实验室样本处理及方法-课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2020/11/29,实验室样本处理,1,2020/11/29,定义,实验室样本处理,标准化地收集、保存用于各种研究的正常或病理标本，包括人体器官组织、全血、血浆、血清、生物体液或经处理过的生物样本（,DNA,、,RNA,、蛋白等）以及与这些生物样本相关的临床、病理、治疗、随访、知情同意等资料及其质量控制、信息管理与应用系统。,2,2020/11/29,精品资料,3,2020/11/29,你怎么称呼老师？,如果老师最后没有总结一节课的重点的难点，你是否会认为老师的教学方法需要改进？,你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？,教师的教鞭,“不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我笨，没有学问无颜见爹娘”,“太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早”,4,2020/11/29,生物样本库,政策法规,技术标准,伦理规范,ISO,标准,实验室安全,临床实验室,伦理,运输,标准操作规范（,SOPs,）,质量控制标准,样本采集,样本处理,样本质量检验,样本储存,样本运输,DNA,质量鉴定、,RNA,质量鉴定、蛋白质质量鉴定,知情同意书,质量审查,样本运输,样本转移协议,伦理委员会,伦理审查,5,2020/11/29,ISO15189:2003,医学实验室质量和能力的专用要求,CNAS-CL02,医学实验室,-,质量和能力的认可准则,ISO/IEC17025:2005,检测和校准实验室能力的通用要求,CNAS-CL01,检测和校准实验室认可准则,ISO9001:2008/GBT19001-2008,质量管理系统 要求,GB/T1.1-2009,标准化工作导则：标准的结构和编写规则,ISO,标准,6,2020/11/29,实验室安全,GB 19489-2008,实验室生物安全通用要求,CNAL/AC30-2005,实验室生物安全认可准则,WS/T233-2002,微生物和生物医学实验室生物安全通用准则,GB 50346-2004,生物安全实验室建筑技术规范,已建立实验室生物安全管理体系,7,2020/11/29,临床实验室,GB/T 20468-2006,临床实验室定量测定室内质量控制指南,GB/T 20469-2006,临床实验室设计总则,GB/T 20470-2006,临床实验室室间质量评价要求,WS/T102-1998,临床检验项目分类与代码,WS/T224-2002,真空采血管及其添加剂,WS/T225-2002,临床化学检验血液标本的收集与处理,WS/T227-2002,临床检验操作规程编写要求,WS/T228-2002,定量临床检验方法的初步评价,WS/T230-2002,临床诊断中聚合酶链反应（,PCR,）技术应用,WS/T249-2005,临床实验室废物处理原则,WS/T250-2005,临床实验室质量保证的要求,WS/T251-2005,临床实验室安全准则,WS/T255-2005,临床检验医学参考测量实验室,8,2020/11/29,赫尔辛基宣言,涉及人类为研究对象的生物医学研究了国际伦理方针指南,关于,DNA,序列申请专利的声明：专利,关于早期发布原始序列数据有关专利申请问题的声明,关于,DNA,取样的声明：控制与获取,世界人类基因组与人权宣言,涉及人体的生物医学研究伦理审查办法（试行）,人类基因治疗申报临床试验指导原则,关于利益共享的声明,关于基因治疗的声明,关于人类基因组数据库的声明,国际涉及人类的生物医学研究伦理准则,人类遗传数据国际宣言纲要,人体生物医学研究国际伦理指南,伦理,9,2020/11/29,物流术语,液氮生物容器,中国民用航空危险品运输管理规定,危险物品航空安全运输技术细则,运输,