液相串联质谱

,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,#,Click to edit Master title style,三重四极杆液质联用仪基础知识,液相部分的结构特点,1,质谱的基础知识,2,如何提高检测器的灵敏度,3,1.,液相部分的结构特点,LC-20A,液相色谱,泵,脱气机,进样器,色谱,柱,洗脱液,检测器,废液,信号,数据,系统,液相色谱连接管路,材料,不锈钢、,Teflon,、,PEEK(,聚醚醚酮),尺寸,不锈钢管尺寸,PEEK,管尺寸,0.1 mm I.D.,1.6 mm O.D.,0.13,mm I.D.,1.6 mm O.D.,0.3 mm I.D.,1.6 mm O.D.,0.25,mm I.D.,1.6 mm O.D.,0.5 mm I.D.,1.6 mm O.D.,0.8 mm I.D.,1.6 mm O.D.,液相色谱连接管路,不锈钢,(可用于所有连接),能承受几百,MPa,压力,酸性或高浓度盐环境中易腐蚀(尤其在,pH,小于,2时),PEEK,(,可用于所有连接),能承受高达,25MPa,压力,可在整个,p,H范围,(pH 1-14),内使用,不适用于高溶解性溶剂如氯仿、丙酮、,THF,等,Teflon,(,用于柱后阻尼管、反应管和排液管),化学惰性大,能承受,0.5MPa,压力,LC-20AD,的,概要,单向阀,泵头,排液阀,LC-20AD,单向阀,马达和凸轮,柱塞杆,柱塞杆密封圈,泵头,柱塞往复泵,单向阀工作原理,单向阀结构,抛光面,球座,宝石球,吸液冲程,排液冲程,出口单向阀,进口单向阀,泵头,色谱柱,较小的流量可获得较高的离子化效率，所以在条件允许的情况下最好采用内径较小的色谱柱,不同色谱柱保证良好分离的流量,0.3 mm i.d.10,L/min,1.0 mm i.d.30-60,L/min,2.0 mm i.d.200-500,L/min,4.6 mm i.d.,700,L/min,色谱柱,2.,质谱基础知识,质,谱是什么？,特殊的天平：称量离子的质量。,质,质谱能做什么？,定性：化合物的分子量和结构,定量：混合物中目标组分的含量,领域：化学、生物学、医学、药学、环境、物理、材料、能源等,分子离子,分子离子是样品分子失去或得到一个电子而形成的。分子离子代表完整的样品分子，是其所有碎片离子的终极前体。由分子离子的,m/z,值可得到该化合物的相对分子量。分子离子如为阳离子则以,M,表示，,“,+,”,代表该离子具有一个正电荷，,“,”,代表游离基，故此离子为游离基阳离子。如为阴离子则以,M,表示，为游离基阴离子。,M,及,M,均含未成对电子，又称奇电子（,odd electron,）离子。分子离子提供了最有价值的质谱信息，包括相对分子量、元素组成与碎片离子相关的结构信息。,准分子离子,取决于化合物的性质和质谱离子化方法及条件，可生成质子化或去质子的分子，即,M+H,+,、,M-H,及加合物离子，如,M+Na,+,、,M+Cl,等，这些均为偶电子（,even electron,）离子。,目前国际上有将两种离子统称分子离子的趋势。,经常观测到的加合离子,(,M+H),+,(,M+NH,4,),+,(,M+Na),+,(,M+K),+,(,M+H+CH,3,CN),+,(,M+H+H,2,O),+,+1,+18,+23,(,M+Na+H,2,O),+,(,M+Na+CH,3,CN),+,+39,+19,+41,+42,+64,正离子模式,负离子模式,(,M-H),-,(,M+,35,Cl),-,(,M+,37,Cl),-,(,M+HCOO),-,(,M+CH3COO),-,(,M+CF3COO),-,-1,+35,+45,+59,+113,+37,(,M-H),-,(,M+,35,Cl),-,(,M+,37,Cl),-,(,M+HCOO),-,(,M+CH,3,COO),-,(,M+CF,3,COO),-,-1,+35,+45,+59,+113,+37,分子离子,准分子离子,Cyclohexane,C,6,H,12,Exact Mass:84.0939,Nominal Mass:84,EI,质谱图,m/z,Diketometribuzin,C,7,H,12,N,4,O,2,Exact Mass:184.0960,Nominal Mass:184,质谱常用概念同位素,同位素,具有相同质子数，不同中子数（或不同质量数）同一元素的不同核素互为同位素。,单同位素峰,单同位素质量：最轻的稳定同位素的质量（也有说自然界中丰度最大的同位素的质量）。