同型半胱氨酸的检测及临床应用

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,同型半胱氨酸的检测及临床应用,1,前 言,同型半胱氨酸,（,homocysteine,Hcy,）是一种人体内的含硫氨基酸，为蛋氨酸和半胱氨酸代谢过程中的重要中间产物。,新热点,:,许多学者认为血液,Hcy,升高已成为,动脉粥样硬化,发生的一个独立危险因子，也成为基础医学和临床医学研究的新热点。,新理念,:,伴有血浆,Hcy,升高,(,10umol/L),的原发性高血压定义为,H,型高血压,。,2,11/12/2024,2,同型半胱氨酸（Hcy）能够让四分之三的高血压患者脑卒中死亡风险增加12倍。,3,11/12/2024,3,一、Hcy的,存在形式,有研究发现在正常人和高,Hcy,血症患者血浆中，,Hcy,大部分（,70,）是与蛋白质结合，血浆中与,Hcy,结合的是白蛋白。,Hcy,在血液中的存在方式,:,部分以同型半胱氨酸,-,半胱氨酸二硫化物存在，微量以还原型同型半胱氨酸存在，大部分通过二硫键与白蛋白结合而存在。,4,11/12/2024,4,二、影响血液Hcy水平的因素,1、遗传因素：,C667T点突变可引起Hcy升高。,CBS基因多态性。,蛋氨酸合成酶基因多态性。,5,11/12/2024,5,2、性别与年龄：,国内外不少研究发现，Hcy随年龄增长而升高，而且男性女性。女性在绝经前的水平较低，绝经后显著升高，认为其机制可能与雌激素水平的变化有关。,6,11/12/2024,6,3、营养因素：,VitB6、VitB12、叶酸是Hcy代谢辅酶，它们的水平与Hcy水平呈负相关，摄入不足时，上述三个酶活性下降，则Hcy升高。,饮酒：长期饮酒可引起肝细胞蛋氨酸合成酶活性下降，从而造成Hcy血症。,饮食中蛋氨酸含量过高：有报道认为高动物蛋白、低植物蛋白饮食可能是Hcy血症的危险因素之一。,7,11/12/2024,7,三、同型半胱氨酸致病机理,1、内皮毒性作用：,Hcy可引起内皮细胞损伤，尤其合并高血压时更易受损，并且破坏血管壁弹力层和胶原纤维。,2、刺激血管平滑肌细胞增生：,Hcy可直接诱导血管平滑肌细胞增殖。,8,11/12/2024,8,3、致血栓作用：,Hcy可促进血栓调节因子的表达，激活蛋白C和凝血因子、，血小板内前列腺素合成增加，从而促进血小板粘附和聚集。,9,11/12/2024,9,Hcy通过多种途径损伤血管，它损伤血管内皮细胞同时刺激血管平滑肌细胞生长，二者导致的损伤阻塞血流通路；Hcy还破坏正常凝血机制；增加血栓形成引起心脏病发作及中风。,10,11/12/2024,10,4、脂肪、糖、蛋白代谢紊乱：,Hcy可促进脂质沉积于动脉壁，泡沫细胞增加，还可改变动脉壁糖蛋白分子纤维化结构，促进斑块钙化。,11,11/12/2024,11,5、干扰谷胱甘肽的合成：,谷胱甘肽是一种重要的高氧化剂，它能防止很多细胞成分的氧化互相作用，对血管产生保护作用。Hcy干扰谷胱甘肽的合成，从而对机体造成危害。,12,11/12/2024,12,6、影响体内的转甲基化反应：,Hcy浓度的升高会影响体内许多物质的甲基化过程，如核酸（DNA和RNA）、蛋白质、髓磷脂、多糖、胆碱和儿茶酚胺类的甲基化；甲基化能力的降低影响细胞的发育及分化，这可能是Hcy致病的关键因素。,13,11/12/2024,13,四、Hcy的测定方法,同位素法：,该方法灵敏度高，特异性强，但操作繁琐且有放射污染，未能推广使用。,色谱法：,灵敏度、特异性好，但仪器价格昂贵而不能推广。,荧光偏振免疫测定：,此法需要专门的荧光偏光免疫检测仪。,14,11/12/2024,14,ELISA,：,对仪器要求不高，易普及，但结果准确性相对较差。,放射免疫法：,结果准确，但有放射性污染，很少使用。,循环酶法：,快速、简便、灵敏度高。可上全自动生化分析仪，适用大批标本，临床应用广泛。