细菌鉴定流程课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,细菌鉴定流程,1,细菌鉴定流程1,葡萄球菌,2,葡萄球菌2,金黄色葡萄球菌,血平板上生长的由白色至黄色,奶酪样,不透明,革兰阳性球菌.,触酶阳性,凝固酶试验阳性,或商用乳胶凝胶试剂阳性,3,金黄色葡萄球菌血平板上生长的由白色至黄色,奶酪样,不透明,革,金葡鉴定注意事项,玻片凝固酶,注意：施葡萄球菌和路邓葡萄球菌也可为阳性，但凝集反应呈片状或块状。可通过,PYR（吡咯烷酮酶）试验,与金黄色葡萄球菌鉴别。,施葡萄球菌和路邓葡萄球菌为PYR（吡咯烷酮酶）强阳性,立即产生红紫色,而金黄色葡萄球菌为阴性或弱阳性,4h快速试管凝固酶试验阳性,注意：1.试管法应该至少每小时判读一次直至4h.试管法的最后读取应在4h,后.,2.中间葡萄球菌和猪葡萄球菌可在12-24h,试管凝固酶试验为阳性.,3.凝固酶试验仅推荐用无菌乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝兔血浆.,*,商用乳胶凝胶试剂,腐生葡萄球菌在某些情况下可表现为阳性,但其玻片凝固酶及试管凝固酶试验通常为阴性.,因此,商用凝集试验阳性结果不能用来鉴别尿中的非溶血葡萄球菌,4,金葡鉴定注意事项玻片凝固酶4,关键试验,触酶,OF,（氧化发酵）试验,血浆凝固酶：,玻片法，试管法,5,关键试验触酶5,链球菌科细菌,溶血,：肺炎链球菌,溶血,：化脓性链球菌,B,群链球菌,C,、,G,群链球菌,溶血,：肠球菌,6,链球菌科细菌溶血：肺炎链球菌6,肺炎链球菌,菌落形态,Optochin,试验：,注意耐药菌株,胆汁溶菌试验,7,肺炎链球菌菌落形态7,溶血,链球菌,鉴定,菌种,血清分群,杆菌肽,CAMP,SMZ,化脓性链球菌,A,敏感,R,无乳链球菌,B,耐药,+,R,C,群、,G,群,C,、,G,耐药,S,8,溶血链球菌鉴定菌种血清分群杆菌肽CAMPSMZ化脓性链球,溶血,链球菌,化脓性链球菌,B,群链球菌,9,溶血链球菌 化脓性链,杆菌肽试验,CAMP,试验,10,杆菌肽试验CAMP试验10,化脓链球菌-CLSI,BAP上孵育24H 后出现,溶血,菌落直径=0.5mm,干燥,凸起或有边缘清晰的溶血环.,革兰阳性球菌,成双或成链排列,触酶阴性,PYR（吡咯烷酮酶）试验阳性,可确认为化脓链球菌,用血清凝集方法鉴定的准确性接近100%,11,化脓链球菌-CLSIBAP上孵育24H 后出现溶血,菌落直,无乳链球菌-CLSI,血平板上常表现为边缘光滑的窄的,溶血环,革兰阳性球菌成对或成链,触酶阴性,;,快速马尿酸盐水解试验阳性或快速,CAMP,因子斑点试验阳性均可准确鉴定无乳链球菌,商用凝集试验鉴定该菌准确性接近,100%,12,无乳链球菌-CLSI血平板上常表现为边缘光滑的窄的溶血环,肠球菌,触酶试验阴性,七叶苷试验阳性,6.5%NaCl,肉汤生长（高盐,+,）,13,肠球菌触酶试验阴性13,肠球菌鉴定-CLSI,血平板上菌落大于1mm,BAP上非溶血且触酶阴性,革兰染色形态为阳性球菌或球杆菌成对或成链,PYR（吡咯烷酮酶）试验,阳性可鉴定为肠球菌属.,增加,亮氨酸氨肽酶(LAP)试验,可更好地鉴定,溶血肠球菌,14,肠球菌鉴定-CLSI14,革兰阳性细菌鉴定卡GP,-,VITEK-2,注意事项：,细菌的要求：,新鲜；纯培养菌落,无菌盐水：,0.45%-0.50%NaCL,pH 4.5-7.0,浊度：,0.50-0.63,悬浮接种物接种于卡前，不能超过,30min,可能性百分率：,可接受,85%,附加信息：,补充实验,矛盾实验,15,革兰阳性细菌鉴定卡GP-VITEK-2,革兰阳性细菌鉴定卡,GP,-,VITEK-2,局限性,:,VITEK-2,GP,卡,不能直接用于临床标本或含有混合菌,的样本，对过程的改变或修改都可能影响结果。