电刺激迷走神经对缺血再灌注影响0规范

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,指导老师：黄龄瑾,组 员：胡雪莹 陈艺萍,刘少野 周俊成,迷走神经电刺激对大白鼠,肠缺血-再灌注后血压的影响,目的:,观察迷走神经电刺激对大鼠肠缺血再灌注(I/R)后血压的影响。,方法:,2只雄性大白鼠随机分为2组:(1)A鼠组:暴露腹腔后夹闭肠系膜上动脉(SMA)1 h，开放再灌注2 h;(2)B鼠组:在夹闭前及再灌注开始均以5 V、2 ms和1 Hz强度的电能持续刺激左颈部迷走神经远端20 min;颈动脉插管监测平均动脉压(MAP)。,结果:,各组大鼠MAP在缺血期基本保持平稳。而在再灌注期，B鼠的MAP随时间延长明显高于A鼠。,结论:,电刺激迷走神经能能改善A鼠肠再灌注期的循环血压。,摘要,肠缺血再灌注(intestinal ischemia-reperfusion，I/R)损伤是外科临床中常见的器官损伤之一，I/R不仅可引起消化道局部组织的结构和功能的损害，而且因肠粘膜屏障功能的损害可引发肠道菌群移位和内毒素血症，产生全身炎性反应综合征，还可能对其它脏器造成继发性损伤，甚至多器官功能衰竭，导致并发症和死亡率增加 1 。然而，在临床上对I/R损伤目前仍无有效的防治手段，因而进一步展开对其机制及防治的研究无疑是具有临床意义。近年来实验研究表明，通过传出迷走神经电刺激而释放乙酰胆碱(acetylcholine，ACh)并特异性结合于组织巨噬细胞表面的7亚基烟碱受体，抑制致炎性细胞因子释放，具有保护脏器功能，维持内环境稳定作用 2 。但迷走神经电刺激对I/R后肠粘膜损伤是否也有影响未见研究报道。本实验拟对此进行验证。,1.试剂与仪器,1%戊巴比妥钠，肝素钠注射液，生理盐水，大白鼠手术台，大白鼠器械，大鼠气管插管，麻醉用药注射器（5ml），BL-420生物机能实验系统（简称BL系统），压力换能器，纱布，线，动脉插管，动脉夹。,一、材料与方法,2.动物模型的建立,清洁及健康的雄性大鼠2只，体重250350g，手术前禁食12h，自由饮水。腹腔注射1%戊巴比妥钠(0.5ml/100mg)麻醉后，行气管切开插管以保持自主呼吸通畅。钝性分离双侧颈总动脉和迷走神经，用丝线靠头端结扎左侧迷走神经，远端与双铂电极连接;右侧颈总动脉置管，连接压力传感器。双铂电极导线、压力传感器导线连接于BL系统，连续监测平均动脉压并提供持续电刺激迷走神经。尽量按无菌操作开腹，分离暴露肠系膜上动脉，自腹主动脉分出的根部用无损伤小动脉夹夹闭之，避免钳夹肠系膜上静脉。缺血1h后重新打开腹腔，去除动脉夹再灌注2 h。,3.动物分组,上述大鼠随机分为2组:A鼠组:夹闭SMA 1 h后松夹再灌注2 h，不刺激迷走神经;迷走神经刺激B鼠组:在夹闭前及再灌注开始均以5 V、2 ms和1 Hz强度的电能持续刺激左侧迷走神经远端20 min。,4.动脉血压监测,记录时点:迷走神经刺激前(基础值T0)、夹闭0 min(T1)、夹闭30 min(T2)、再灌注0 min(T3)、再灌注30 min(T4)、再灌注60 min(T5)、再灌注90 min(T6)、再灌注120 min(T7)。每次记录监测波形持续30 s，取其平均值作为该时点的测量值。动脉血压以平均动脉压(MAP)表示。,1.一般情况,各组大鼠体重及实验室温度均无显著差异。术中均存活，麻醉效果满意。,2.MAP的变化,各组大鼠MAP在缺血期基本保持平稳。而在再灌注期(T3-T7)，A鼠的MAP随时间延长而明显下降，与B鼠同时点相比有显著差异;A鼠不能改善MAP。,表1 各组大白鼠肠缺血再灌注不同时期MAP的变化(mmHg),组,T,0,T,1,T,2,T,3,T,4,T,5,T,6,T,7,A,76,43.3,58.78,43.76,43.09,45.84,33.66,20.11,B,79,79,77.11,74.11,74.52,68.79,52.03,38.15,二、结果,本研究通过阻断肠系膜上动脉 1 h再灌注2 h复制了I/R肠损伤模型，表明，A鼠组的病变程度最重，显著高于B鼠组。提示迷走神经电刺激预处理能在一定程度上减轻I/R后肠组织病理变化。同时本实验也表明，与A鼠组相比，VNS能明显改善再灌注期MAP下降趋势，防止低血压发生。