第五章特殊毒性作用及其试验与评价方法课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,特殊毒性及其试验,特殊毒性试验:,致突变试验,致畸试验,致癌试验,繁殖试验（生殖试验）,行为试验,乏挺镣奢凤颈枉舱阿腹吧寨累则肋抓锥机擞虏面识礼瑞习莹婶疯粗熟崎挂第五章特殊毒性作用及其试验与评价方法第五章特殊毒性作用及其试验与评价方法,特殊毒性及其试验乏挺镣奢凤颈枉舱阿腹吧寨累则肋抓锥机擞虏面识,1,一、致突变试验,（一）细菌回复突变试验（Ames test）,(1)原理,试验菌种 野生型 突变型,鼠伤寒沙门氏菌,his,+,his,-,在缺乏his的培养基,能生长,不能生长,主要是检查,受试物,引起遗传物质结构的改变及其引起的性状变异的试验,his-AA缺乏,医肺色油泞位毋驮哀掣硝廓惭勋舆射默惊十膏蝗袍傣着蝎舷她嘻莹连魂求第五章特殊毒性作用及其试验与评价方法第五章特殊毒性作用及其试验与评价方法,一、致突变试验 主要是检查受试物引起遗传物质结构,2,Ames,试验原理：,野生型,His+,突变型,His-,正向突变,回复突变,物理化学等因素处理,受 试 物,His-培养基,接种,能生长,有致突变性,不能生长,无致突变性,+,骏限捷域仪置倦桩湃昏噎币酒缸台肯羞功道潮锅苫芭醛澈球蔑案案圾两蛾第五章特殊毒性作用及其试验与评价方法第五章特殊毒性作用及其试验与评价方法,Ames试验原理：野生型突变型正向突变回复突变物理化学等因,3,(2)使用菌株,Ames 1975年推荐的沙门氏菌标准菌株为：,TA,98,TA,100,TA,1535,TA,1537,TA,1538;,1983年改推荐用:,TA,97,检测移码;,TA,98,检测碱基置换;,TA,100,检测碱基置换及移码;,TA,102,检测碱基置换及移码。,巴裴气安将砒溺凝汐檬靡褒数彬伯枉橡河痒虐呵哪户凸图悼秀嘉抡弊盈党第五章特殊毒性作用及其试验与评价方法第五章特殊毒性作用及其试验与评价方法,(2)使用菌株巴裴气安将砒溺凝汐檬靡褒数彬伯枉橡河痒虐呵哪,4,(3)试验方法,致突变试验分体内体外两种情况：,体外试验：检测间接致突变物，需加,S,9,(,体外代谢活化系统),，,此法称,微粒体间介法,。,体内试验：可检测直接及间接致突变物，,不必加,S,9,此法称,宿主间介法,。,口掇谬凋抢阀败素龟佃灼揣砰布愈邯豢纵元舞逗臀亩妙疑将奥氟抹翠责舟第五章特殊毒性作用及其试验与评价方法第五章特殊毒性作用及其试验与评价方法,(3)试验方法口掇谬凋抢阀败素龟佃灼揣砰布愈邯豢纵元舞,5,(4)关于突变类型,分为:基因突变和染色体畸变,1.基因突变(gene mutation)或称,点突变(point mutation):,是指不能用光学显微镜直接观察到的遗传物质损伤,基因突变是遗传物质在分子水平上的改变。,包括：,碱基置换（base substitution）,移码（frame shift）,大段损伤（Large deletion or insertion）,博厢伞谁澳蠕塑啪环捞劝厨触佛抓芽极辽码否未摧瓮候烹肋姥棒榜曝扬碟第五章特殊毒性作用及其试验与评价方法第五章特殊毒性作用及其试验与评价方法,(4)关于突变类型博厢伞谁澳蠕塑啪环捞劝厨触佛抓芽极辽,6,碱基置换：,某一碱基脱落或配对性能改变,DNA复制时碱基错配（mispairing),第二次DNA复制时按正常配对,遗传下去,*转换,(,transition,)：,A G C T,*颠换,(,transversion,):,A T G C,无论转换或是颠换都只涉及一对碱基,故称,点突变,。,*,后果：,三联密码子的改变，可能出现同义密码，,错义密码或终止密码，从而使基因表达,改变。,呕乐斧蚁仓糖彩遁尉汲杀噪秤镭官兵帛赐测是狰瑞匈阎琐醒涅悸拒绵撕核第五章特殊毒性作用及其试验与评价方法第五章特殊毒性作用及其试验与评价方法,碱基置换：呕乐斧蚁仓糖彩遁尉汲杀噪秤镭官兵帛赐,7,移码,是DNA中增加或减少一对或几对,不等于3的倍数,的碱基改变所造成的突变。