,新的说明或罕见菌株不包含在,GP,数据库中，当所选菌株可获得时可加入数据库，但对没有记录的种类进行检测时可能导致不被识别或错误鉴定,质控：,每月以及更换批号时,用相应的质控菌株（依说明书，可选铅黄肠球菌,ATCC700327,或金葡,ATCC29213,等）在仪器的质控通道下进行操作。,16,革兰阳性细菌鉴定卡GP-VITEK-2,17,17,革兰阴性杆菌,18,革兰阴性杆菌18,肠杆菌科细菌,主要生化反应,发酵葡萄糖（产酸或产酸产气）：,KIA,（克氏双糖铁试验）或三糖铁试验,H,2,O,2,（触酶）,+,OX,（氧化酶）-,19,肠杆菌科细菌主要生化反应发酵葡萄糖（产酸或产酸产气）：K,肠杆菌科细菌,大肠埃希菌：,动力“,+”,；但某些菌株动力“,”,克雷伯菌属：,动力,-,，脲酶,肠杆菌属，泛菌属，哈夫尼菌属：,枸橼酸杆菌属：,生化反应不定,沙雷菌属：,变形杆菌属，普罗威登菌属，摩根菌属：,20,肠杆菌科细菌大肠埃希菌：动力“+”；但某些菌株动力“”2,肠杆菌科细菌,沙门菌属：,KIA,（克氏双糖铁）,-/+,，,M,（动力）,+,，,H2S,（硫化氢）,+,（但,甲型副伤寒,H,2,S-,）,志贺菌属：,KIA,（克氏双糖铁）,-/+,，,M,（动力）,-,耶尔森菌属：,鼠疫耶尔森菌,烈性传染病鼠疫的病原菌,；小肠结肠炎耶尔森菌,37,动力,-,；但,25,，动力,；假结核耶尔森菌,人兽共患性疾病,21,肠杆菌科细菌沙门菌属：KIA（克氏双糖铁）-/+，M（动力,大肠埃希菌-CLSI,革兰阴性杆菌,不迁徙生长,斑点吲哚试验阳性,氧化酶阴性,有以上特征并且血平板上形成溶血菌落,即可报告为大肠埃希菌.,或吲哚阳性,血平板菌落不溶血且麦康凯或伊红美兰(EMB)平板上的菌落乳糖分解阳性,快速吡咯烷酮芳基酰胺酶,(PYR),试验阴性可确认为大肠埃希菌。,或BAP菌落不溶血,乳糖分解阴性,4-甲基伞型酮,-D-,葡糖苷酸酶,(MUG),试验阳性也可确证为大肠埃希菌,22,大肠埃希菌-CLSI革兰阴性杆菌,不迁徙生长22,变形杆菌-CLSI,菌落一定是有迁徙生长现象.,奇异变形杆菌吲哚-,普通变形杆菌+,彭氏变形杆菌与奇异变形杆菌的鉴别,菌种 麦芽糖 鸟氨酸脱羧酶,彭氏变形杆菌 阳性 阴性,奇异变形杆菌 阴性 阳性,23,变形杆菌-CLSI菌落一定是有迁徙生长现象.23,非发酵菌,试 验,菌属,假单胞菌属,无色杆菌属,黄杆菌属,不动杆菌属,产碱杆菌属,丛毛菌属,摩拉菌属,氧化酶试 验,+,+,+/,+,+,+/,葡萄糖发酵试验（,O/F,）,O/,O,O,O/,动力,+/,+/,+/,+,+,24,非发酵菌试 验菌属假单胞菌属无色杆菌属黄杆菌属不动杆菌属产,铜绿假单胞菌-CLSI,革兰阴性杆菌.氧化酶阳性,菌落有典型的气味(,康科德葡萄或玉米饼,)和形态特征(金属或珍珠般光泽,粗糙,产色,有时极其黏稠).,黏液型菌株革兰染色时在革兰阴性杆菌的周围常常可见橙色区域.,局限性,极少数气单胞菌属分离菌株可与铜绿假单胞菌形态相似(缺乏典型气味),可通过斑点吲哚试验区分(气单胞菌属阳性,铜绿假单胞菌阴性).,分离于囊性纤维化患者的菌株应仔细鉴别,因为形态不典型的铜绿假单胞菌很常见,而且某些洋葱伯克霍尔德分离菌株与铜绿假单胞菌形态相似.,25,铜绿假单胞菌-CLSI革兰阴性杆菌.