颈眩宁胶囊质量标准研究

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,颈眩宁胶囊质量标准研究,主要内容,1.,研究背景,2.,目的意义,3.,研究内容,4.,已完成内容,5.,待解决问题,1.,研究背景,1.1,颈椎病（椎动脉型）,工作压力大，坐姿不良。,脾虚肝旺，肝阳上亢。,1.1,颈椎病,耳鸣、耳聋、记忆力智力下降。,发病率逐年升高，发病年龄逐年下降。,1.2,颈眩宁胶囊,配伍平肝潜阳、祛痰逐淤、活血通络。,能改善由颈椎病引起的眩晕和头痛症状。,1.2.1,颈眩宁胶囊药材组成,天麻,6,份、钩藤,12,份、川芎,10,份、,延胡索,10,份、葛根,12,份、白芷,6,份,1.2.1.1,天麻,天麻素,（天麻苷）,天麻能镇静镇痛，治疗头晕目眩、肢体麻木。,天麻素属酚类，有多个羟基，易溶于水及极性溶剂。,1.2.1.2,钩藤,钩藤碱,钩藤性凉味甘苦，具有清热平肝息风定惊的功能。,可用于治疗头痛、高血压、眩晕症等。,钩藤碱属于吲哚类生物碱，可用碱化乙醚提取。,1.2.1.3,川芎,阿魏酸,川芎性温味辛微苦，具活血行气，祛风止痛功效。,川芎能抗心绞痛，改善微循环淤血，提高免疫力。,阿魏酸属酚类，可用有机溶剂回流提取。,1.2.1.4,延胡索,延胡索乙素,延胡索具有镇痛、镇静和催眠作用。,延胡索对心肌缺血和损伤有保护作用；,还有抗肿瘤，增强免疫力等作用。,延胡索乙素属季铵碱，可用酸性乙醇回流提取。,1.2.1.5,葛根,葛根素,葛根性甘辛平，升阳止泻。,具有降低血压，减缓心律的作用。,可用于治疗心肌梗死、高血压、突发性耳聋等。,葛根素属异黄酮类化合物。可用乙醇回流提取。,1.2.1.6,白芷,欧前胡素,白芷性温味辛，能散风除湿、通窍止痛、消肿排脓。,能解热镇痛、抗炎，治疗头痛，皮肤病。,欧前胡素属香豆素类，可以用乙醇渗漉法提取。,1.2.2,制备方法,六味药按比例称量,加入,10,倍体积,65%,乙醇,浸泡,3,个小时,回流提取,3,次，每次,2,小时,浓缩药液，制成粉末,加入辅料制粒，装入胶囊,中药质量标准的目的,确保药物质量的,稳定、安全、有效、可控,。,中药质量标准的意义,促进生产发展,参与国际市场竞争,进行药品评价,1.3,中药质量标准概述,1.3.1,质量标准分类,1.,法定标准,中华人民共和国药典（已发行,2010,版）,2.,企业标准,企业内部指标,保护产品，防伪,1.3.2,中成药制剂质量标准的内容,名称,处方,制法,性状,鉴别,检查,浸出物,含量测定,功能主治,用法用量,注意事项,规格,贮藏,中药质量存在的问题,重金属污染（汞、镉、砷、铜、铊）,毒性成分,农药残留、微生物、霉菌霉素,质量标准中所检成分未必是主治功能成分,1.3.3,中药质量标准的发展,中药质量标准的发展趋势,建立中药指纹图谱可全面反映中药内在质量。,中药指纹图谱,生药材,DNA,指纹图谱,中药饮品成分指纹图谱,中成药成分指纹图谱,中药质量管理方向,GACP,基地,检测方法的多样化,基本设备：高效液相色谱、气相色谱、毛细管电色谱,联用技术：色谱,-,质谱联用、色谱,-,核磁共振联用,应用多种检测器：紫外检测器、蒸发光散射检测器、荧光检测器、二极管阵列检测器,2.,目的意义,建立药物分离、鉴定和含量分析方法。,为新药颈眩宁制定质量标准。,3.,研究内容,薄层色谱鉴别（,TLC,）,定性鉴别，将供试品与对照品和对照药材比较。,阴性鉴别，制备各药材阴性供试品进行,TLC,鉴别。,含量测定,用高效液相法（,HPLC,）测定含量。,阴性鉴定，将各药材阴性供试品进行,HPLC,鉴别。,回收率、精密度、重复性、稳定性、检测下限,检查,（参考中国药典,2010,版）,水分检查、装量差异、崩解时限、微生物限度,3.1.1.,供试液制备,样品制备方法：浸渍法、加热回流提取、超声提取、水蒸汽蒸馏法提取、升华法、液液萃取法、固液萃取法（中性氧化铝柱、大孔吸附树脂柱、离子交换树脂柱和,C18,柱等）。