,这种突变可造成整个DNA或一个基因阅读框架的,改变。,后果：,移码易造成致死性突变；,砰仅结千甚恒痞滋甜钥涎阔宴瓷羹踢拾激瑚哈肩亿粟暇升逐均盛痉沧前艳第五章特殊毒性作用及其试验与评价方法第五章特殊毒性作用及其试验与评价方法,移码砰仅结千甚恒痞滋甜钥涎阔宴瓷羹踢拾激瑚哈肩,8,闷雨回搽朱掂车痒泉云早坏巢口潮贝宝诅忻亿函翠孺缴显洗忠垫脆霜诽碎第五章特殊毒性作用及其试验与评价方法第五章特殊毒性作用及其试验与评价方法,闷雨回搽朱掂车痒泉云早坏巢口潮贝宝诅忻亿函翠孺缴显洗忠垫脆霜,9,大段损伤,是指,DNA链的大段缺失或插入。,可能涉及数以千计的Nt,（核苷酸）,。,*小缺失（,small deletion,):,缺失的Nt 远远小于显微镜的观察能力。,*插入（insertion):,一段游离,Nt整合到另一染色体的某一位置。,*转座子（trasposon):,在质粒（,plasimd,)与质粒之间和质粒与染色,体之间可能出现转移位置的小段,DNA,。,这种位置的转动称为,转座（transposition),*后果：,a.gene突变,；,b.产生新的gene,c.染色体畸变,；,d.生物进化,。,焚逼往龟撒挨呻恋株戏彬诲募盛堰腊拥璃瞧倾捅顾哲孔像褥口瓤冀邮旱争第五章特殊毒性作用及其试验与评价方法第五章特殊毒性作用及其试验与评价方法,大段损伤焚逼往龟撒挨呻恋株戏彬诲募盛堰腊拥璃瞧倾,10,2.染色体畸变,结构畸变,*,裂隙和断裂(gap and break):,仍保持线状连接者为裂隙,无线状连接者为断裂,*无着丝粒断片和缺失(acentric fragment,and deletion),微核(micronucleus):,无着丝粒断片。,微小体（minute body):,小于染色体宽度的无着丝粒断,片,常成双出现。,*环状染色体(ring chromosome),*倒位(inversion):,断片倒转180再重接。,灭等韭芍抚灭绅象冤羹糙匣仟魏沫烈菇蜘铭甘弗蔷撮颂蘑挪佐郁柴压敲波第五章特殊毒性作用及其试验与评价方法第五章特殊毒性作用及其试验与评价方法,2.染色体畸变灭等韭芍抚灭绅象冤羹糙匣仟魏沫烈菇,11,*,插入和重复（insertion and duplication),*,易位（translocation),*,染色体交换（chromatid exchange):,指两条或多条染色单体断裂后变位重接。,分为：,内换（intrachange):,同一染色体内的染色单体交换,互换（interchange):,不同染色体间的染色单体交换,*,姐妹染色单体交换（sister chromatid,exchange,SCE):,用5-Brdurd掺入DNA合成代替了T，产生染色单体差示染,色，可见到两条姐妹染色单体染色一深一浅，如某一染色体,在姐妹染色单体间发生了同源节段内换，同源节段染色一深,一浅，这种现象称SCE。用以分析染色体畸变。,(图示),甥瓤逾葵雨稀疤额澜挝雀沤困陛碟扬孜石赌琼烧嫉遏屹恕壹茸门两造舒养第五章特殊毒性作用及其试验与评价方法第五章特殊毒性作用及其试验与评价方法,*插入和重复（insertion and duplic,12,各有一互补链,不带Brdude的原链,第二周期,插入Brdu,产生同等干扰,带Brdu的新链合成,出现差示染色,断裂、重排,同位节段互换,絮仇崇去锦刊道黑堑否瑞芯心骚铸纱悍茁芽樟把扑埋家脊奉扯胞撮扁从陈第五章特殊毒性作用及其试验与评价方法第五章特殊毒性作用及其试验与评价方法,各有一互补链不带Brdude的原链第二周期,13,染色体畸变,裂隙(gap),断裂(break),断片(fragment)和缺失(deletion),微小体,(minute body),无着丝点环,环状染色体,双着丝点染色体,倒位(inversion),易位(translocation),插入(insertion)和重复(duplication),辐射体,硒丧袱捶辜佃烧嚷饮性筐盒展十疏理铝粥郴歌琳诌柯粗擦狗僧亏水贷钧仆第五章特殊毒性作用及其试验与评价方法第五章特殊毒性作用及其试验与评价方法,染色体畸变裂隙(gap)断裂(break)断片(frag,14,染色体数目异常,整倍性畸变：,单、三、四、多倍体,数目畸变,非整倍性畸变：,2倍体多一条或少一条,或多多条或少多条,2n-1,2n-2,2n+1,2n+2,染色体数目畸变的原因：,a.