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Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,实验四病源性球菌(qijn)与杆菌,第一页，共36页。,二、实验内容,1.自己动手观察链球菌、脑膜炎双球菌的形态;示教观察结核杆菌、白喉杆菌的形态。,2.观察肠道杆菌的双糖发酵，鉴别培养基（ss培养基）的生化反应。,3.化脓性球菌的鉴定,三种(sn zhn)葡萄球菌的色素观察,乙型链球菌的溶血现象观察,抗“O”实验。,第二页，共36页。,三、作业：,1.镜下绘出4种形态图,2.根据生化特性(txng)及产生色素，葡萄球菌分为哪几种类型？,第三页，共36页。,实验四 病原(bngyun)性球菌,1.五类病原性球菌的形态、排列及染色性,2.葡萄球菌(p to qi jn)、链球菌的培养物,3.血浆凝固酶试验-玻片法,4、抗链球菌溶血素”O”（ASO）乳胶试验,示教,（操作(cozu)，1人/组）,示教,示教,示教,第四页，共36页。,G+球菌(qijn)：,金葡菌,链球菌,肺炎(fiyn)双球菌,1.五类病原性球菌(qijn)的形态、排列及染色性,示教,第五页，共36页。,G-球菌(qijn)：,淋球菌,脑膜炎球菌(qijn),第六页，共36页。,2.葡萄球菌(p to qi jn)、链球菌的培养物,示教,普通琼脂平板(pngbn)血平板(pngbn),菌落形状 色素 溶血性,金葡 圆形凸起光滑中等大小 金黄色 +,柠葡 同上 柠檬色 -,白葡 同上 白色 -,表,1,第七页，共36页。,血平板,甲型链球菌 针尖小菌落、草绿色狭窄(xizhi)溶血环,乙型链球菌 针尖小菌落、透明宽大溶血环,巧克力血平板,脑膜炎双球菌 菌落(jnlu)透明似露滴状,表,2,表,3,第八页，共36页。,大肠杆菌(d chn n jn)（EMB培养基）,结合凝固(nngg)酶：是一种结合于菌体胞壁的凝固(nngg)酶，是一种纤维蛋白原受体，使细菌凝聚成团成块块。,血平板,快速胶乳法,铁质双糖琼脂基上各种(zhn)肠道杆菌的生长情况,双糖(shun tn)铁 葡 乳 尿 H2S 靛 动力 血清学,快速胶乳法,大肠杆菌(d chn n jn),葡萄糖 乳糖 H2S 尿素 靛基质 动力(dngl)双糖铁,巧克力血平板,肠道杆菌在KI培养(piyng)基上的培养(piyng)特性,肠道杆菌(gnjn)的形态及染色片,寒杆菌 -+-+-/,方法(fngf)：,1：15 400,血浆(xujing)凝固酶试验 ：凝固酶分类,游离凝固(nngg)酶：为分泌到菌体外的类似凝血酶原样物质，被血浆中的协同因子激活而作用于纤维蛋白原使血浆凝固(nngg)。（试管法测定）,结合凝固(nngg)酶：是一种结合于菌体胞壁的凝固(nngg)酶，是一种纤维蛋白原受体，使细菌凝聚成团成块块。（玻片法测定）,第九页，共36页。,3.血浆凝固(nngg)酶试验-玻片法,（操作(cozu)，1人/组）,方法(fngf)：,兔血浆 兔血浆 生理盐水,1,2,3,金葡 白葡 金葡,+,凝集（,+,）,不凝集（,-,）,不凝集（,-,）,第十页，共36页。,4、抗链球菌溶血素“O”（ASO）,快速胶乳法,高滴度病人血清被适量溶血素中和了正常水平,的抗体(kngt)后，还有多余ASO，这些多余抗体(kngt)即与SLO胶乳,试剂反应，出现清晰、均匀的凝集颗粒。,（操作(cozu)，1人/组）,原理(yunl)：,第十一页，共36页。,阳性对照 阴性(ynxng)对照 待测血清,各加溶血素“O”1滴轻摇1min,再加SLO胶乳1滴轻摇3min,观察(gunch)结果,方法(fngf)：,第十二页，共36页。,稀释(xsh)度 ASO（IU/ml）,1：15 400,1：30 800,1：60 1600,ASO250 IU/ml 阴性(ynxng),结果(ji gu)判定：,第十三页，共36页。,注意事项：,液体量要一样，菌量一样。,血浆多挑几环（一滴的量），菌少挑点，,不能干。,3.涂菌时间一样，出现凝集为阳性(yngxng)，再涂,凝集物可被涂散，变阴性。,第十四页，共36页。,肠道杆菌(gnjn),一、肠道杆菌的形态及染色性,二、肠道杆菌的培养特性,三、肠道杆菌的生化反应(fnyng)特点,四、Widal实验,第十五页，共36页。,肠道杆菌(gnjn)的形态及染色片,第十六页，共36页。