多功能显微镜的使用讲解课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第一节 生物制片技术,一、昆虫生物制片方法,按封固剂的使用分：,1,、暂时封片法,不使用封固剂,2,、永久制片法,用封固剂封片,生物制片技术,多功能显微镜的使用,按材料处理方法分：,1,、整体封片法：,将微小的昆虫或昆虫的部分器官整体封片。,2,、涂抹制片法,昆虫的疏松组织直接涂抹在载波片。,3,、压碎制片法,将松软的组织在载玻片上，用盖玻片压碎展平的一种方法,4,、离散制片法,借助药物将组织结合物溶解、分离的制片方法,。,5,、组织切片法,观察昆虫组织器官结构形态的制片方法。,分为：,石蜡切片法、火棉胶切片法、冰冻切片法、超薄切片法。,二、石蜡切片,把材料包埋在石蜡中，连同石蜡一起切片,主要过程：,取材固定洗涤脱水透明浸蜡包埋切片贴片脱蜡复水染色脱水透明封固,第二节 多功能显微镜的使用,一、显微镜的类型,显微镜,非光学显微镜,光学显微镜,普通显微镜,特种显微镜,多功能显微镜,实体显微镜,暗视野显微镜,相差显微镜,荧光显微镜,偏光显微镜,紫外光显微镜,倒置显微镜,二、显微镜的光学技术参数,1、数值孔径（,NA numerical aperture）,NA,sin,介质折射率,孔径角的一半,介质折射率，香柏油为1.515,孔径角的一半，小于90,。,干燥系物镜的,NA,值小于1，,油镜的,NA,值最大为1.4,2、分辨率,光学仪器能够区分两个相临物点之间的最小距离。,0.61,0.61,d=,sin,NA,光波长,可见光波长400700,m,，,平均550,m,光学显微镜的分辨率,d,最小为0.2,m,提高分辨本领的措施：,（1）降低光波长,（2）增大介质的折光系数,（3）增大孔径角,（4）增加明暗反差,0.61,d=,sin,3、放大率,总放大率,M,物镜放大率（,Mob）,x,目镜放大率（,Moc,）,镜筒长度（标准镜筒长160,mm）,Mob,F,1,物镜焦距,250 ,明视距离（,mm）,Moc,F,2,目镜焦距,250,M,x,F,1,F,2,有效放大倍数,M,有效,：,d,肉眼,肉眼分辨本领,M,有效,=,d,仪器,仪器分辨本领,人肉眼在250毫米远处分辨率为0,.2,mm,。,光学显微镜的有效放大倍数应为1000倍。,总放大率经验值：,显微镜的最适的总放大率，是标准镜筒长下，所使用的物镜,NA,值的5001000倍。,超出此范围称为“无效放大”。,4、焦深,K,D=,M NA,焦点深度，与总的放大倍率、物镜的数值孔径成反比。,增加标本周围介质的折射率可增加焦深。,5、现场直径,指显微镜下看到的视场内所能容纳被检物体的实际范围。,FN,目镜视场数,Mob,物镜放大倍率,6,、镜像亮度与视场亮度,（,1,）镜象亮度与物镜数值孔径的平方成正比,（,2,）镜象亮度与总放大率的平方成反比,镜像亮度：显微镜下图像的明暗程度,视场亮度：显微镜下整个视场的明暗程度,7,、复盖差,盖玻片厚度不标准产生的相差。盖玻片标准厚度0.17,mm,放大倍率越高、,NA,越大，复盖差越明显。,8,、工作距离,物镜前透镜到被检物体之间的距离。,放大倍率越高工作距离越小，40,物镜不超过0.6,mm，100,物镜不超过,0.2mm。,三、象差,1、色差,不同颜色的光通过透镜的折射率不同,色差的校正:,（1）采用单色光作光源,（2）利用凸、凹透镜的色差彼此相反，将其胶合在一起消除色差。,2、球差,透镜球面上，轴线上与四周光线折射率不同造成。,球差的消除措施：,利用凸、凹透镜的球差彼此相反，将其胶合在一起消除球差。,3、场曲,场曲可用特殊透镜和光阑纠正,四、显微镜的光学部件,1、物镜,金属镜筒内由相隔一定距离并固定的透镜组组合而成。,每一组透镜又由不同材料、不同参数的一至数块透镜胶合而成。,根据物镜前透镜与盖玻片之间的介质不同：,（1）干燥系物镜，40,x,以下物镜，,NA,值均小于1,（2）水浸系物镜,（3）油浸系物镜，90100,x,，NA,值可大于1,根据物镜放大率的高低：,（1）极低倍物镜 0.5,x 0.75x,（2）低倍物镜 1,x ,6,x NA 0.04-0.15,（3）中倍物镜 6,x ,25,x NA 0.15-0.40,（4）高倍物镜 25,x,63,x NA 0.35-0.95,（5）油浸物镜 90,x,100,x NA 1.25-1.40,根据物镜性能分类：,（1）消色差物镜 标有,Ach(Achromatic objective),消除红蓝色差及部分球差,（2）复消色差物镜 标有,APO(Apochromatic,objective),消除大部分的色差、球差，同一焦点平面上成像,（3）半消色差物镜 标有,FL,消除色差与球差的能力介于以上二者之间,（4）平场物镜 标有,Plan(Plan objective),视场平、大，工作距离增加,超平场物镜 标有,S Plan,（5）特种物镜,带校正环的物镜 校正盖玻片厚度不规则带来的复盖差,带虹彩光阑物镜 调节物镜的数值孔径，改变焦深,相差物镜,无荧光物镜,无罩物镜（,No cover objective),标有,NC，,不加盖玻片,长工作距离物镜,2、目镜,25片透镜分2组或3组构成,惠更斯目镜,冉姆斯登目镜 普通目镜，2片平凸透镜构成,凯尔勒目镜,补偿目镜 标有,K，,可消除物镜残留色差,平场物镜 标有,P，,视场平坦,广视场物镜 标有,W，,具有较大的视场，视场平坦,3、聚光镜,由透镜组、孔径光阑构成，类型与物镜匹配,4、显微镜的照明装置,照明法,透射式照明,中心照明,斜射照明,临界照明,克勒照明,落射式照明,五、显微镜的光轴调节,1、聚光镜的聚焦、调中,调视场光阑（多边形）居视场中心,2、视场光阑调到外切,3、孔径光阑的调节,聚光镜的数值孔径与物镜的数值孔径相匹配,六、相差显微镜的原理与使用,1、原理,通过改变直射光或衍射光的相位，直射光和衍射光发生干涉后的合成波振幅加强或减弱，因此将光通过样品时产生的相位差，转变为振幅差，增加了明暗反差，使透明的样品清晰可见。,分为：正相差、负相差,2、相差显微镜的装置,物镜中的相板,共轭面,补偿面,3、相差显微镜的调节,（3）物镜放大倍率与聚光镜的号码匹配,（2）中心望远镜调环状光阑与相板的合轴,（1）孔径光阑完全开启,