活性氧（ROS）介导的乙醛氧化损伤心肌致细胞凋亡的初步研究

Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,活性氧ROS介导的乙醛氧化损伤心肌致细胞凋亡的初步研究,上海中山医院,心血管病研究所,研究背景,酒精性心肌病迅速蔓延,在西方世界，酒精是继发性非缺血性扩张型心肌病主要原因,1),据统计，成年人,2/3,不同程度饮酒,2),酒精性心肌病,1/3,以上与酒精有关,在中国，随着生活水平不断提高，酒精性代谢相关疾病增多,乙醇？乙醛？损伤心肌,乙醇，乙醛诱导心肌细胞比较实验,1养化应激水平,2细胞凋亡水平,转基因过表达ADH或ALDH比较实验,1过表达ADH加剧心肌收缩功能障碍,2过表达ALDH减少心肌细胞凋亡,乙醇 乙醛 乙酸,ADH,ALDH,乙醛通过何种途径损伤心肌？,心肌肥大、凋亡致功能改变,遗传因素,病毒感染,DNA,突变,免疫改变,T,细胞杀伤,心肌炎,ROS,ROS,途经导致静脉内皮细胞凋亡,J.Biol.Chem.279:11244.,心肌细胞胞浆特异表达,-MHC,200,体外心肌细胞培养,ROS,随乙醛诱导浓度增加的变化,umol/L,ROS,随乙醛诱导时间增加的变化,h,乙醛诱导心肌细胞,Bcl-2,蛋白表达,0 2 6 12 18 24 48,h,不同条件诱导下,ROS,的变化,乙醛诱导细胞培液上清,SOD,活性,h,乙醛诱导心肌细胞实验结论,ROS,介导的氧化损伤是乙醛诱导心肌细胞凋亡的主要原因,乙醛较,H,2,O,2,诱导产生的,ROS,增量水平低,，,提示乙醛对心肌作用为慢性氧化损伤,乙醛介导的氧化损伤可能经线粒体途径发挥作用,降低细胞内氧化应激水平可有效改善心肌缺氧缺血状态，,减少心肌细胞凋亡,心肌凋亡,ROS,心力衰竭,功能障碍,扩张型心肌病,？,ALDH2,蛋白质组学研究意义,筛选出差异蛋白,研究与疾病的相关性,SD,鼠心力衰竭模型中,ALDH2,明显下调,染色体定位：,12q24.2,蛋白定位：,线粒体内膜,醛脱氢酶,2,aldehyde dehydrogenase(ALDH2),线粒体功能,ROS,产生主要场所,引起氧化损伤,ATP,能量来源,抗氧化酶系,凋亡和抗凋亡蛋白,Bcl,家族,线粒体功能,ALDH2,的,mRNA,转录水平表达,Normal Transplant,GAPDH,ALDH2,心肌组织,ALDH2,活性测定结果,RT-PCR,Western Blot,在,SD,鼠心衰模型中,D,D,D,D,Real time-PCR,54KD,36KD,ALDH2/pAd-HM4,质粒构建,CAG,poly A,PI-SceI,I-CeuI,KpnI,ApaI,XhoI(2),SalI(2),BamHI(2),XbaI(2),SalI(2),PstI(2)?,SphI,HindIII(3),total 35.3kb,1720bp,730bp,30.3kb,Amp,r,XbaI 2),ALDH2,1954bp,EcoR,Pst,Bgl,Bgl,Hind,0.8kb,2.5kb,Adeno virus genome,E3(-)(28133-30818),Adeno virus genome,E1(-)(342-3523),ITR,ITR,PacI,PacI,技术路线,细胞培液上清,DCM,组,转,ALDH2*1,形,DNA ladder,态,TUNEL,基,ALDH2,因,ADH-1,蛋,Bcl-2,家族,白,caspase,移植心脏组织,SD,鼠心肌细胞,活,ALDH2,性,ROS,对照组,对照组,乙醛干预,转,ALDH2*2,未转,未干预,通,MAPK,路,RAS,总结陈词,乙醛-,氧化损伤,ROS,心肌凋亡-功能障碍,MAPK,信号通路,扩张型心肌病,?,ALDH2,?,谢谢,