,15,11/12/2024,15,Hcy循环酶法实验参数的设计,实验参数根据分析仪的不同有所差异，可要求试剂供应商提供相应的实验参数。,下面列举,OLYMPUS系列,的实验参数：,Sample Volume（样品体积）：9ul,R1 Volume （试剂1体积）：,167ul,R2 Volume （试剂2体积）：,45ul,Measure Wave1（主波长）：340nm,Measure Wave2（副波长）：700nm,16,11/12/2024,16,METHOD （反应类型）：END,Method Point（反应点）：2027,Reagent OD Limit（吸光度范围）：-2.02.5,Dynamic Range (反应范围)：350,Calibration Type（定标数）：,1点,Unit （单位）：umol/L,17,11/12/2024,17,五、同型半胱氨酸的临床应用,18,11/12/2024,18,1、心血管病防治,（1）HCY升高与动脉粥样硬化(AS)的关系：,1969年就曾有人从尸检中发现2例血浆Hcy浓度超过正常人几十倍的病儿存在广泛的动脉粥样硬化和动脉血栓。临床上发现高胱氨酸尿症病人早年多因全身动脉粥样硬化和血栓形成死于脑梗塞和心肌梗塞，这与血中Hcy升高有关。,19,11/12/2024,19,有学者在动物实验中观察到注射Hcy后引起高Hcy血症，23个月后发生动脉粥样硬化。认为高Hcy血症是发生动脉粥样硬化的独立危险因素。,20,11/12/2024,20,（3）Hcy水平与心血管疾病的危险性,通过血管内超声观察AS斑块情况，观察到血浆HCY 浓度,8umol/L,时，斑块明显增大（，p0.001）,表明与冠状动脉病变程度呈,正相关,。,*,Mayer E L,Robinson K,Jacobsen D W.et al.Low plasm homocyseine levels predic reduced atheroma burden in patient undergoing coronary intervention:Evideence from intravascular ultrsund.J Am Coll Cardiol,1995,25(special issum):81 A.,24,11/12/2024,21,冠动脉病变与血浆HCY浓度的关系,冠动脉造影,例数,年龄,血浆Hcy,P值,正常,20,50.1,2.6,10.6,0.45,0.02,单支病变,30,45.1,1.6,15.5,1.83,0.16,双支病变,35,55.7,1.6,17.8,2.05,15umolL为高Hcy血症，普通人群血浆Hey水平升高者只有不到5，而在脑卒中患者中可达3040。,28,11/12/2024,25,美国研究表明：,Hcy的升高是与中风有重要关联的危险因子。美国最新的数据显示中年后期男性中风发病率，处于,55-64这个年龄段的男性,相对于45-54年龄段的男性而言，前者患中风的几率是后者的三倍。,中风和脑血管疾病杂志2008；17；165-168“美国中年后期的男性发生中风的相关因子急剧增加”,29,11/12/2024,26,脑中风与血浆Hcy浓度的关系,例 数,血浆Hcy,P值,危 险,对 照,1832,12.8,/,/,中 风,1823,14.7,76岁）追踪调查8年Hcy,值，结果：Hcy超出14mol/L，患老年性痴呆的危险性增加1.8倍，患多异古怪痴呆发生率增加1.6倍。,英国OPTIMA项目研究发现：Hcy水平大于11.2mol/L的病人，三年后随访，发现他们大脑颞叶（包括海马）快速萎缩。,31,11/12/2024,28,3、糖尿病及并发症防治,国内外大量研究结果显示，血浆,Hcy,水平可作为,2-,型糖尿病患者患大血管疾病的独立危险因素。,监测糖尿病患者,Hcy,水平有利于对其预后的评估。,Hcy,升高在糖尿病伴肾脏、视网膜及血管并发症的患者更为严重,高,Hcy,血症也能促进糖尿病微血管并发症的发生与发展。