氧化酶阳性,菌落有典型的,弧菌属与气单胞菌，邻单胞菌鉴别,试验,弧菌属,气单胞菌,邻单胞菌,氧化酶,6.5%Nacl,生长,d,赖氨酸,d,V,150mg O/129,纸片,s,R,S,10mg O/129,纸片,d,R,S,26,弧菌属与气单胞菌，邻单胞菌鉴别试验弧菌属气单胞菌邻单胞菌氧化,革兰阴性细菌鉴定卡GN,-,VITEK-2,注意事项：,细菌的要求：,新鲜；纯培养菌落,无菌盐水：,0.45%-0.50%NaCL,pH 4.5-7.0,浊度：,0.50-0.63,悬浮接种物接种于卡前，不能超过,30min,可能性百分率：,可接受,85%,附加信息：,补充实验,矛盾实验,27,革兰阴性细菌鉴定卡GN-VITEK-2,革兰,阴性细菌鉴定卡GN,-,VITEK-2,局限性,:,VITEK-2,GN,卡,不能直接用于临床标本或含有混合菌,的样本，对过程的改变或修改都可能影响结果。,新的说明或罕见菌株不包含在,GN,数据库中，当所选菌株可获得时可加入数据库，但对没有记录的种类进行检测时可能导致不被识别或错误鉴定,质控：,每月,以及更换批号时,用相应的质控菌株（依说明书，可选嗜麦芽窄食单胞菌,ATCC17666,或鲍曼,ATCC BAA-747,等）在仪器的质控通道下进行操作。,28,革兰阴性细菌鉴定卡GN-VITEK-2,29,29,革兰阴性球菌,奈瑟菌属：,脑膜炎奈瑟菌,淋病奈瑟菌,卡他莫拉菌,30,革兰阴性球菌奈瑟菌属：脑膜炎奈瑟菌30,奈瑟氏菌-CLSI,脑膜炎奈瑟氏菌在,血平板,上形成有光泽、浅灰色菌落，为革兰阴性双球菌，氧化酶和,-,谷氨酰氨肽酶阳性,淋病奈瑟氏菌为革兰阴性双球菌，氧化酶阳性，在巧克力平板上形成小而有光泽的菌落，通常不在,血平板,上生长,在MH琼脂平板或胰蛋白酶大豆琼脂平板上不能生长.淋病奈瑟氏菌,-,半乳糖苷酶和,-,谷氨酰氨肽酶均阴性,对30%的过氧化氢有强烈反应,相反脑膜炎奈瑟氏菌往往反应较微弱.,31,奈瑟氏菌-CLSI脑膜炎奈瑟氏菌在血平板上形成有光泽、浅,脑膜炎奈瑟氏菌,32,脑膜炎奈瑟氏菌32,淋病,奈瑟氏菌,33,淋病奈瑟氏菌33,卡他莫拉菌,葡萄糖+。,硝酸盐还原-。,DNA酶或丁酸甘油酯酶+,34,卡他莫拉菌葡萄糖+。34,卡他莫拉菌-CLSI,菌落光滑、圆形、不透明的灰白色或米黄色,特征性的“冰球”试验阳性。,即用接种环轻推菌落可将整个菌落在平板表面移动。,本菌为革兰阴性双球菌，氧化酶、触酶均阳性。,在,血平板,和巧克力平板上都能生长.,快速丁酸酯酶,(三丁酸甘油酯水解)试验阳性可用于本菌的鉴定,也可用醋酸吲哚试纸快速试验阳性来代替.,35,卡他莫拉菌-CLSI菌落光滑、圆形、不透明的灰白色或米黄色3,卡他莫拉菌,36,卡他莫拉菌36,奈瑟菌、嗜血杆菌鉴定卡,-,VITEK-2 NH,注意事项：,细菌的要求：,新鲜；纯培养菌落,无菌盐水：,0.45%-0.50%NaCL,pH 4.5-7.0,浊度：,2.70-3.30,放入仪器前菌液室温放置时间,85%,附加信息：,补充实验,少见实验,37,奈瑟菌、嗜血杆菌鉴定卡-VITEK-2 NH,奈瑟菌、嗜血杆菌鉴定卡,-,VITEK-2 NH,培养基,:,最好用说明书指定的培养基，如巧克力琼脂,质控：,每月,以及更换批号时,用相应的质控菌株（如流感嗜血杆菌,ATCC9007,等）在仪器的质控通道下进行操作。,38,奈瑟菌、嗜血杆菌鉴定卡-VITEK-2 NH,39,39,40,40,布鲁氏菌,血培养皿培养,5,天后,菌体镜下形态,-,革兰染色,41,布鲁氏菌血培养皿培养5天后菌体镜下形态-革兰染色41,布鲁氏菌,-,CLSI,触酶,+,氧化酶,+,吲哚试验,-,有上述生化反应特征且,2h 内脲酶反应阳性,的微生物应被推定为布鲁氏菌种,并应立即采取生物恐怖预防措施,转交给最近的参考实验室或当地卫生部门进行确证.,42,布鲁氏菌-CLSI42,43,43,鉴定一定要有全局的观念,菌是否纯,涂片结果,菌落特点,标本来源,关键试验,有时需结合药敏判断,注意：不能盲目相信仪器鉴定结果,44,鉴定一定要有全局的观念菌是否纯注意：不能盲目相信仪器鉴定结果,