需氧芽孢杆菌课件

,*,需氧芽孢杆菌,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,1,需氧芽孢杆菌,1需氧芽孢杆菌,2,需氧芽胞杆菌属（,Bacillus,）,48,个种,与医学有关,5,个种,炭疽芽胞杆菌（,B.anthracis,）,蜡样芽胞杆菌（,B.cereus,）,蕈状芽胞杆菌（,B.mycoides,）,巨大芽胞杆菌（,B.megaterium,）,苏云金芽胞杆菌（,B.thuringiensis,）,2,3,需氧芽孢杆菌,一、临床意义,炭疽是人畜共患的急性传染病,主要是牛、羊等食草类动物的传染病，人可通过接触或摄食病畜及畜产品而感染,皮肤炭疽、肠炭疽、肺炭疽等，,并发败血症，甚至炭疽性脑膜炎,3需氧芽孢杆菌一、临床意义,4,需氧芽孢杆菌,荚膜：,抗吞噬，有利于细菌在组织内繁殖扩散,炭疽毒素：,保护性抗原、致死因子、水肿因子,4需氧芽孢杆菌荚膜：,5,需氧芽孢杆菌,炭疽病,：,传染源：患病食草动物及其制品或被污染物,传播途径：接触,皮肤炭疽,食用,肠炭疽,吸入,肺炭疽,可并发败血症，,死亡率极高,5需氧芽孢杆菌炭疽病：,6,乙类传染病,发生肺炭疽按甲类处理,病后可获得持久免疫力,6乙类传染病病后可获得持久免疫力,7,形态染色,:,致病菌中最大的,G,+,杆菌，,两端平切、竹节状,有毒株可有明显荚膜,二、微生物特性,炭疽芽胞杆菌,亚甲基蓝染色,1000,革兰染色,1000,7形态染色:二、微生物特性 炭疽芽胞杆菌,8,芽胞,椭圆形，小于菌体，位于菌体中央,多在有氧条件下形成，,25,30,，在培养基中、土壤内、动物尸体解剖后暴露在空气中，都易形成芽胞,在活体或完整未解剖尸体内不形成芽胞，,尸,体严禁解剖,8芽胞椭圆形，小于菌体，位于菌体中央,9,培养特性：,需氧或兼性厌氧，生长条件不严格，最适温,度,30,35,普通培养基,扁平、粗糙、不透明、灰白色、,无光泽，边缘不整齐的菌落，低倍镜下菌落边,缘呈卷发状,9培养特性：,10,BAP,：,12,15h,不溶血，,18,24h,轻微溶血,其他需氧芽胞杆菌大多溶血明显而快速,炭疽杆菌在血琼脂平板中菌落,10BAP：1215h不溶血，1824h轻微溶血炭疽杆菌,11,肉汤,絮状沉淀生长,明胶,3718,24h,表面液化成漏斗状，由于细菌沿穿刺线向四周扩散形成倒松树状。,NaHCO,3,BAP,：,-,有毒株,5%CO,2,、,3724,48h,、产生荚膜,呈黏液型菌落，挑取时呈粘丝状,(,鉴别要点,),-,无毒株,粗糙型菌落,11肉汤絮状沉淀生长,12,需氧芽孢杆菌,分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、蕈糖，,有些菌能迟缓发酵甘油和水杨素产酸不产气,水解淀粉、还原硝酸盐,不产生吲哚和硫化氢、不利用柠檬酸盐、不,分解尿素,在牛乳中生长,2,4,天牛乳凝固,缓慢胨化,触酶（,+,）、卵磷脂酶弱（,+,）,12需氧芽孢杆菌分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、蕈糖，,13,抗原构造：,菌体多糖抗原：,-,与毒力无关，耐热、耐腐败，长时间煮沸仍能与特异性抗体发生环状沉淀反应（,Ascoli,热沉淀反应）。,-,特异性不高，能与其他需氧芽胞杆菌、,14,型肺炎链球菌、人,A,血型抗原发生交叉反应。