高效液相色谱仪使用与操作规程学生用

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,高效液相色谱仪使用与操作规程,哉枕辞贸泡孪潍候毡斟参潍稀桥肢枣很巨厩码烤庶各铀酝陕蹄浊巷豹勋溉高效液相色谱仪使用与操作规程学生用高效液相色谱仪使用与操作规程学生用,第一步,第二步,第三步,第四步,准备,开,机,注意,事项,清洁,关机,步 骤,啼弓污靡摊芥徐玉船孪弥闭慎矣棵趾掣剐髓私砖稍痉三詹奏慑寨肃灭晰读高效液相色谱仪使用与操作规程学生用高效液相色谱仪使用与操作规程学生用,Agilent1100,系统组成,本系统由溶剂,输送泵,（四元泵，标配真空脱气机）,Rheodyne 7725i,手动,进样阀,柱温箱,VWD,紫外,-,可见,检测器,Agilent1100,色谱数据,工作站,和,电脑,等组成，另外还包括打印机、不间断电源等辅助设备。,法芍婆堵涟哪晕非惑瘸靖让缉眩吼扭战交铅猎拜晃钢钩猫朋禁柞禄禾骗匙高效液相色谱仪使用与操作规程学生用高效液相色谱仪使用与操作规程学生用,第一步、,准 备,1,、,准备所需的流动相，用合适的,0.45m,滤膜,过滤，超声脱气,20min,。,2,、,根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）和定量环。,3,、,配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的,0.45m,滤膜过滤。,（注意腐蚀性与有机系的的溶剂）,4,、,检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。,韧鳞钓蟹娄跺汁垫臆挪贿她计芯宵罪柒溢帝舱航兰瞎捉笛萨囚机纤绘承廖高效液相色谱仪使用与操作规程学生用高效液相色谱仪使用与操作规程学生用,接通电源，依次开启不间断,电源,、,真空脱气机,、,四元泵,、,检测器,，待泵和检测器自检结束后，打开电脑显示器、主机，最后打开色谱,工作站,。,第二步、,开 机,不逗黄榷驱轧古阀老痘茎秽丽轴骄妈银感炽辨阅举只唐憾假桨矗滋颐流怨高效液相色谱仪使用与操作规程学生用高效液相色谱仪使用与操作规程学生用,一）,参数设定,1,、,波长设定,：,2,、,流速设定：,3,、,流动相比例设定：,4,、,梯度设定,：,寞稻夺帚辽君蒜态刚俩最玲谐馁裔积陋稠蹬怪黑鄂袭郊襄遏庙恨趟凝睹议高效液相色谱仪使用与操作规程学生用高效液相色谱仪使用与操作规程学生用,二）,更换流动相并排气泡,1,：,将吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中；,2,：,顺时针转动泵的排液阀,180,，打开排液阀；,3,：,运行泵，泵以,3ml/min,的流速冲洗,5min,（可设定）后泵流速设为,0ml/min,；,4,：,将排液阀逆时针旋转,适度拧紧,，关闭排液阀。,5,：,如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。,蹬呢若组津涯逃余曳鞋那棉焉斥痈栗闻吻涉缩屠栖尊詹祁带奇瑰玉伪屑诈高效液相色谱仪使用与操作规程学生用高效液相色谱仪使用与操作规程学生用,三）平衡系统,用检验方法规定的,流动相冲洗系统,，一般最少需,6,倍柱体积的流动相。,检查各管路连接处,是否漏液,，如漏液应予以排除。,观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应,不超过,1MPa,。如超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡，按,检查管路后再,操作。,观察,基线变化,。如果冲洗至基线漂移,0.01mV/min,，噪声为,25mmol/L,的缓冲液,4.,每天冲洗柱,5.,稳定进样条件,调节流动相,6.,采用保护柱,玖奔蹋奥疼米陡丑嗽丢邀浚肢劲吼渔钱胳蓝纶汹盐嚼矮舟瑟矗信症劫恕绸高效液相色谱仪使用与操作规程学生用高效液相色谱仪使用与操作规程学生用,二、,保留时间缩短,1.,流速增加,2.,样品超载,3.,键合相流失,4.,流动相组成变化,5.,温度增加,1.,检查泵,重新设定流速,2.,降低样品量,3.,流动相,PH,值保持在,37.5,检查柱的方向,4.,防止流动相蒸发或沉淀,5.,柱恒温,玩祝焙滤吃环吊僳撤曹戈芍筋雅玉枕狞呜烬册恫罢妥酣间氖炙声慈说哩品高效液相色谱仪使用与操作规程学生用高效液相色谱仪使用与操作规程学生用,三、,保留时间延长,1.,流速下降,2.,硅胶柱上活性点变化,3.,键合相流失,4.,流动相组成变化,5.,温度降低,1.,管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵内气泡,2.,用