,32,11/12/2024,29,4、CRF并发症防治,慢性肾功能衰竭（,CRF,）患者普遍有高,Hcy,血症，其发生率是正常人,33,倍。,尿毒症时一方面肝脏,蛋氨酸腺苷转移酶活性,升高，导致,S-,腺苷蛋氨酸水平升高；另一方面肾功能下降使,Hcy,代谢的必需产物,丝氨酸合成减少，导致,Hcy,代谢受抑制,引起,Hcy,的堆积。,33,11/12/2024,30,5、肺血栓栓塞症防治,研究表明，高,Hcy,血症（,20mol/L,）使得深静脉血栓的危险性明显增大，高,Hcy,血症可使深静脉血栓发生率增加,4,倍。,高,Hcy,是我国汉族人群肺血栓栓塞症（,PTE,）发病的一个独立的危险因子，降低,Hcy,可降低国人静脉血栓栓塞症（,VTE,）的危险。,34,11/12/2024,31,6、预测骨折风险,美国和荷兰的流行病学研究结果显示：高,Hcy,的人容易骨折，高,Hcy,组与低,Hcy,组相比，男性的骨折风险为后者的,4,倍，女性为,1.9,倍。,研究还显示：老年人骨折中,19%,是由高,Hcy,引起的。,Hcy,阻碍骨胶原纤维状蛋白质形成网状结构的作用可能就是高,Hcy,者容易骨折的原因。,35,11/12/2024,32,7、诊断与监测肝损伤,研究结果显示：血浆,Hcy,浓度在急性肝病和慢性肝病患者间差异有显著性；,血浆,Hcy,浓度对于慢性肝损伤的敏感性为,91%,，特异性为,89%,。以病理组织切片对照敏感性为,94%,，特异性为,89%,。,血浆,Hcy,浓度检测还可应用于对普通人群慢性肝病的筛选。,36,11/12/2024,33,8、优生优育与母婴健康,流行病,学,研究,报导：,血中,Hcy,值高的,妇,女容易,产,生妊娠,并发,症,(32%),；,早,产,(38%),；,新生,儿体,重,减,低,(99%),。,孕妇检测,Hcy,对,防,治,妊娠,并发,症,与优生优育（预防,早,产、流产、,新生,儿体,重,减,低,、,胎,儿,神,经,管畸型,等）具有重要意义。,37,11/12/2024,34,9、肿瘤防治,有研究发现：未服抗叶酸药物的乳腺癌、卵巢癌和胰腺癌中有许多患者的血清,Hcy,升高。,Ueland,和,Refsum,在白血病患者的研究认为,Hcy,升高是因肿瘤细胞的快速增殖所致。,许多恶性肿瘤细胞有对蛋氨酸的依赖性，蛋氨酸的依赖或高,Hcy,血症可能是恶性肿瘤一种表型的表达。,38,11/12/2024,35,Lily L,等在一组未用药的肿瘤患者中将,Hcy,浓度与主要的肿瘤标志物进行了比较，发现,Hcy,血清浓度的变化与血清肿瘤标志物,CA125,、,CA15-3,、,CA19-9,及,CEA,的变化是平行的。这提示血清,Hcy,与肿瘤标记物一样反应肿瘤细胞的活性或肿瘤细胞的快速增生状况。,39,11/12/2024,36,什么样的人需要做HCY检查？,已有CHD、脑血管病或周围AS病者；,有高血压、糖尿病、肥胖、吸烟者；,有CHD或AS家族史者，尤其是直系亲属中有早发病或早病死者；,有黄瘤或黄疣者；,有家族性高脂血症者；,40岁以上男性及绝经期后女性。,40,11/12/2024,37,六、血标本采,集注意事项,样品为血清或血浆，,空腹,8h,以上,，,采,血,后,1h,之內,离,心分,离,置,干净试,管中保存,。,样本稳定性：,室,温,：,2-7,天,；,2-8,：,14,天,；,-20,：几,年,。样品不宜反复冻融。,血,红,蛋白,胆红,素,甘油三脂,等对,Hcy,结,果,干扰小。,41,11/12/2024,38,七、Hcy参考值,空腹血浆总,Hcy,水平正常值为,515umol/L,理想值,10umol/L,高于,15umol/L,被认为是高,Hcy,血症,将高,Hcy,分为轻、中、重度，其空腹血浆浓度分别为,1530,、,31100,及大于,100umol/L,42,11/12/2024,