,肠道菌的菌落(jnlu)形态,EMB,大肠：菌落呈紫黑色，有金属光泽。,伤寒(shnghn)痢疾：菌落无色半透明。,SS,D大肠：大而不透明的红色菌落。,伤寒(shnghn)痢疾：中等大小淡黄色菌落。,第十七页，共36页。,大肠杆菌(d chn n jn)（EMB培养基）,第十八页，共36页。,肠道致病菌（,SS,培养基）,第十九页，共36页。,粪便标本中致病性肠道杆菌的分离(fnl)与鉴定,第二十页，共36页。,生化(shn hu)反应1单糖发酵,葡萄糖及乳糖发酵,一）实验目的与原理,了解糖发酵试验方法,二）实验材料,1、菌种：大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌培养物,2、培养基：乳糖及葡萄糖发酵管,三）实验方法,、用接种(jizhng)环将大肠杆菌、伤寒杆菌分别各接种(jizhng)于葡萄糖及乳糖发酵管中（方法同前）。,2、37孵育1824小时，取出观察结果。,第二十一页，共36页。,动力(dngl)检测,第二十二页，共36页。,菌名,葡萄糖,甘露醇,乳糖,靛基质,甲基红,VP,试验,枸椽,酸盐,硫化氢,尿素,分解,动力,福氏志贺菌,+,+,/+,+,伤寒沙门菌,+,+,+,/+,+,+,乙型副伤寒沙门菌,+,+,+,大肠杆菌,+,+,+,产气杆菌,+,+,+,普通变形杆菌,+,+,/+,+,+,+,常见肠道杆菌的生化(shn hu)反应鉴别表,第二十三页，共36页。,斜面,底部,H,2,S,初步鉴定,+,+,非病原菌,非病原菌,+,+/,副伤寒杆菌及其他沙门氏菌,+,+,伤寒杆菌,+,痢疾杆菌,铁质双糖琼脂基上各种(zhn)肠道杆菌的生长情况,第二十四页，共36页。,肠道杆菌在KI培养(piyng)基上的培养(piyng)特性,第二十五页，共36页。,Indol实验(shyn),生化(shn hu)反应2Indol实验,第二十六页，共36页。,2.肠道杆菌在SS培养基上的生长(shngzhng)现象,示教,大肠杆菌(d chn n jn)伤寒杆菌,SS平板 红色大菌落 无色透明小菌落,基础(jch)培养基，乳糖(底物)，胆盐、煌绿(抑制非致病菌)，中性红（指示剂）。,SS,培养基：,第二十七页，共36页。,3.五类肠道杆菌的生化反应(fnyng)及动力,示教,大肠杆菌(d chn n jn)-+/,变形杆菌 -+/-+-/,乙型副伤,寒杆菌 -+-+-/,伤寒杆菌 +-+/-+-/+,痢疾杆菌 +-+/-/+,葡萄糖 乳糖 H2S 尿素 靛基质 动力(dngl)双糖铁,第二十八页，共36页。,4.肠道杆菌(gnjn)未知菌1和未知菌2的鉴定,（操作(cozu)，2人/组）,未知菌,双糖铁培养基(乳糖(r tn)/固体/上，葡萄糖/半固体/下),生化反应,葡萄糖发酵,乳糖发酵,尿素酶试验,H,2,S,试验,靛基质试验（,蛋白胨水液体培养基,）,动力试验（,半固体培养基,）,（,微量发酵管,）,方法：,血清学鉴定（玻片凝集反应）,（,371824h,）,第二十九页，共36页。,伤寒(shnghn)诊断血清 伤寒(shnghn)诊断血清,+,未知菌1 未知菌2,血清学鉴定(jindng)（玻片凝集反应）,？,第三十页，共36页。,结果(ji gu)：,双糖(shun tn)铁 葡 乳 尿 H2S 靛 动力 血清学,未知菌1,未知菌2,结论(jiln)：,未知菌,1,：？,未知菌,2,：？,第三十一页，共36页。,第三十二页，共36页。,管号,加入物,1,2,3,4,5,血清（,Ab,）,1,：,250,血清,0.25ml,1:500,血清,0.25ml,1:750,血清,0.25ml,缓冲液,0.25ml,0.25ml,溶血素“,O”(Ag),0.25ml,0.25ml,0.25ml,0.25ml,2%,兔,RBC,0.5ml,0.5ml,0.5ml,0.5ml,0.5ml,结果,第三十三页，共36页。,Salmonella-Shigella Mediun,主要成分(chng fn),基础营养,乳糖,指示剂,抑制剂,分解(fnji)乳糖,不分解(fnji)乳糖,产酸,PH,指示剂变红色,红色大菌落,大肠杆菌等,无明显变化,无色半透明小菌落,志贺菌等,第三十四页，共36页。,大肠杆菌(d chn n jn),痢疾杆菌,第三十五页，共36页。,第三十六页，共36页。,
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