生物检测技术（第二版）第九章电子课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,生物检测技术（第二版）第九章电子课件,【知识目标】,熟悉并掌握微生物检验的质量控制基本常识。,【能力目标】,为生物检测技术能力的培养奠定质量控制基本理论基础。,第一节 室内质量控制,室内质量控制主要包括参与微生物检验人员的素质、实验室工作的标准及要求、各种用于微生物检验的仪器和材料等。,一、人员,从事微生物检验的技术人员，必须具有扎实的相关基础理论知识和娴熟的实践操作能力，要有高度的责任感和严谨的工作态度、求实的工作作风；要具备边缘学科（如药物学、分子生物学、医学诊断学和计算机等学科）的相关知识，以适应细菌学检验迅速发展的需要；应定期培训工作人员，并评估、记录其进行微生物实验的能力。培训内容包括微生物专业、生物安全的知识与技能、实验室制定的微生物检验工作涉及的所有资料等。,二、实验室操作手册,实验室内必须要制订和编写标准操作程序手册。间隔一段时间进行补充修订。并赋予手册近似于法律的地位，使之成为全体工作人员操作时共同遵守的标准程序，不得随意更改和简化。操作手册包括以下内容：各级人员的职责和权限，实验室安全措施，标本采集和处理指南，实验室开展的检查项目及最低鉴定要求，培养基和试剂的配制方法，质量控制方案，常用参考数据等相关制度。,三、材料,（一）培养基,培养基是分离培养细菌的必需品。质量好坏直接与分离培养的成败相关。目前，商品化的干粉培养基被大多数实验室所采用。要严格按照说明书的要求储存，在有效期内使用。使用干粉培养基配制时，应对每一批号的干粉培养基进行登记并进行同样质控程序。自制的培养基应实施以下质量控制的程序。,.原材料的挑选,制作培养基的原材料，应挑选各种成分较稳定的试剂，各种化学试剂一般应选用分析纯。制作 培养基的原材料，尚有胸腺嘧啶和,、,浓度的要求。,.严格按照标准操作程序手册要求进行,做好配制记录及注明培养基的名称、配制量、配方、配制者、配制日期以及有效期等。,.质量要求,对已配制完成的培养基外观和无菌试验等一般情况进行检查。,（）外观 每种培养基均应标注清楚。液体培养基应澄清、无浑浊，有浓度要求的培养基如 马尿酸钠培养基应观察失水情况，使用时需补充失去的水分，最好使用螺旋盖试管。固体培养基应无菌落生长、不干裂。一般平板培养基 可储存 周。用塑料袋密封冷藏可使用 个月，兔血平板至多保存 周。,（）无菌试验 培养基制作完成后，应检测每批培养基的灭菌效果。分装后灭菌的培养基随机抽取 量，放 孵箱中，无菌生长为合格。选择性培养基，取部分培养基加入 倍无抑制性肉汤培养基如，稀释抑制物质，置 孵箱中，无菌生长为合格。,（）培养基的量 一般而言，斜面培养基的长度为试管长度的 。双糖铁培养基底层至少有 的直立段。平板的厚度应为，即直径为 的平皿，注入 的培养基即可。其他平板厚度一般为，在 直径的平皿中注入 的培养基。,（）培养基 不宜用试纸或目视比色法测定，应在室温条件下用 计法测定。配制好的培养基 应与规定的 相差.以内。,（）性能试验 每一批新配制的、新购入的培养基，均应用已知性质的标,准菌株进行预测。合格者方可使用。用于测定各种培养基性能的菌种见表 。对于分离培养基应每周测试一次，鉴别培养基则需每批及每月测试一次，常用鉴别培养基见表 。用预期最难生长的细菌菌种，少量接种分离培养基上测试其性能。将接种物制成相当于.管 标准浊度管的浓度，稀释后，取.接种于分离培养基上。如需同时观察多项性能，可接种多种菌株如羊血琼脂平板用乙型溶血性链球菌观察透明溶血情况、草绿色链球菌观察草绿色溶血情况。选择性分离培养基最好使用一定比例的目的菌与其他菌的混合菌液接种，观察目的菌是否增殖，而其他细菌则被抑制生长。,（二）常用试剂的质量控制,实验室使用的试剂（染色液、化学试剂、生物试剂等）都应标记名称、浓度、储存条件、配制日期、失效日期、生物危害性。若试剂启封改变了有效期和储存条件，必须记录新的有效期。试剂的质量保证包括新批号、新货次投入临床使用前的性能评估以及日常质控。新批号或同一批号不同货次试剂的性能评估方法为直接分析质控物质、新旧批号（货次）平行试验或常规质控等。定性试验（如触酶试验、氧化酶试验）试剂至少检测阳性和阴性质控；定量试验（如血清学）试剂需设两个滴度或浓度；直接抗原检测试剂，若含内质控，每一新批号或相同批号不同货次需检验阳性和阴性外质控；如不含内质控，实验的每天检测阳性和阴性质控。,各种试剂日常质控频率不相同，不经常使用的试剂，每次使用前以已知微生物试验检查；经常使用的染色液、药敏纸片等，可每周检查一次。实验室应具备与诊断相配套的质控物质（含质控菌株），供染色、试验、鉴定、药敏试验以及试剂、培养基质控。质控菌株可购买标准菌株，也可使用实验室保存菌株。质控物质的种类、试验频率、检测预期结果与所开展的实验相适应，并遵循有关标准。,（三）质量控制物,质量控制物一般是指已知的被测样品。细菌学检验的质量控制物就是特定的细菌菌种，称为参考菌种。其特点是形态、生化、生理及血清学特性典型且稳定。