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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,DNA琼脂糖凝胶电泳,DNA琼脂糖凝胶电泳,不同浓度琼脂糖分离,DNA,分子的范围,琼脂糖浓度（,%,）分离范围（,kb,）,0.3 5-60,0.6 1-20,0.7 0.8-10,0.9 0.5-7,1.2 0.4-6,1.5 0.2-4,2.0 0.1-3,不同浓度琼脂糖分离DNA分子的范围琼脂糖浓度（%）,琼脂糖凝胶中,DNA,的观察,溴化乙锭（,EB,）,DNA,：紫外光下 红色荧光,琼脂糖凝胶中DNA的观察溴化乙锭（EB）DNA：紫外光下,主要实验器材,电泳仪,电泳槽,缓冲液,琼脂糖,凝胶槽,梳子,取液器,溴酚蓝,主要实验器材电泳仪电泳槽缓冲液凝胶槽梳子取液器溴酚蓝,电泳槽结构,电泳槽结构,操作步骤,琼脂糖凝胶的制备：溶化，冷却，,EB,凝胶板的制备：加梳子，倒胶,样品的制备：样品,+1/5,体积溴酚蓝,加样：加样端为负极（黑）,电泳：,5V/cm,观察：紫外灯下观察，照相,操作步骤琼脂糖凝胶的制备：溶化，冷却，EB,溶 胶,溶 胶,准备胶槽,准备胶槽,凝胶冷却至,50,C,，加,EB,至终浓度,0.5,g/ml,凝胶冷却至50C，加EB至终浓度0.5g/ml,铺 胶,铺 胶,凝胶凝固后取出梳子,凝胶凝固后取出梳子,加缓冲液,加缓冲液,准备样品,准备样品,点 样,点 样,电 泳,电 泳,注意观察溴酚蓝染液的迁移,注意观察溴酚蓝染液的迁移,紫外灯下观察电泳结果,紫外灯下观察电泳结果,照 相,照 相,相关实验,对琼脂糖凝胶电泳分离DNA 片段的有效性的再认识,相关实验 对琼脂糖凝胶电泳分离DNA 片段的有效性的再认,琼脂糖凝胶电泳分离DNA 片段的基本原理,DNA 为多元酸，在中性或弱碱性缓冲液中带负电荷而向阳极泳动 由于不同DNA 分子在同一凝胶中迁移速率不一样，电泳一段时间后可将其分开。,琼脂糖凝胶电泳分离DNA 片段的基本原理 DNA 为多,材料,铜绿假单胞菌噬菌体PaP1 基因组DNA，按常规提取，置-20 保存备用。Agarose、限制性内切酶EcoR为上海生工生物工程有限公司产品。从凝胶中小量回收DNA 片段的试剂盒为上海华舜生物工程有限公司产品，1 kb DNA Ladder为MBI 产品。,材料 铜绿假单胞菌噬菌体PaP1 基因组DNA，按常规,方法,琼脂糖凝胶电泳,用1TAE 配制0.8%琼脂糖凝胶，电泳缓冲液为1 TAE，电压为5 V/cm，电泳1 h，用溴化乙锭或LIGHTBLUE Dye 显色。,方法琼脂糖凝胶电泳,结果,电泳后在日光下(LIGHTBLUE Dye 染色)或在紫外灯下(溴化乙锭染色)切取含“单一”目的DNA 分子的胶条并称重，用小量胶回收试剂盒回DNA。,结果 电泳后在日光下(LIGHTBLUE Dye 染色),在3 个大的目的DNA 片段1、2 和3(分别约为10、7、4.5 kb)之后有很多的较小片段(从大约3.5 kb 到100 bp不等)。在日光下(用LIGHTBLUE Dye 显色)分别切取含有单一目的片段1、2、3 的胶条用试剂盒回收DNA 分子，为了获得足够量的目的DNA 而同时上样4 条泳道。,在3 个大的目的DNA 片段1、2 和3(分别约为1,谢谢观看,谢谢观看,此课件下载可自行编辑修改，仅供参考！感谢您的支持，我们努力做得更好！谢谢,此课件下载可自行编辑修改，仅供参考！感谢您的支持，我们努力,
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