,单同位素峰：质谱图上单同位素质量所对应的峰。,同位素峰,质谱图中的一个峰，其元素组成中含有一个或多个非最高天然丰度的同位素。,化学上：氯的原子量是,35.5,。,质谱上：对于含有一个氯原子的离子，在,A,和,A+2,处各出一个峰，且相对强度为,3:1,。这是因为,Cl,35,:Cl,37,3:1,，质谱测定的是微观离子，不是宏观上的平均的概念,。,元素,A,A+1,A+2,元素类型,质量,%,质量,%,质量,%,H,1,100,2,0.015,A,C,12,100,13,1.1,A+1,N,14,100,15,0.37,A+1,O,16,100,17,0.04,18,0.20,A+2,F,19,100,A,Si,28,100,29,5.10,30,3.40,A+1,A+2,P,31,100,A,S,32,100,33,0.80,34,4.40,A+2,Cl,35,100,37,32.5,A+2,Br,79,100,81,98.0,A+2,I,127,100,A,元素,分类情况：,A:H,F,P,I,A+1:C,N,A+2:O,S,Si,Cl,Br,质谱常用概念同位素,质谱常用概念同位素,例,1,：,79,Br 100%,81,Br 98%100%,M M+2 M+4 M+6,Br,n=1:1 1,Br,2,n=2:1 2 1,Br,3,n=3:1 3 3 1,例,2,：,35,Cl 100%,37,Cl 32.5%,M M+2 M+4 M+6,Cl,n=1:1 0.325,Cl,2,n=2:1 0.650 0.106,Cl,3,n=3:1 0.975 0.317 0.034,质谱常用概念同位素,p-Chlorophenol,C,6,H,5,ClO,Exact Mass:128.0029,Nominal Mass:128,m/z,2,6-Dichlorophenol,C,6,H,4,Cl,2,O,Exact Mass:161.9639,Nominal Mass:162,m/z,单同位素质量、名义（整数）质量、平均质量、准确质量,质谱图,(Mass Spectrum),质谱仪产生的信息是离子的质量及其强度，这些数据可以列成表。最常用的是以质荷比,(m/z),为横座标，强度为纵座标制成的质谱图。,50,100,150,200,250,300,350,400,450,m/z,0,e3,50,e3,100,e3,150,e3,200,e3,250,e3,300,e3,350,e3,Int.,185,197,207,227,391,105,295,167,257,142,268,317,425,280,369,128,155,243,404,341,497,66,82,469,453,57,482,正离子模式,三重四极杆质谱议,最常用的,MS/MS,实验中，第一级质量分析器用于选择一个前体离子（,precursor ion），,或称为母离子（,parent ion）,然后，用适当的活化方法，常用碰撞诱导解离（,collision-induced dissociation,CID）,使这一离子裂解生成产物离子（,product ions）,或称为子离子（,daughter ions）,及中性碎片：,m,p,+,m,f,+,+m,n,式中，,m,p,+,为前体离子，,m,f,+,为产物离子，,m,n,为中性碎片。,SIM,：,Selected Ion Monitoring,选择性离子监测模式,Scan,：扫描模式,MRM:Multiple Reaction Monitoring,多反应监测,子离子扫描,(Product Ion Scan),母离子扫描,(Precursor Ion Scan),中性丢失扫描,(Neutral Loss Scan),3.,如何提高检测的灵敏度,如何提高检测灵敏度（,1,）,质谱,雾化气流速,干燥气流速,脱溶剂管温度,加热模块温度,离子源电压,喷雾针的位置,影响离子化效果的因素,除喷雾针的位置外，其他参数均可以通过软件反控，因此可以使用批处理的方法进行优化。,如何提高检测灵敏度（,2,）,液相,色谱柱,样品浓度,流动相（种类和比例）与流速,液相分离情况,溶剂、样品纯度、系统的清洁度,pH,（甲酸,正离子模式，乙酸铵,负离子模式）,4.,维护,吸滤头,分玻璃材质、不锈钢材质,去除流动相中不溶性颗粒,，防止异物进入,LC,系统，三个月更换一次,取下过滤头用,25%,的硝酸溶液超声清洗,15,分钟,取出后蒸馏水超声清洗,10,分钟,用吸球吹出过滤头中的液体,再用蒸馏水超声清洗,10,分钟,用吸球吹净过滤头中的液体,将过滤头重新插入溶剂瓶中,谢谢！,