实验室可用下列方法保存参考菌种。,.一般保存方法,用高层琼脂保存，取长试管最好是螺口试管，用营养琼脂或 琼脂制成高层琼脂，将细菌穿刺接种在培养基中，拧紧管帽或用胶塞塞紧，使不透光，使细菌处于代谢缓慢状态，置避光处室温或 冰箱保存，并按照细菌生长情况做定期接种，用时开启移种到相应的培养基，得到新鲜菌种。此法是最简单的保存菌种方法，最长可保存一年细菌不会死亡。但细菌经多次移种后性状可能发生变异应引起重视。,.低温保存法,将细菌在固体培养基增菌。取对数生长期的细菌用小牛血清或无菌脱纤维羊血将菌落洗下置容器中，再放入无菌玻璃珠数枚，速冻后置 以下低温冰箱保存，需时用无菌镊子取出一粒玻璃珠置增菌培养基中，可获得新鲜菌种，此法可长期保存菌种。,.真空冷冻干燥法,此法是最可靠的具有不改变菌种性状，可长期保存，对保存条件适应性强，但需特定设备，一般实验室较难做到，菌株保藏中心多用此法。,（四）仪器设备及检测,微生物实验室包括基础设备及专业设备。常用基础设备包括显微镜、孵育箱、水浴箱、冰箱、离心机、移液器、滴定管、自动分配器等，常见专业设备包括自动化或半自动化鉴定系统、培养系统等。与检测相关的所有设备均应制定操作程序，定期维护、保养、检测并纪录，新设备或经搬运、维修后的设备应进行评估及功能验证，或由使用者确保实验结果的准确性，所有记录保存至仪器报废。用于检测的温度依赖性设备（孵育箱、水浴箱等），必须定时检测温度，使用过程中注意变化，以保证温度符合要求，冰箱内存放试剂和标本，也应进行温度监测。,使用的温度计量程适宜并经检定，以确保准确性。用于定量检测的移液器、微量滴定管或自动分配器应核查并记录其在使用区间内的准确性和重复性。此外，应定期检测特殊设备性能，如 孵育箱内的浓度；厌氧系统（如厌氧缸、罐或袋）的厌氧条件；定期检测生物安全柜内气流、过滤器；监测压力灭菌器灭菌效果等。,四、检验程序,（一）标本的采集与运送,标本的正确采集与运送是保证微生物检验结果准确的前提。微生物检验标本通常由医护工作者在病房或诊室采集，运送到实验室。实验室应制定标本的采集及运送指南，提供合适的容器，监控标本运送，记录进入实验室的所有标本及收到标本的日期和时间，制定标本接收或拒收准则，以保证标本质量。,.患者的准备,做好采集部位的清洁和消毒工作，防止正常菌群的污染；耐心细致地交代患者，使其主动配合以便采到有价值的标本。,.标本的采集,根据各种感染性疾病和目标病原体的不同特点，确定合理的采样部位、时机和次数，并选用恰当的采样器材严格规范操作。,.标本保存与运送要求,放标本的容器应无菌、不漏和便于密封。根据目标病原菌的特点，决定是否使用及选用何种保菌液、运菌液和增菌液。标本采集后应尽可能立即送检。如不能及时送检，要根据目标病原菌的特点确定保存条件（如温度等），在规定的时间内送到实验室。,.验收和登记,标本的验收和登记要有专人负责。验收的内容包括：采样时间与送检时间以及送检条件是否符合保存致病菌活力的要求；盛标本的容器是否有溢漏和污染，申请单是否信息完整，标本的标志是否与申请单一致和唯一等。对不合格的标本要拒收，并向送检医护人员说明拒收原因，告知正确送检的要求，嘱其重新采集和送检标本，若标本不可替代或很重要，可先进行标本处理，待申请医师或标本采集者识别并确认后，再出具报告。,（二）检验过程,.实验方法的确认,通常选择公认的、权威的教科书，或经同行评议的书刊、杂志，或国际、国家、地区法规中明确的方法和程序。内部规程，应确认其符合相应的用途。所选择的检测方法和程序还应与所提供的服务相适宜，并且方便操作。,例如，血培养系统应能分离需氧菌及厌氧菌；脑脊液的操作程序（培养基和孵育条件）能确保培养苛氧菌（脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、产单核细胞李斯特菌等）；痰培养最好常规涂片、革兰染色，以确定标本的可接受性或培养范围，有多种培养基和选择性培养基分离溶血链球菌和嗜血杆菌。,所有的方法和程序在应用于患者标本检测之前，需要评估其准确性、精确性、灵敏度、特异性、检出限、可报告范围，并与已有的检测方法进行比对。生产商的产品说明亦需验证，或与被接受的方法比对证实结果可以接受。,实验方法和程序经确认投入使用后还需定期评审，以确定该方法和程序持续满足服务对象的需求。,.操作规程,所有的程序，包括标本质量评估、接种、分离、鉴定、染色、药敏试验、结果报告和特殊病原体的识别、隔离、报告以及特殊处理等，都应形成文件，由实验室负责人批准、签名发布，方便相关人员取阅。不再使用的文件应保留一定时间，适当标志，避免误用。,标准操作规程（）内容包括：实验原理、临床意义、操作步骤、样本类型、容器和添加剂、性能参数、检测试剂、定标试剂、所需设备、校准程序、质量控制程序、干扰和交叉反应、统计结果、生物参考区间、检验结果的可报告区间、警告 危急值（适用时）、检测结果的解释、安全性警告及措施、潜在变异来源，并注明分析前和分析后的注意事项、特殊操作模式的处理。,标准化操作程序包括实验的所有重要信息及技术说明，供实际操作中遵照执行。每