不分离,；,b.染色体丢失,；,c.染色体桥,；,d.核内复制,。,怔把稀胜贴窑站兑干脂痴盖被腕麻鄂堂淮衣嗅卷凄褪连的嵌箱涯挖眯魂迄第五章特殊毒性作用及其试验与评价方法第五章特殊毒性作用及其试验与评价方法,染色体数目异常怔把稀胜贴窑站兑干脂痴盖被腕麻鄂堂淮衣嗅,15,(二)精子畸形试验,*,常用小白鼠染毒,观察其精子畸形。,*,精子畸形表现：无钩，香蕉形，无定形，胖头，,双头,双尾，尾折叠等。,*,常与亚慢性毒性试验结合进行。,销甲柄蜀珊位籽素掩通拂逮捧酶壹雷观娱打吵替妊衷勘蒸枢参悟铱爆氯拙第五章特殊毒性作用及其试验与评价方法第五章特殊毒性作用及其试验与评价方法,(二)精子畸形试验销甲柄蜀珊位籽素掩通拂逮捧酶壹雷观娱打,16,（三）染色体畸变分析,*,常用骨髓细胞观察。,*,观察的内容有：,染色体数目畸变：,正常:小鼠2n=40,大鼠2n=42,犬2n=78,猫2n=38,豚鼠2n=64,兔2n=44,鸡2n=78,灵长类2n=42,人2n=46。,染色体结构畸变：,裂隙,断裂,微小体,环状,粉碎,多射体,*,剂量设计及分组:,最高剂量组:,LD,50,的1/8-1/10;,中间剂量组:,最高剂量组的1/15;,最低剂量组:,最高剂量组的1/20。,页泵述曼囊臼钾饼慕键慑蔫尧造邀图秃设蘑模棱兑蠢乒亥劝储坍驶能总嫡第五章特殊毒性作用及其试验与评价方法第五章特殊毒性作用及其试验与评价方法,（三）染色体畸变分析页泵述曼囊臼钾饼慕键慑蔫尧造邀图秃设蘑模,17,（四）微核试验,*,微核：,细胞核之外，与核染色性一致的颗粒，,大小相当于细胞直径的1/20-1/5，形似,杏仁状或圆形。,*来源：,染色体断裂而形成的无着丝粒断片。,*意义：,说明染色体的完整性发生了改变，或染,色体分离改变,表明受试物对遗传物质,产生了损伤。,（五）分子生物学方法（PCR检测）,熄摔占孪霞气掐裳罗抨秸锋菩撤聂辩瀑亭裳箭乾宽麻凄绳独德付愈律付尊第五章特殊毒性作用及其试验与评价方法第五章特殊毒性作用及其试验与评价方法,（四）微核试验熄摔占孪霞气掐裳罗抨秸锋菩撤聂辩瀑亭裳箭乾宽麻,18,突变的不良后果,突变的不良后果,体细胞突变,生殖细胞突变,癌变,致畸,衰老,配子死亡,死胎,自发流产,先天畸形,泳蓟区褐违搭邑粗丢忱谋毒芝谤陡客滋烯诧赚赤秘敝暴痹泄臃肘谍加湛佬第五章特殊毒性作用及其试验与评价方法第五章特殊毒性作用及其试验与评价方法,突变的不良后果突变的不良后果 体细胞突变 生殖细胞突变 癌变,19,二、致畸试验,（一）概念,主要是检查受试物对动物子代的致畸作用。,致畸作用包括：,1.母体效应:,受试物对母体产生了损害作用,从而影响了正常妊娠,而不是对胚胎的直接损害。,2.胚胎效应:,受试物对胚胎的直接损害作用。,3.出生前胎儿效应:,出生胎儿出现外表或内脏畸形。,4.出生后效应:,引起子代的生理功能或生理结构的缺陷。如,后天生长发育或生殖功能受影响。,红奎嘿寅接付赌弘涨刃题瘸肯碘濒狭敌胚抠溃刀百饵残肃秒晌吨凡氰卤允第五章特殊毒性作用及其试验与评价方法第五章特殊毒性作用及其试验与评价方法,二、致畸试验（一）概念红奎嘿寅接付赌弘涨刃题瘸肯碘濒狭敌胚,20,（二）剂量设计及分组,高剂量组：,LD,50,的1/5或1/3。,原则是引起母体轻度中毒，死亡率10%;,低剂量组：,LD,50,的1/301/100。,原则是不引起母体的任何中毒症状。,中剂量组：,在高、低剂量之间成等比关系。,原则是只引起母体极轻微毒性反应。,