细胞生物学实验报告鸡红细胞的融合

,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,鸡红细胞的融合,实验报告,实验原理,主要内容,实验目的,实验用品,需要注意的问题,1,2,3,4,实验步骤,5,6,7,数据记录及处理,结果分析及讨论,绘图,一、实验目的,（,1,）了解,PEG,诱导细胞融合的基本原理,（,2,）通过细胞融合实验，初步掌握细胞融合技术,二、实验用品,（,1,）器材：生物显微镜、离心机、恒温水浴箱、滴管、离心管、试管架、盖玻片、载玻片、烧杯、吸水纸,（,2,）试剂：,0.85%,生理盐水、,50%PEG,、,GKN,溶液、,Alsever,溶液,（,3,）实验材料：鸡红细胞,三、实验原理,同种或异种细胞在一定介质（如病毒、化学因子或电场）的诱导下，可发生细胞间的的融合，形成较大的双核或多核细胞。聚乙二醇（,PEG),可与水分子借氢键结合，在高浓度（,50%,）的,PEG,的溶液中，自由水消失，导致细胞脱水而发生质膜结构的变化，引起细胞融合，,PEG,融合技术的关键是要选择合适的相对分子质量（,10006000,）、浓度（,30%50%,）以及作用时间。,click,四、实验步骤,（,1,）鸡血与,Alsever,溶液按,1:4,混匀，,4,冰箱中保存,（,2,）取,1ml,细胞悬液，加,Alsever,溶液稀释,2025,倍,（,3,）取上稀释悬液,1ml,，加,5ml0.85%,生理盐水混匀,（,4,）,1000rpm,离心上述溶液,5min,，去上清液，重复操作,3,次,（,5,）第三次离心去上清液后，加,GKN 0.5ml,制成,10%,悬液，放在,37,水浴箱预热,23min,（,6,）逐滴,0.25ml,的,50%,的,PEG,溶液，边加边摇匀，,37,恒温静置,15min,（,7,）取上述液一滴，盖上盖玻片，镜检,五、数据记录及处理,观察四个视野中的细胞，记录鸡血细胞融合情况如下表所示,视野细胞核总数,视野内融合细胞核数,2,核细胞,3,核细胞,所有细胞核总数,所有融合细胞核总数,1,30,4,2,0,105,12,2,26,3,0,1,3,28,2,1,0,4,31,3,0,1,2、数据处理：由上表原始数据得视野内发生融合的细胞核数为,12,个，视野内所有细胞核总数为,105,个，由公式：,融合率,=,视野内发生融合的细胞核数,/,视野内所有细胞核数,1,00%,=12/105,1,00%,=11.4%,3、实验结果：鸡红细胞的融合率为,11.4%,七、结果分析及讨论,八、绘图,