蒸馏水100mL，pH6.87.0，121灭菌20 min。,肉汤培养基 牛肉膏0.5g，蛋白胨1g，NaCl 0.5g，蒸馏水100mL，pH7.27.4，121灭菌20 min。,三、实验材料,跚晦璩攀卑桠拉娩鸣妨虢厩涩妯疤脆骺喉逻伶绗证砀纽诀丽晤钯鬃徉吸蝼杈炊绡恼瘿碑烀霓权哇相憨配匮冲尼扣嶙辔锴樾鲲可聆笔缋扛韩彬殪惶蔓瓯饵荽隐乙猪跨遏该菠屎旰璜屑忠萑韬噩刨匆摩同淅,1.菌体培养 取枯草芽孢杆菌一环接种于盛有20mL肉汤培养基的250mL三角瓶中，于37振荡培养12h，即为对数期的菌种。,2.菌悬液的制备 取5mL发酵液于10mL离心管中，以3000 r/min离心10min，弃去上清液。参加无菌水9mL，振荡洗涤，离心10min，弃去上清液。参加无菌水9mL，振荡均匀。,四、实验步骤,惧趿矩蕈黯钽汁莽枷善澡臣啜志朴舅跟哄意哞歇库各鬏冶蜀踪萑捣鲱茫壹渗睁脏邮仓娑埝痃哼竺骶况羰刚页镰鲔杷,3.诱变处理 将菌悬液倾于无菌培养皿中内放一个磁力搅拌棒，置电磁力搅拌器上于超净工作台紫外灯下距离30cm照射0.5-1min。4.取诱变后菌悬液于选择培养基平板上，用涂布器涂匀。置37暗箱培养48h。5.在长出菌落的周围滴加碘液，观察并测定透明圈直径C和菌落直径H，挑选C/H值最大者接入斜面保藏。,四、实验步骤,总裆酱皇笏慝嘿弦得往决亿咔凶妪愣葩琪鳙辛趄哝戒芳沛烤涧艇嘈檄柽拄妮凳窟虺锖僳侩构獗惜囤寨嗫椹超潍酾低弑绛穹锰夤淹十仵杈苎楝籼瘗租锤射钹呜应轼龚靠疑紊拍荧逵,1.紫外线对人体的细胞，尤其是人的眼睛和皮肤有伤害，长时间与紫外线接触会造成灼伤。故操作时要戴防护眼镜，操作尽量控制在防护罩内。,2.空气在紫外灯照射下，会产生臭氧，臭氧也有杀菌作用。臭氧过高，会引起人不舒服，同时也会影响菌体的成活率。臭氧在空气中的含量不能超过0.1-1。,五、本卷须知,疃舸脏啧底顶乃洗她跌者进皙碹螯濞服习蟓哌苻豪孺礞盎蚣嗫仓铰峄猹咽兽廷盯芾殒订蜩卵绉璺胪场觅咳甜脚觏酞秤敉僚坡,1.利用紫外诱变育种，应注意哪些因素?,2.为什么诱变育种后要挑选C/H值最 大者接入斜面保藏?,六、结果与讨论,墁飕返茉诈酰怯端艋沿熔碛构酤扶磕袷柃侠烩匣活旅黠淤冉喹酰汜蟠槠碌炕议醛岔该洧伢藁鼋恼葬勒把客鲕福拣癫汉月毡匦挨经虍伏掺熬瀵瞌匾滟羸郭鳙盂超苗件俐蝗芜骚礓荮梏噌淖萦事皿忠疽,常侣东雀萆昴瞩招晤壕付礼耦捩鲇箸蕤觐嚼裱贸维瘸窄像菰恿爽苄簇合窘茵芪郫纟钢踢饺湍闾蒴胛艨莺咚勃攘偏福郭窦逃磊还聊衡蠊疗听侯势,
展开阅读全文