10,2020/11/29,组织机构,样本库管理委员会,专家委员会,伦理委员会,样本库职能部门,样本库负责人,业务主管,质量主管,专职技术人员,所有从业人员应取得,岗前培训考核合格证,11,2020/11/29,生物样本库工作流程,标,本采集,标本处理,入库登记,标本储存,质控,Yes,No,销毁,废弃物处置操作程序,抽检,No,Yes,标本使用,使用申请,标本发放,剩余标本回收,数据库,12,2020/11/29,标,本采集,生物标本采集和储存,研究成功的,关键,要求,根据所采样本的类型和所分析的物质而定,在,采集和储存过程中不能受到,“,污染,”,储存的生物标本在任何时候进行检测都可以获得一致的结果,所有的生物标本都应有详细的背景材料和鉴别标识,13,2020/11/29,标,本采集,举例,尿液标本,晨尿,浓缩尿，适用于,尿常规检查,随机尿,仅适用于门诊、急诊,尿常规过筛检验,空腹尿,糖尿病患者餐前,尿糖测定,餐后尿,餐后两小时采集，适用于糖尿病患者,病理性蛋白尿、糖尿检查,12h,尿,晚上,8,点排空尿液后,12,小时内采集的所有尿液。用于,尿沉渣计数、尿微量白蛋白排泄率测定,等,12h,禁水尿,晚,8,时开始禁饮，次日早,8,时排空膀胱后再次留取的尿液，适用于,尿渗透压检测,24h,尿,上午,8,时排尽后，收集接下来,24,小时内排出的所有尿液，记录总尿量，用于,体内代谢产物的定量检测,，如尿蛋白、尿糖、尿肌酐、尿钙、尿儿茶酚胺、检查等,培养用尿,留尿前先清洗外阴，消毒尿道口后，以,无菌容器只接留中段尿,10ml,，,用于微生物检查,14,2020/11/29,标,本采集,尿液标本的保存,-,最好不超过,2h,尿液化学物质和有形成份不稳定，排出后即开始发生物理和,化学变化，如胆红素,、尿胆原被氧,化，细菌生长，尿素,酵解生成氨使尿,pH,升高，尿液有形成份,破坏，葡萄糖,被细菌利用而降低,。,尿液保存常用,方法有两种：,1.,冷藏法：,4,条件下不超过,8h,可,抑制微生物生长，维持尿液,pH,恒定，使尿中有形成份的形态基本不变，但是可导致磷酸盐和尿酸盐析出形成沉淀，影响尿沉渣,检查。,15,2020/11/29,标,本采集,尿液标本的保存,-,最好不超过,2h,尿液化学物质和有形成份不稳定，排出后即开始发生物理和,化学变化，如胆红素,、尿胆原被氧,化，细菌生长，尿素,酵解生成氨使尿,pH,升高，尿液有形成份,破坏，葡萄糖,被细菌利用而降低,。,尿液保存常用,方法有两种：,2,.,化学防腐法,：,甲苯,：（一般用量为,1.0,2.0ml,甲苯,/100ml,尿液），防止细菌污染，通常用于,尿酮体、尿糖，尿蛋白质,等测定,甲醛,：每,100ml,尿液加,40%,甲醛,0.5ml,，可抑制细菌生长并固定尿中有形成份，适用于尿液中,细胞与管型,的测定,；,麝香草酚,：用,10%,的麝香草酚异丙醇溶液，达到抑菌及保护代谢物的作用，适用于尿,钾、钠、钙,等测定,浓盐酸,：每,100ml,尿标本中加入浓盐酸,1ml,即可，使尿液维持在,pH 2.0,左右。主要可用于,17-,羟,皮质类因醇,、,17-,酮类固醇、儿茶酚胺、,VMA,等定量测定等,。,16,2020/11/29,标,本采集,样本采集操作规程,血液,粪便,尿液,口腔拭子,唾液,阴道拭子,皮肤拭子,17,2020/11/29,标,本采集,18,2020/11/29,标本运送,血液标本采集后应尽快从采血现场运送至,实验室,，,注意,是否存在干扰血凝块。,标本运送过程中要注意样本的包装、温度要求及处理方法等，要确保分析成分的稳定性，标本管在运送过程中要保持管口封闭，向上垂直放置，避免剧烈振动,尿液标本从流取到检验应在2小时内完成，如不能及时送检分析，必须加,防腐剂,或冷藏不超过,8,小时,细菌,检查标本应采用消毒容器，防止细菌,污染,，室温条件不超过,2,小时或,4,冷藏保存,。