目前对VNS这种保护作用的机制还不是太清楚，可能与迷走神经兴奋后释放的ACh作用有关 2，4-6。,小肠粘膜对缺血非常敏感，在遭受30 min缺血后，发生脂质过氧化反应，缺血-再灌注损伤时氧自由基生成，对细胞膜产生损伤。迷走神经电刺激预处理能明显降低I/R后血浆MDA含量，这提示迷走神经电刺激能一定程度上减少MDA的生成，具有抗氧化应激损伤作用，这与石德光等 7报道的电刺激迷走神经减少内毒素血症动物肺MDA生成的研究结果有相似之处。,三、讨论,TNF具有多种生物学效应，是启动和加速各种炎性连锁反应的关键因子 8 。在I/R损伤中，TNF通过刺激使自身和其它致炎性介质合成增加，使免疫反应被放大;另外，TNF作为致炎细胞因子可致白细胞的趋化、聚积并释放化学物质引起组织损伤 9 。文献报道迷走神经电刺激能降低内毒素血症、严重低血量失血性休克、主动脉钳夹缺血再灌注大鼠血浆TNF的研究结果 4-6，7。另外，必须强调的是组织与血浆中的TNF浓度变化并不完全一致，血中TNF浓度不能完全反映不同组织TNF的含量，而组织中的水平似乎更具有临床和生物学意义 10 。,综上所述，大鼠肠缺血1 h后再灌注2 h导致肠粘膜结构明显损伤，电刺激迷走神经能显著减轻I/R肠粘膜结构的病理改变并使再灌注期的循环血压得到一定改善，其保护效应可能与减少脂质过氧化、下调TNF生成有关，其确切机制有待进一步研究。,1,Swank GM，Deitch EA.Role of the gut in multip le organ failure:bacterial translocation and permeability changes J.World J Surg，1996，20(4):411-417.,2,Pavlov VA，Wang H，Czura CJ，etal.The cholinergicanti-inflammatory pathway:a missing link in neuroimmu nomodulation J.Mol Med，2003，9(5-8):125-134.,3,Chiu CJ，McArdle AH，Brown R，etal.Intestinal mucosal lesion in low-flow states.I.A morphological，hemodynamic，and metabolic reapp raisal J.Arch Surg，1970，101(4):478-483.,4,Borovikova LV，Ivanova S，ZhangM，etal.Vagus nervestimulation attenuates the systemic inflammatory responseto endotoxin J.Nature，2000，405(6785):458-462.,5,Bernik TR，Friedman SG，OchaniM，etal.Cholinergicantiinflammatory pathway inhibition of tumor necrosis factor during ischemia reperfusion J.J Vasc Surg，2002，36(6):1231-1236.,参考文献,6,Guarini S，Altavilla D，CainazzoMM，etal.Efferent vagal fibre stimulation blunts nuclear factor-kappaB activation and p rotects against hypovolemic hemorrhagic shock,7,石德光，胡森，姜小国，等.迷走神经兴奋对内毒素致大鼠心脏炎症反应的影响 J.中国危重病急救医学，,2003，15(1):26-28.,8,陈宁，叶静，汤特，等.共有序列寡核苷酸竞争结合NF-B以减少TNF产生的实验研究 J.中国病理生理杂志,，2003，19(5):619-621.,9,杨风蕊，林秀珍.肠缺血再灌注损伤的研究进展 J.中国中西医结合外科杂志,，2002，8(4):319-321.,10,吕艺，盛志勇，侯晓霞，等.肠缺血-再灌流大鼠不同组织TNF和IL-6 mRNA表达的规律及意义 J.解放军医学杂志,，1999，24(2):94-96.,