固相合成原理

*,*,The Peptide Quality Standard,多肽固相合成基本原理,1,一、多肽合成简史,20,世纪早期,Emil Fischer,引入肽与多肽的概念。,1920,1960,液相合成少数肽，但是纯度低、副产物多。,1963Bruce Merrifield,建立固相多肽合成方法，,solid-phase peptide synthesis(SPPS),。洛克菲洛大学电梯。,1984,，诺贝尔化学奖。,近,40,多年来，合成技术迅猛发展，合成超过,100,个长的肽已不是梦想。,2,二、多肽固相合成基本原理,按氨基酸顺序，定向形成肽键，得到目标分子；,C,末端的氨基酸固定在树脂上，反应，过滤洗涤，切割；,主要介绍,Fmoc,策略（,氨基保护基团为,Fmoc,）,3,脱保护,Fmoc,：,9,芴甲氧羰基（,Fluorenylmethoxycarbonyl,）,MW,：,223.254,PiP,：哌啶、六氢吡啶,（,Piperidine,）,MW,：,85.15,；密度：,0.86g/ml,；,熔点：,7,；沸点：,106,4,固相载体,Wang,树脂,2-Cl-Trt-,氯树脂（,Cys,、,His,、,Pro,）,Rink Amide MBHA,树脂,5,6,Fmoc,的脱除,Fmoc,基团的芴环基的吸电子作用使,9-H,具有酸性，易被较弱碱除去，反应条件很温和；哌啶进攻,9-H,消除形成二苯芴烯，很容易被二级环胺进攻形成稳定的加成物：,Fmoc,PiP,（取代度测定的就是其紫外吸收值）,7,溶剂,DCM：二氯甲烷（,Dichloromethane,）,MW：,84.94,；密度：1.33g/ml；熔点：96.7；沸点：39.8,作用：溶胀树脂、洗涤树脂,MeOH：甲醇（Methanol）,MW：32.0,4,；密度：0.79g/ml；熔点：93.9；沸点：64.8,作用：收缩树脂、洗涤树脂,DMF：N,N-二甲基甲酰胺（,N，N-dimethyformamideL,）,MW：73.1；密度：0.94g/ml；熔点：61；沸点：152.8,作用：良好溶剂、溶胀树脂、洗涤树脂,8,缩合试剂,HBTU NMM HATU,苯并三氮唑,-N,，,N,，,N-,甲基吗啡啉,2-(7-,偶氮苯并三氮唑,),N,，,N,，,-,四甲基脲,-N,，,N,，,N,，,N-,四甲基,六氟磷酸酯 脲六氟磷酸酯,MW,：,379.3 MW,：,101.2 MW,：,380.2,密度：,0.92,9,DIC HOBt,N,N-,二异丙基,羟基苯骈三氮唑,碳二亚胺,MW,：,126.2 MW,：,135.1,密度：,0.8,10,缩合原理,11,HATU/HBTU,法,12,DIC/DCC,法,13,缩合终点的判断,茚三酮检测（定性）,四氯苯醌检测（定性）,取代度测定（定量）,14,提高缩合效率的方法,增加氨基酸投量,延长反应时间,提高反应温度,更换反应液,换用活性更高的缩合试剂,更换反应溶剂（魔鬼溶剂）,超声、微波,15,副反应,消旋（,His,、,Cys,）,重排（,Asp,Gly,）,内成环（,Pro,）,封端（,HBTU/HATU,与树脂上的氨基）,16,切割,三氟乙酸（,TFA,）,苯酚（,phenol,）、水（,H,2,O,）、乙二硫醇（,EDT,）、三异丙基硅烷（,TIS,）、茴香硫醚（,thioanisole,）,Cocktail,法,17,“,如果你敢于在自己不熟悉的领域突破框框，从事研究，那么，你有可能获诺贝尔奖”,R.B.Merrifield,18,欢迎来到康贝生化！,谢谢大家！,19,