肿瘤标志物检测方法-光谱肿瘤标志物检测课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,肿瘤标志物检测方法,肿瘤标志物检测方法,1,概迷,同一个标志物可以用不同的方法检测,如可,以从血清水平、免疫组化水平检测CEA和P-gp,等,也可以从细胞和分子水平用FCM和 RT-PCR,来检测。,概迷,2,目三血清学水平,血清学水平:除了传统的放射免疫分析(RIA)和,酶联免疫分析(ELSA)外。,目前在国内主要有三类全自动免疫化学分析系统,(化学免疫发光免疫分析系统、荧光免疫分析系,统和电化学发光免疫分析系统)广泛的应用于临,床,对血清肿瘤标记物检测具有快速、准确、半,定量。,可检测AFP、CEA、CA19-9、CA72-4、CA125、,CA15-3、NSE、Cyfra21-1、PSA、f-PSA等。,目三血清学水平,3,1放射免疫分析(一),放射免疫分析(radio immunoassay,RIA)放,射免疫分析自20世纪60年代问世以来,在生物医,学各个领域得到了广泛的应用。,20世纪90年代,RIA技术研究的主要进展是试管,固相法。学者将试管固相法称之为第四代RIA,1放射免疫分析(一),4,1放射免疫分析(二),固相RIA和免疫放射测量法(IRMA)的灵敏度、,特异性、稳定性及测量范围均优于液相竞争法;,尤其是不需要使用离心机进行分离,简化了操作,步骤,提高了检测的精密度;,活化试管RIA和IRMA技术系共价键结合,包被均,稳定性好,实现了分析技术一步法,易于实,现自动化分析。,1放射免疫分析(二),5,2酶免疫分析(一),酶免疫分析(enzyme Immunoassay,EIA)由于,RIA和IRMA有着自身固有的、难以克服的缺陷,Engva11和 Vanweemen各自领导的研究小组分别以,酶代替同位素,于1971年创立了酶免疫分析技术,(EIA)。因其标记物制备简单,有效期长,对环,境无污染等特点,EIA技术得到了迅速的普及和,发展。,20世纪90年代后期,在EIA中引进了放大系统,主要是生物素一亲和素系统的应用,使测定的灵,敏度赶上或超过了RIA,2酶免疫分析(一),6,2酶免疫分析(二),酶联免疫荧光测量法(ELIFA)同时兼具酶联,免疫吸附试验(ELISA)和荧光免疫分析,(FIA)两种方法的优点,其灵敏度较传统的,ELISA明显提高,最小检出值达10-15mo/L,增强发光酶免疫分析法(ELEIA)是20世纪80,年代后期发展起来的新型免疫分析技术,其特,点是:酶促增强发光信号,且发光信号保持稳,定,该方法的最小检出值达10-20mol/L,2酶免疫分析(二),7,3化学发光免疫分析(一),化学发光免疫分析(chemiluminesent immunoassay,CLIA),1981年,Pan,nnag将化学发光原理与免疫反应结合起来,建立了化学发光免疫分析法(CLIA)。,这种方法虽然灵敏度可以达到放免的水平,但是影响检,测结果的因素较多,稳定性较差,而且在发生化学反应,之后,样品的发光无法再现,使用甲基吖啶酯标记抗体更为理想,因不必加催化剂,所以受外界因素的干扰少,且操作简单,稳定性高,标,记蛋白后不影响发光信号的产生。在这一领域全自动测,定仪器的研制发展很快,极大地提高了该方法的分析效,率和普及推广。,3化学发光免疫分析(一),8,3化学发光免疫分析(二),近年来,免疫电化学发光(IECL)技术正在快速发,展。这一方法具有灵敏、快速、稳定、选择性强,重现性好、易于操作、方法灵活多样的优点。它是,集电化学发光、生物素一抗生物素、免疫分析,并,由固相免疫分析发展起来的磁微球等技术于一体,是众多学科交叉的研究领域。,IECL分析方法多样,广泛地应用于抗原、半抗原和,抗体的免疫检测,其线性范围也较宽,符合临床检,验的需要。IECL技术的发展趋势在于合成新的发光,标记物,优化标记技术和免疫分析方法,3化学发光免疫分析(二),9,时间分辨光免疲分析(一),时间分辨荧光免疫分析(time resolved fluorecence,immunoassay,TRFIA),是20世纪80年代初问世的另一种非放射性免疫分析法,其主要特点是示踪物为标记稀土元素,如Eu3+、Tb3+,或Sm3+。,TRFIA灵敏度高、应用范围广,目前已实现分析技术完,全自动化。,时间分辨光免疲分析(一),10,肿瘤标志物检测方法-光谱肿瘤标志物检测课件,11,肿瘤标志物检测方法-光谱肿瘤标志物检测课件,12,肿瘤标志物检测方法-光谱肿瘤标志物检测课件,13,肿瘤标志物检测方法-光谱肿瘤标志物检测课件,14,肿瘤标志物检测方法-光谱肿瘤标志物检测课件,15,肿瘤标志物检测方法-光谱肿瘤标志物检测课件,16,肿瘤标志物检测方法-光谱肿瘤标志物检测课件,17,肿瘤标志物检测方法-光谱肿瘤标志物检测课件,18,肿瘤标志物检测方法-光谱肿瘤标志物检测课件,19,肿瘤标志物检测方法-光谱肿瘤标志物检测课件,20,