革兰氏染色及细菌特殊结构观察

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,一、实验目的,学习细菌的革兰氏染色原理和方法,了解细菌的特殊形态结构：芽孢、荚膜、鞭毛,二、实验原理,单染色法：,只能观察微生物的大小、形状、和细胞排列状况，但不能鉴别微生物以及它的特殊构造等。,复染色法：,用两种或两种以上染色液进行染色，有协助鉴别微生物的作用，故也称鉴别染色法。常用的有：,革兰氏染色法,、抗酸染色法、芽孢染色法、鞭毛染色法等。,革兰氏染色,丹麦,C.Gram,创立，用于细菌分类学研究,细菌细胞壁的结构,G,肽聚糖层较薄，交联度低，含较多脂质，故用乙醇等有机溶剂脱色时融解了类脂质，增加了细胞的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，经沙黄复染呈红色。,G,细胞壁结构致密，用脱色剂处理后，肽聚糖层孔径缩小，通透性降低，故细菌仍保留初染时的紫色。,细菌的特殊形态结构,芽孢：休眠体，不利环境下产生，耐受各种极端环境。,荚膜：多糖，包裹在菌体外围，保护菌体,鞭毛：运动，菌落形态。,三、实验材料,大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌（,24h,培养物）,革兰氏染色液一套,四、实验步骤,革兰氏染色,枯草杆菌的芽孢观察,观看鞭毛、荚膜的示范片,绘图、写实验报告,革兰氏（,Gram,）染色法,1.,涂片,2.,初染：,在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液，染,1,分钟，倾去染液，流水冲洗至无紫色。,3.,媒染：,先用新配的路哥氏碘液冲去残水，而后用其覆盖涂面,1,分钟，后水洗。,4.,脱色：,除去残水后，滴加,95%,酒精进行脱色约,15,20,秒，后立即用流水冲洗。,5.,复染：,滴加番红染色液，染,3,5,分钟，水洗后用吸水纸吸干。,6.,镜检：,观察染色结果并绘图。,枯草杆菌芽孢的观察,细菌鞭毛的观察,细菌荚膜的观察,荚膜,五、实验结果,记录所观察到的三种菌革兰氏染色结果的差别,记录枯草杆菌,Gram,染色结果，并判断是阳性还是阴性,六、问题与讨论,要得到正确的革兰氏染色结果必须注意哪些操作？哪一步是关键？为什么,?,