,19,2020/11/29,标本运送,20,2020/11/29,标本处理和保存,标本采集后应及时处理、分装后保存,血液标本处理操作规程,DNA,提取和纯化操作规程,：,血液、粪便、棉拭子、唾液,RNA,提取和纯化操作规程,：,血液、棉拭子,蛋白质提取和保存操作规程,21,2020/11/29,标本处理和保存,血液标本处理操作规程,全血、血清、血浆,、干血片、血凝块、白细胞,血清：指全血不经抗凝处理，在凝固过程中，血浆,中除去纤维蛋白原分离出的淡黄色透明液体或指纤维蛋白原已被除去的,血浆,血浆：离开血管的全血经抗凝处理后，通过离心沉淀，所获得的不含细胞成分的液体，其中含有纤维蛋白原。,全,血：由,液态血浆和血细胞组成,22,2020/11/29,标本处理和保存,血液标本处理操作规程,全,血标本的保存,生化检验：尽可能在,2,小时内检验或分离血清,/,血浆，不能及时分离或检验时，应,4,低温冷藏，不能超过,24,小时。操作时动作应轻柔，,避免,剧烈振荡，避免温度变化过大或冻融，易导致溶血。,DNA,检测：,4,保存不超过,7,天，,-20,保存不超过一年，,-80,长期保存,RNA,检测：采集后应尽快分离血细胞、血清,/,血浆，或加入,RNA,抑制剂（如,trizol,），,-20,保存不超过,2,个月，,-80,保存不超过半年。,23,2020/11/29,标本处理和保存,血液标本处理操作规程,血清的分离,采血时应采用无抗凝剂的采血管；,采血后，室温（,22,25,）放置,30,60min,，加促凝剂时凝集,加快（,5,15min),，,1000,1200g,离心,10min,，吸取上层淡黄色上清液。有凝胶屏障的分离管可保存在,4,，,24,小时内吸取上层血清；无凝胶屏障的必须立即吸取上层血清。,保存条件,常温下不超过,8,小时；,4,不超过,48,小时；,48,小时以上的应置于,-20,保存；提取,RNA,的应立即置于,-80,保存。避免反复冻融。,24,2020/11/29,标本处理和保存,血液标本处理操作规程,血浆的分离,采血时应采用有抗凝剂的采血管；,采血后，,1000,1200g,离心,10min,，吸取上层淡黄色上清液。有凝胶屏障的分离管可保存在,4,，,24,小时内吸取上层血清；无凝胶屏障的必须立即吸取上层血清。,保存条件,常温下不超过,8,小时；,4,不超过,48,小时；,48,小时以上的应置于,-20,保存；提取,RNA,的应立即置于,-80,保存。避免反复冻融。,25,2020/11/29,质量控制,标本入库前应经过质量控制，符合质量标准的标本才能入库,符合标本采集、处理的要求，检查采集和处理记录,标本信息采集表填写完整,标本运送符合要求，交接运送记录完整,标本管无空管、无破损、良好密封，标签清晰完整、无脱落,检查标本是否受到污染，核酸质量,26,2020/11/29,标本入库,编号原则,总原则：唯一性、共享性,辅原则：在满足总原则基础上，尽量精简，编号长度尽量保持统一,生物样本库信息表,27,2020/11/29,标本入库,标本编号原则,总原则：唯一性、共享性,辅原则：在满足总原则基础上，尽量精简，编号长度尽量保持统一,举例：,2017,年收到的第,102,份标本，类型是粪便，目的用于,结,肠道菌群分析,1700102D15W21,2017,年收到的第,256,份标本，类型是血清，目的用于心梗的研究,1700256G01BS1,28,2020/11/29,标本使用,使,用申请：填写,标本申请单,标本发放：填写,标本使用登记表,标本销毁：按照感染性废弃物，执行,废弃物处置操作程序,29,2020/11/29,生物安全,执行,实验室生物安全管理体系,健康监测：定期体检，必要时免疫接种。,个人防护：手套、口罩、防护服、护目镜；脱下手套后、离开微生物室前应洗手，接触血液,体液或其它污染物时，应立即洗手,。,操作尖锐物品如针头，应戴防刺破手套。,尽可能在生物安全柜内进行标本的操作。,标本库冰箱应采用专人专锁管理，禁止随意取用，防止失窃。,感染性废弃物交由专业环保公司处置。,30,2020/11/29,讨论,31,2020/11/29,