,3.1.2.,展开条件,展开剂选择：良好分离度,考虑因素：溶剂的种类、极性、配比,展开环境：温度、湿度,3.1.3.,显色方法（参考药典）,3.1 TLC,实验内容,3.2 HPLC,实验内容,3.2.1.,供试品制备,3.2.2.,流动相选择,3.2.3.,方法学考察,3.2.3.,高效液相色谱法测定含量的方法学考察,a.,标准曲线制作：,线性关系、线性范围、相关系数。,b.,稳定性试验：,将供试品溶液多次进样，每次进样间隔一段时间（比如,1,2 h,），考察供试品溶液中待测成分的稳定性，一般考察,36,小时。,c.,精密度试验：,取同一样品，连续测定五次，相对标准偏差不得大于,3,。,d.,重复性试验：,同一批号样品，按样品测定方法操作，测定五份，相对标准偏差不得大于,3,。,e.,加样回收试验：,于已知被测成分含量的样品中精密加入一定量的被测成分纯品，测定含量。用实测值与原样品中含测成分之差，除以加入纯品量计算回收率。一般回收率要求在,95,105,。,f.,含量限幅度的制定：,根据原料来源不同的三批以上样品测定结果，确定含量范围。,3.3.,检查,水分,装量差异,崩解时限,微生物限度,4.,已完成内容,样品中天麻素的,TLC,定性测定及,HPLC,定量测定部分内容。,4.1.,材料和设备,标准品：天麻素，中国药品生物制品鉴定所，批号：,116807-200205,颈眩宁胶囊：批号：,20120716,硅胶板：,GF Merck,生产,展开剂为分析纯,电子天平：奥豪斯仪器（上海）公司，,AR224CN,高效液相色谱：,Dionex Ultimate 3000,烘箱：,memmert,4.2.,方法,4.2.1.,天麻素薄层色谱鉴别,4.2.1.1.,供试品制备,D101,大孔树脂，,10%,乙醇,50ml,洗脱。,4.2.1.2.,标准品制备,取天麻素对照品，加甲醇制成,1mg/ml,的对照品溶液。,4.2.1.3.,展开剂选择,用氯仿,:,甲醇,=3:1,的比例展开。,4.2.1.4.,显色方法,薄层板晾干后，喷以,10%,磷钼酸乙醇，在,110,烘至显出斑点。,4.2.1.5.,天麻素薄层色谱鉴别实验结果,1 2 3 4 5 6 7 8 9,1,、,8,、,9,为天麻素对照品,6,为上述方法制备得到的样品,其余色谱条带为其它方法制备得到的样品,4.2.2,天麻素,HPLC,含量检测,4.2.2.1.,供试品制备,超声处理,1,小时,4.2.2.2.,标准品制备,称取天麻素标准品,0.0059g,，容于流动相中。,4.2.2.3.,流动相选择,水,:,乙腈,=3:97,4.2.2.4,天麻素,HPLC,含量检测实验结果,0.0,1.3,2.5,3.8,5.0,6.3,7.5,8.8,10.0,11.3,12.5,13.8,15.0,16.3,17.5,18.8,20.0,21.3,22.5,23.8,25.0,-10.0,20.0,40.0,60.0,80.0,天麻素,天麻素标准品,标准曲线（判定系数,99.9997,）,0.0,5.0,10.0,15.0,20.0,0.000,0.100,0.200,0.300,0.400,0.500,0.600,0.700,0.0,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0,6.0,7.0,8.0,9.0,10.0,11.0,12.0,13.0,14.0,15.0,-50,0,100,200,250,#14,UV_VIS_1,mAU,min,1-0.820,2-2.173,3-2.280,4-2.480,5-2.553,6-2.693,7-2.913,8-3.153,9-3.493,10-3.627,11-3.733,12-3.993,13-4.113,14-4.333,15-4.747,16-4.973,17-5.333,18-5.553,19-5.873,20-6.080,21-6.347,22-6.633,23-7.553,24-7.987,25-9.260,26-10.040,27-10.393,天麻素,29-12.153,30-13.620,样品图谱 天麻素含量为,0.9605ug/ul,5.,待解决问题,其他,5,味药的定性、定量测定。