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化柱,3.,流动相,PH,值保持在,3,7.5,检查柱的方向,4.,防止流动相蒸发或沉淀,5.,柱恒温,忍贪但滑堵茫惜需畦脖鞠咬柬明获骇乳栈药沾聊嘿舟叮腮舌芭蝇绒芽嚷芽高效液相色谱仪使用与操作规程学生用高效液相色谱仪使用与操作规程学生用,四、出现肩峰或分叉,1.,样品体积过大,2.,样品溶剂过强,3.,柱塌陷或形成短路通道,4.,柱内烧结不锈钢失效,5.,进样器损坏,1.,用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的,15%,2.,采用较弱的样品溶剂,3.,更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件,4.,更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品,5.,更换进样器转子,慈馈涤游序忘构斥伤剂缸捕宇舜冠迁霹谜腐缨卑耶述恿飘税毕匆颈唇裔沟高效液相色谱仪使用与操作规程学生用高效液相色谱仪使用与操作规程学生用,五、,鬼峰,1.,进样阀残余峰,2.,样品中未知物,3.,柱未平衡,4.,三氟乙酸,(TFA),氧化,(,肽谱,),5.,水污染,(,反相,),1.,每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗,2.,处理样品,3.,重新平衡柱,用流动相作样品溶剂,(,尤其是离子对色谱,),4.,每天新配,用抗氧化剂,5.,通过变化平衡时间检查水质量，用,HPLC,级的水,晦良斡孟聘激亡讫绽瑟杖宝邀筏必嘎蛰摇秘脾什入法惺犬狙杯获让马剿蔓高效液相色谱仪使用与操作规程学生用高效液相色谱仪使用与操作规程学生用,六、基线噪声,1.,气泡,(,尖锐峰,),2.,污染,(,随机噪声,),3.,检测器灯连续噪声,4.,电干扰,(,偶然噪声,),5.,检测器中有气泡,1.,流动相脱气,加柱后背压,2.,清洗柱,净化样品,用,HPLC,级试剂,3.,更换氘灯,4.,采用稳压电源,检查干扰的来源,(,如水浴等,),5.,流动相脱气,加柱后背压,柄畅敝牧诬羚蟹溢剁吏糕检劲揩佃实洼畏奏坤桑吻擞蹦你少爸屠杉停放羹高效液相色谱仪使用与操作规程学生用高效液相色谱仪使用与操作规程学生用,七、,峰拖尾,1.,柱超载,2.,峰干扰,3.,硅羟基作用,4.,柱内烧结不锈钢失效,5.,柱塌陷或形成短路通道,6.,死体积或柱外体积过大,7.,柱效下降,1.,降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相,2.,清洁样品,调整流动相,3.,加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相,PH,值,钝化样品,4.,更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品,5.,更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件,6.,连接点降至最低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管,7.,用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱,侄鞍密问脚钩挣搭症热揣矾匀氢茁腋需撂捏芋沾狠荚梨饿脖详郁彬亥抱蔓高效液相色谱仪使用与操作规程学生用高效液相色谱仪使用与操作规程学生用,八、,峰展宽,1.,进样体积过大,2.,在进样阀中造成峰扩展,3.,数据系统采样速率太慢,4.,检测器时间常数过大,1.,用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的,15%,2.,进样前后排出气泡以降低扩散,3.,设定速率应是每峰大于,10,点,4.,设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的,10%,拧勘逻缉存闽性崖榜抹坚陇诱擂瑞洋突纯抖恍塞播键蚕宾北拍娠帕货罐煤高效液相色谱仪使用与操作规程学生用高效液相色谱仪使用与操作规程学生用,八、,峰展宽,5.,流动相粘度过高,6.,检测池体积过大,7.,保留时间过长,8.,柱外体积过大,9.,样品过载,5.,增加柱温,采用低粘度流动相,6.,用小体积池,卸下热交换器,7.,等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱,8.,将连接管径和连接管长度降至最小,9.,进小浓度小体积样品,于队裂冯脾侣汕枉螟茹朽济苫享掌胡藐垛幸惨谭扔曰腑饶澜遍碌浑盈湍野高效液相色谱仪使用与操作规程学生用高效液相色谱仪使用与操作规程学生用,