凯式定氮法-实验方法..

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,凯氏定氮法,凯氏定氮法：,仪器：硝化炉 凯氏定氮仪,试剂：浓硫酸 0.5 mol/L 盐酸 40%NaOH 2%硼酸,粉末硫酸钾-硫酸铜混合物K2SO4:CuSO45H2O=3:1,混合指示剂：由50 ml 0.1%甲基蓝酒精溶液与100 ml 0.1%甲基红酒精溶液混合而成，酸色为紫红色，碱色为绿色,凯氏定氮法：测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。在有催化剂的条件下，用浓硫酸硝化样品将有机氮都转变成无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，随水蒸气馏出并为过量的酸液吸取，再以标准酸滴定，就可计算出样品中的氮量。由于蛋白质含氮量比较恒定，可由其氮量计算蛋白质含量，故此法是经典的蛋白质定量方法。,凯氏定氮法：,硝化：硝化炉,试验步骤：取2ml样液，参加到硝化管中，参加1.5g的催化剂K2SO4:CuSO45H2O=3:1，后在通风橱中进展操作。在消化管中参加放入浓硫酸6ml消化至消化管内的液体呈现出澄清的浅蓝色。去除消化管，将其冷却后定容到50mL容量瓶中。,在消化时，电压先调低，约100v左右，一小时后再调最大。直到消化成绿色透亮状。,硝化温度：300400,试验原理：被测的自然含氮有机物与浓硫酸共热时，其中的碳、氢元素转变成CO2和H2O，而氮元素转变成氨，并进一步与硫酸反响生成硫酸铵，此过程称为“消化”。消化时分解反响进展得很慢，需要参加硫酸钾以提高沸点可由290提高到400，参加硫酸铜作为催化剂其他氧化剂如H2O2也可。,蒸馏：凯氏定氮仪,试验步骤：清洗凯氏定氮仪装置重要,连接进水口与自来水管，翻开水龙头。翻开弹簧夹2，使水进入夹套至稍高于出水口，关闭弹簧夹2和3，用酒精灯加热使蒸汽通过进气口进入反响室进展洗涤，在冷凝管下口放一个盛有硼酸-指示剂混合液的锥形瓶，冷凝管下端应完全浸没于液体中，洗涤12 min，观看锥形瓶中溶液是否变色，假设根本不变色，证明蒸馏器已洗涤洁净。将火移开，翻开弹簧夹1，从加样漏斗参加少量蒸馏水，关闭弹簧夹1，由于夹套内温度降低使压力下降，可把反响室内液体通过进气口吸出到夹套内。如此重复数次清洗反响室，仪器即可使用。,蒸馏：凯氏定氮仪,试验步骤：蒸馏操作,参加5ml的消化稀释液，用20ml的2%的硼酸-混合指示剂封住蒸馏口关掉P1和P3，进样20ml的40%的氢氧化钠，后参加少许水冲洗，水封住进样口。酒精灯加热蒸馏瓶。当第一滴氨水从冷凝管中滴下的时候，计时5min，后将硼酸溶液略微离开蒸馏管口，让蒸馏管口在硼酸液面吹2min，清洗蒸馏管口。,蒸馏时，碱液肯定要掌握好量，硼酸里面的指示剂颜色变为蓝色后要再蒸馏五分钟左右。,滴定：滴定管,试验步骤：用0.5 mol/L 的盐酸滴定,用HCl滴定兰色蒸馏液和硼酸液的混合物，直至蓝色褪去，略微有一点粉色，滴定完毕。,以上试验再重复59两次。,计算：此为蛋白质的量，某些地方需要修改,感谢欣赏,THANKS,