,13 抗原构造：,14,荚膜多肽抗原：,-,与毒力有关，有抗吞噬作用，有利于细,菌生长和扩散,-,荚膜肿胀试验，对本菌鉴定有意义,芽胞抗原：,有免疫原性和血清学诊断价值,14荚膜多肽抗原：,15,炭疽毒素：,-,保护性抗原（,PA),、致死因子（,LF,）、水肿,因子（,EF,）三个组分,-,单独皆无致病性，与,PA,结合才显示出致病性,-,具有抗吞噬和免疫原性,15炭疽毒素：,16,需氧芽孢杆菌,-,芽胞抵抗力很强，煮沸,10min,或干热,140,3h,才能杀灭,-,在干燥土壤中或皮毛中常温下存活数十年致,病力不减，牧场一旦污染，传染性可持续数,十年,-,生物武器,16需氧芽孢杆菌-芽胞抵抗力很强，煮沸10min或干热14,17,-,芽胞对化学消毒剂抵抗力不一，对碘和氧化,剂较敏感，常用以下方法杀菌：,1,：,2500,碘,10min,、,3%H,2,O,2,1h,、,4%,高锰酸钾,15min,、,0.5%,过氧乙酸,10min,-,对磺胺、青霉素、链霉素、四环素、红霉素、,氯酶素均敏感,17-芽胞对化学消毒剂抵抗力不一，对碘和氧化,18,要求快速检出、分离鉴定病原菌，以利早期确诊、查清疫源、及时治疗和采取预防对策,三、微生物学检验,18要求快速检出、分离鉴定病原菌，以利早期确诊、查清疫源、及,19,需氧芽孢杆菌,皮肤炭疽：病灶深部标本,肺炭疽：痰和血液,肠炭疽：粪、呕吐物,脑膜炭疽：,CSF,、血液,死于败血症的动物，严禁宰杀和解剖，可消,毒皮肤后割取耳朵、舌尖采集少量血液，局,限性病灶可取病变组织或附近淋巴结。,19需氧芽孢杆菌皮肤炭疽：病灶深部标本,20,无杂菌污染标本：直接接种肉汤增菌或固体培养基,污染杂菌固体标本：加,10,倍量生理盐水充分浸泡，振,荡,10,15min,、静置,10min,，取悬液,65,水浴,30min,或,855min,杀死杂菌，保留芽胞活性，再增菌和培养,污染杂菌液体标本：离心，弃上清液后，加,0.5%,洗涤,剂振荡,10,15min,，离心取沉淀物增菌和分离培养,20无杂菌污染标本：直接接种肉汤增菌或固体培养基,21,生化反应,噬菌体裂解,青霉素抑制,毒力试验,检验程序,皮毛、腐败脏器等,血液,Ascoli,试验,以,NG,制成悬液经加温或饱和尿素处理,肉汤增菌培养,BAP,或戊烷脒平板,2%,兔血清肉汤,4-8h,G,染色镜检,菌落特征,动力观察,串珠试验,确定报告,荚膜肿胀试验,21生化反应噬菌体裂解青霉素抑制毒力试验检验程序皮毛、腐败脏,22,痰、呕吐物、,CSF,及炎症分泌物,2%,兔血清肉汤快速增菌,374h,荚膜肿胀试验,直接涂片,荚膜染色,G,染色,初步报告,0.2ml,注射小白鼠腹腔，,8h,后解剖,涂片,G,染色、荚膜染色,初步报告,22痰、呕吐物、CSF及炎症分泌物2%兔血清肉汤快速增菌37,23,涂片染色：,-G,染色、荚膜染色、芽胞染色,初步报告,-,荚膜荧光抗体染色,核酸检测：,核酸杂交,分离培养：,-BAP,、戊烷脒多粘菌素,B,平板,-2%,兔血清肉汤增菌,分离培养,23涂片染色：,24,鉴定试验,：,形态和菌落特征,生化试验,:,表,11-1,串珠试验,:,-,接种于含青霉素,(0.05,0.5U/ml),的肉汤,中，,37 6h,，大而均匀成串的圆球状菌体,-,与青霉素抑制细菌细胞壁合成有关,-,类炭疽无此现象,24鉴定试验：,25,青霉素抑制试验：,接种于含青霉素,5,、,10,、,100U/ml,琼脂平板，,3724h,生长 