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,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,碱性磷酸酶染色（,NAP,）,目的,掌握卡氏偶氮偶联法测定中性粒细胞碱性磷酸酶染色的原理、方法、注意事项和临床意义。,原理,中性粒细胞胞质中的碱性磷酸酶在,pH9.6,的碱性条件下能水解磷酸萘酚，生成萘酚，后者与重氮盐偶联形成不溶性的有色沉淀定位于胞质中的酶活性处。重氮盐有多种，常用的有坚牢蓝,RR,、坚牢蓝,BB,、坚牢紫酱等。,新鲜干燥的涂片用冷,10%,甲醛甲醇固定液固定,30s,，流水轻轻冲洗,30,60s,，待干。,把涂片浸入基质孵育液中，在室温,(,冬季放水浴箱,),下温育,10,15min,。,流水冲洗,1,2min,，加苏木素染色液中复染,5,8min,，流水冲洗，待干，镜检。,结果判断胞质中出现紫黑色或棕红色颗粒为阳性。判断标准如下：,0,分：胞质中无阳性染色颗粒。,1,分：胞质中含少量颗粒或呈弥漫浅色。,2,分：胞质中含中等量的颗粒或呈弥漫着色。,3,分：胞质中含较多颗粒或弥漫较深色。,4,分：胞质中充满粗大颗粒或弥漫深色。,5,计算阳性率和积分值。,方法步骤,磷酸萘酚盐和重氮试剂品种繁多，应根据基质选择相适应的重氮盐，坚牢蓝等重氮盐的质量好坏是本法成败的关键。,基质孵育液必须临用前新鲜配制，先应将血膜固定干燥后，才开始配制基质液。,若无,2-,氨基,-2-,甲基,-1,3-,丙二醇，可用巴比妥缓冲液,(pH9.2),或,0.2mol/L,Tris,缓冲液,(pH9.2),代替。,注意事项,临床上主要用于鉴别：,1.,慢性粒细胞白血病与类白血病反应：,慢性粒细胞白血病,(,无继发性感染者,),时，,NAP,积分一般明显下降，积分常,13,分，甚至为零分；类白血病反应时则显著增高，积分常,200,分。,2.,阵发性睡眠性血红蛋白尿症与再生障碍性贫血：,阵发性睡眠性血红蛋白尿症常降低；再生障碍性贫血常增高，病情好转时，,NAP,积分则可逐渐下降。,3.,急性白血病的细胞类型：,ALL,增高，,AML,下降。,临床意义,铁染色（,Iron stain,）,目的,掌握骨髓铁染色的原理、方法、注意事项及临床意义。,原理,骨髓小粒中的含铁血黄素称细胞外铁，其所含的三价铁经稀盐酸处理后而游离，并能与酸性亚铁氰化钾溶液发生普鲁士蓝反应，生成蓝色亚铁氰化铁沉淀，定位于含铁的部位。细胞内铁也可用此法显示，根据反应的强弱可了解骨髓中铁的含量。,干燥涂片用甲醇固定,10min,，待干。,玻片上滴满酸性亚铁氰化钾，,37,染色,30min,。,用蒸馏水冲洗后用核固红染液复染,10,15min,。,流水冲洗，待干，镜检。,结果判断,(1),幼红细胞核呈鲜红色，胞质呈淡黄红色，铁粒呈蓝绿色。,(2),细胞外铁 用低倍镜观察涂片，特别是涂片尾部和髓粒附近，注 意翠蓝色颗粒的存在，可分五级标准。,(3),细胞内铁 用油镜计数,100,个中、晚幼红细胞，记录胞质中含有蓝色铁颗粒的细胞,(,铁粒幼细胞,),的百分率。根据细胞内铁颗粒的数目、大小、染色深浅和颗粒分布的情况，将铁粒幼细胞分为四型。,方法步骤,细胞外铁的划分标准,:,(-),：无颗粒。,(+),：有少数铁颗粒或偶见铁小珠,(,颗粒体积大于嗜酸性粒细胞的颗粒者 称为铁小珠,),。,(+),：有较多的铁颗粒或小珠。,(+),：有很多的铁颗粒、小珠和少数小块状。,(+),：有极多铁颗粒、小珠，并有很多的小块，密集成堆。,铁粒幼细胞划分：,型：幼红细胞内含,1,2,个小铁颗粒。,型：幼红细胞内含,3,5,个小铁颗粒。,型：幼红细胞内含,6,10,个小铁颗粒，或,1-4,个大铁颗粒。,型：幼红细胞内含,10,个以上小铁颗粒，或,5,个以上大铁颗粒。,环形铁粒幼细胞：,是指幼红细胞含铁粒,6,个，绕核,2/3,以上者。,玻片需经去铁处理 将新玻片用清洁液浸泡,24h,，取出后反复水洗浸入,95%,酒精中,24h,，晾干，再浸泡在,5%,盐酸中,24h,，用双蒸水反复浸洗玻片，取出烤干后备用。,骨髓取材要满意，外铁一定要有骨髓碎块或颗粒，取材不佳时，往往影响结果。,酸性亚铁氰化钾溶液须新鲜配制。,注意事项,鉴别缺铁性贫血和非缺铁性贫血：,IDA,时骨髓细胞外铁显著减少或消失，铁粒幼红细胞明显减少，所见铁粒细小色浅，且以,型为主，,型极少见，,型以上不见。经铁剂治疗后细胞外铁及内铁可迅速增多，此检查是诊断,IDA,及指导铁剂治疗的一种辅助方法；非,IDA,，如,HA,、,MA,、,AA,等病人的细胞外铁通常增高，内铁亦增高，以,型、,型为主，可以见到,型，罕见,型。因此，有助于鉴别,IDA,与非,IDA,。,用于诊断铁粒幼细胞性贫血：能找到数量不等的环形铁粒幼细胞，多见粗颗粒的,型与,型铁粒幼细胞。,用于诊断伴环形铁粒幼细胞增多的,MDS,：骨髓中环形铁粒幼细胞,15%,。,临床意义,
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