平板菌落计数法水中微生物的检测课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,水中细菌总数的测定,平板菌落计数法,.,水中细菌总数的测定平板菌落计数法.,1,一、细菌总数测定的意义,水中细菌总数往往同水中有机物污染的程度呈正相关，它是评价水质污染程度重要指标之一,细菌总数：,指水样在一定条件下培养后，1mL水样所含菌落的总数。,我国生活饮用水标准（GB5749-85）规定，细菌总数不得超过100个/ml,含细菌,10-100个/ml,的水体为,极清洁,含细菌,100-1000个/ml,的水体为,清洁,含细菌,1000-10000个/ml,的水体为,不太清洁,含细菌,1万-10万个/ml,的水体为,不清洁,含细菌多于,10万个/ml,的水体为,极不清洁,.,一、细菌总数测定的意义水中细菌总数往往同水中有机物污染的程度,2,二、基本原理,1、本试验采用,平板菌落计数法,对水样中的细菌计数，这是一种测定水中,好氧和兼性厌氧细菌,密度的方法，由于细菌在水体中，能以单个、成对、链状、成簇或成团的方式存在，另外，没有单独的一种培养基或某一环境条件能满足一个水样中所有细菌的生理要求，所以由此法得到的菌落数，实际上要,低于,被测水样中真正存在的活菌数。,.,二、基本原理 1、本试验采用平板菌落计数法对水样中的细菌计,3,2、平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分,分散成单个细胞，,取一定量的稀释液接种到平板上上，经培养，由,每个单细胞,生长繁殖形成肉眼可见的,菌落,，即,一个单菌落代表样品中一个单细胞,二、基本原理,.,2、平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充,4,三、实验准备,器皿：无菌采样瓶、培养皿、移液管、试管等。,仪器：干热灭菌箱、高压蒸汽灭菌锅、恒温培养箱等。,试剂：牛肉膏蛋白胨培养基、无菌水,环境条件：营养琼脂平板在工作台上暴露15分钟，每个平板上生长得到的菌落不超过15个无菌室,.,三、实验准备器皿：无菌采样瓶、培养皿、移液管、试管等。.,5,四、实验步骤,1）自来水：先将自来水龙头用酒精灯火焰灼烧灭菌，再开水龙头使水流5min，以灭菌采样瓶接取水样备用。,(2)池水、河水或湖水等地面水源水：在距岸边,5米处，,取距水面,1015cm,的水样，先将灭菌的带塞的采样瓶，瓶口向下浸入水层中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将平塞盖好，从水中取出，若不能在,2h,内检测的，需放入,4,冰箱中保存。,1、采样：,代表性：多采几个部位，液体样品需经过震摇，以获得均匀稀释液。,.,四、实验步骤1）自来水：先将自来水龙头用酒精灯火焰灼烧灭菌，,6,2 水样的10倍稀释,第一步 稀释水样,第二步：接种平板,注意：稀释度的选择,.,2 水样的10倍稀释第一步 稀释水样第二步：接种平板注意：,7,平板混合分离法：,将菌液分离样品摇匀，用无菌移液管取1 ml的菌液移至无菌培养皿中，然后将融化，凉至45左右的培养基，在每个培养皿内各倒入约15 ml，摇匀，凝固，制成平板。,混合倒平板操作法示意图,.,平板混合分离法：混合倒平板操作法示意图.,8,2 水样的10倍稀释,第一步 稀释水样,第二步：接种平板,第三步：,培养,稀释度过低，菌落密集无法计数,可以计数，但数量过多，费时费力,数量合适，统计计算，作为结果,数量太少，误差大，不作计数,注意：稀释度的选择,10,-3,10,-4,10,-5,10,-6,.,2 水样的10倍稀释第一步 稀释水样第二步：接种平板第三步,9,第四步 计 数,细菌数量=？,细菌数量=同一稀释度的平均菌落数稀释倍数,例如：,10-5,的平均菌落数是,125个,细菌数量=,125 105=1.25 107个/ml,注意:作空白及取平行样(2-3组),通常细菌、放线菌选择平均菌落数在,30300,之间者进行计算，霉菌选平均菌落数在,10100,之间。,.,第四步 计 数细菌数量=？细菌数量=同一稀释度的平均菌落数,10,3 菌落计数及报告方法,(实例),不同稀释度的平均菌落数,两稀释度菌,落数之比,菌落总数,报告方式,10-1,10-2,10-3,1,1365,164,20,-,2,2760,295,46,1.6,3,2890,271,60,2.2,4,无法计数,4650,513,_,5,27,11,5,_,6,无法计数,305,12,_,7,无法计数,无法计数,无法计数,_,16400,1.6104,37750,3.8104,27100,2.7104,513000,5.1105,270,2.7102,30500,3.1104,10-3无法计数,.,3 菌落计数及报告方法(实例)不同稀释度的平均菌落数两稀释,11,1）若只有一个稀释度的平均菌落数在30-300范围时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告之。,菌落计数方法及原则：,.,1）若只有一个稀释度的平均菌落数在30-300范围时，则,12,2）若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30300之间，则视二者之比值来决定，若其比值小于2应报告两者的平均数。若大于或等于2则报告其中较小的菌落总数。,.,2）若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30300之间，则,13,3）若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之,.,3）若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的,14,4）若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应以按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之,.,4）若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应以按稀释度最,15,5）若所有稀释度的平均菌落数均不在30300之间，则应以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之,.,5）若所有稀释度的平均菌落数均不在30300之间，则应以最,16,6）平板出现大片菌苔不采用，菌苔小于平板的一半，若另一半菌落分布均匀，则菌落数 2.,.,6）平板出现大片菌苔不采用，菌苔小于平板的一半，若另一半菌落,17,注意事项,:,1,、,样品充分混匀，稀释时一个稀释度要换一支无菌移液管（放菌液时吸管尖不要碰到液面,2,、由于细菌易吸附玻璃器皿表面，菌液加入后应尽快倒培养基，立即摇匀；,3,、倾注平板时的培养基温度冷却至,45,左右。,4,、计数时，,30,300,个菌落的稀释度计算每毫升的菌数最为合适,5,、同一稀释度的三个重复的菌数不能相差很悬殊,.,注意事项:1、样品充分混匀，稀释时一个稀释度要换一支无菌移液,18,平板菌落计数法的,优点,：,是能测出样品中的活菌数。此法常用于某些成品和生物制品检定以及食品、水源的污染程度的检定等。,缺点,：,手续较繁，而且测定值常受各种因素的影响。,.,平板菌落计数法的优点：.,19,空气微生物的检测,1m3空气中细菌的总数：,C=,100050N,At,C1m3空气中细菌的总数,N平皿中平均菌落数,A平皿的底面积cm2,t平皿在空气中暴露的时间（min）,.,空气微生物的检测1m3空气中细菌的总数：C=100050N,20,作业,对自己喜欢的某一食品进行微生物检验设计。,要点：,食品相关记录(名称、厂家、商店等),所用物品清单,工作计划（人员安排、进度安排等）,报告格式（表格设计及报告书等）,.,作业对自己喜欢的某一食品进行微生物检验设计。.,21,