受抑制不生长,串珠和青霉素抑制联合试验：,兔血琼脂平板,抑菌环,青霉素纸片,25青霉素抑制试验：兔血琼脂平板抑菌环青霉素纸片,26,噬菌体裂解试验：,AP631,炭疽噬菌体,NaHCO,3,毒力试验：,接种于含,0.5%NaHCO,3,和,10%,马血清的平板，,10%CO,2,、,37,、,24,48h,有毒株形成荚膜,黏液型菌落,无毒株不形成荚膜,粗糙型菌落,动物试验：,小鼠、家兔或豚鼠皮下接种,26 噬菌体裂解试验：AP631炭疽噬菌体,27,植物凝集素试验：,Ascoli,热沉淀试验：,可作追溯性诊断,27植物凝集素试验：,28,需氧芽孢杆菌,28需氧芽孢杆菌,29,需氧芽孢杆菌,食物中毒,含菌量达,10,5,/g,以上,呕吐型,耐热肠毒素,腹泻型,不耐热肠毒素,全眼球炎（外伤后）,心内膜炎、败血症和脑膜炎,29需氧芽孢杆菌食物中毒,30,夏、秋季多见,食物有米饭、乳品、禽畜肉类、果汁饮料等，大多为加热烹调过的熟食,在米饭中极易繁殖，由米饭受污染引起的食物中毒在国内、外均为常见,中毒食物大多无腐败、变质现象，感官性状正常，应引起注意,30夏、秋季多见,31,形态与染色：,-G,+,大杆菌,-,生长,6h,后即形成圆形芽胞、位于,菌体中心或次末端、不突出菌体,-,菌体两端平截，多数呈链状排列,-,引起食物中毒的菌株多有周鞭,毛、无荚膜,需氧芽孢杆菌,31形态与染色：需氧芽孢杆菌,32,培养特性：,需氧或兼性厌氧,营养要求不高,最适温度,3035,普通琼脂平板：菌落较大，,灰白色，表面粗糙似,毛玻璃状,或,融蜡状,，有,蜡样光泽,32培养特性：,33,BAP,有,溶血,卵黄平板,生长迅速，培养,3h,后，虽看不到菌落，但该菌可分解卵磷脂而形成白色的混浊环，称,乳光反应,或,卵黄反应,33BAP 有溶血,34,生化反应：,能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、水杨素、糊,精，产酸不产气,能胨化牛乳，液化明胶，,VP,（,+,）、卵磷脂,酶（,+,）,多次传代后生化特性常可改变,34生化反应：,35,抵抗力：,耐热，肉汤中细菌需,10020min,才能杀死，,食物中毒菌株的游离芽胞耐受,10030min,、,干热,12060min,才能杀死,对氯霉素、红霉素、庆大霉素敏感，对青霉,素、磺胺、呋喃类耐药,35抵抗力：,36,需氧芽孢杆菌,标本采集：,可疑食物、粪便、呕吐物，因食品暴露于空气中，在一定程度都会受到本菌污染，所以不能分离出该菌就认为是引起食物中毒的病原菌。,36需氧芽孢杆菌标本采集：,37,需氧芽孢杆菌,从食物中分离出菌数,10,5,CFU/g,，提示本菌活跃生长，构成潜在危险,从可疑食物分离到的菌株与从病人粪便和,(,或,),呕吐物中分离到的菌株属同一血清型,37需氧芽孢杆菌从食物中分离出菌数105CFU/g，提示本,38,检验程序,呕吐物、残留食物等,活菌计数,接种 普通琼脂平板、,BAP,、卵黄平板,3718-24h,纯培养,动物试验（肠毒素测定）,生化反应,血清凝集（分型）,报告结果,直接涂片染色镜检,38检验程序呕吐物、残留食物等活菌计数 接种,39,检验方法：,直接镜检,分离培养与活菌计数,普通琼脂平板、,BAP,、卵黄平板,鉴定与分型：,根据菌落特点、形态染色、生化反应等初步鉴定,生化分型、血清分型、噬菌体分型，肠毒素检测,39检验方法：,