,HPLC,的方法学考察。,规定的检查项目。,参考文献,国家药典委员会,.,中国药典,(,一部,)S.,北京,:,化学工业出版社,2010.,杨翔宇,.,椎动脉型颈椎病中药内治进展,J.,贵阳中医学院学报，,2005,27,（,2,）：,52-54.,宋成芝，徐燕,.,天麻的化学成分和药理作用,J.,中国民族民间医药,2010:13-14.,贠亚波,徐剑,张永萍,.,影响天麻中天麻素提取的因素研究,J.,中南药学,2009,7(5):327-330.,黄青萍,蔡乐,.,钩藤的药理作用及临床应用,J.,广西中医药,2003,26(4):6-8.,王盟,.,钩藤总生物碱的研究进展,J.,实用医药杂志,2008,25(3):360-362.,李海强,中药川芎的现代基础研究及临床应用近况,J.,现代医药卫生,2008,24(13):1999-2001.,徐自升,蔡宝昌,张弦,.,中药川芎中阿魏酸稳定性的研究,J.,现代中药研究与实践,2004,18(2):25-27.,贺凯,高建莉,赵光树,.,延胡索化学成分、药理作用及质量控制研究进展,J.,中草药,2007,38(12):1909-1912.,尹丽红,李艳枫,孟繁琳,.,葛根的化学成分、药理作用和临床作用,J.,黑龙江医药,2010,23(3):371-373.,李洪雄,彭志远,邹海英,.,葛根黄酮的提取与应用,J.,吉首大学学报,(,自然科学版,),2006,27(3):113-116.,徐术,胡晋红,全山丛,.,白芷的活性成分研究与临床应用进展,J.,中国药房,2005,16(6):467-469.,Valentina Razmovski-Naumovski,Wannit Tongkao-on,Benjamin Kimble,et al.Multiple Chromatographic and Chemometric Methods for Quality Standardisation of Chinese Herbal MedicinesJ.Modernization of traditional chinese medicine and materia medica,2010,12(1):99-106.,Edzard Ernst,Toxic heavy metals and undeclared drugs in Asian herbal medicinesJ.Trends in Pharmacological Sciences,2002,23(3):136-139.,Song-Yun Liu,Soo-On Woo,Hwee-Ling Koh.HPLC and GCMS screening of Chinese proprietary medicine for undeclared therapeutic substancesJ.Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis,2001,24:983-992.,Junhua Zhang,Barbara Wider,Hongcai Shang,et al.Quality of herbal medicines:Challenges and solutionsJ.Complementary Therapies in Medicine,2012,20:100-106.,Pavel Drasara,Jitka Moravcova.Recent advances in analysis of Chinese medical plants and traditional medicinesJ.Journal of