药物定量分析与方法验证

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第四章 药物定量分析与分析方法验证,第二节,分析样品的前处理方法,第一节,定量分析方法,第三节,药品分析方法验证,练习与思考,基本要求,一、掌握定量分析方法及验证的效能指标。,二、熟悉定量分析方法的特点,三、熟悉样品的前处理方法。,四、了解定量分析样品的前处理方法的进展,及在药物分析中的应用。,重量分析法,容量分析法,光谱分析法,色谱分析法,第一节,定量分析方法,一、重量分析法,生成的沉淀而进行分析的方法,生成沉淀,滤过,洗涤,灼烧,恒重。,特点：,1,、操作繁琐,2,、结果准确,很少用,（一）容量分析法的,特点,操作简单、快速；,比较准确（相对误差,0.2%）；,仪器普通易得,常用于测定高含量或中含量组分，原料药含量测定首选,二、容量分析法,（二）容量分析法的,计算,问题,1.,滴定度,（,T,）：,每1,ml,规定浓度的滴定液相当于被测物质的质量(,mg),2.,滴定度的计算,aA,（待测物）,+,bB,（滴定液）,cC,+,dD,a b,T/M,1,m,T,=,m,a/b,M,m,：滴定液浓度,(mol/L),M,：被测物分子量,W,A,=,T,V,B,3.,百分含量的计算,（1）直接滴定法,W：,供试品取样量,设至终点时，消耗滴定液体积为,V ml,则药物实测质量为,VT,浓度校正因数,（2）间接滴定法,1,）生成物滴定法（略）,药物,+A,B,滴定,2,）剩余滴定法（回滴法）,药物,+A,（定、过量）,剩余的,A+B ,（回滴）,V,空白试验,V,0,滴定剂,（,3,）以相当于标示量,%,表示,光谱,光谱分析法,分光光度法,分类,紫外,-,可见分光光度法,红外分光光度法,原子吸收分光光度法,荧光分光光度法,三、光谱分析法,三、光谱分析法,（一）紫外-可见分光光度法,吸收光谱范围：紫外：,200,400nm,可见：,400,760nm,灵敏度高，可达10,-4,g/ml,10,-7,g/ml,1.特点 准确度高，,RE（%）,为2%,5%,仪器价格低廉，操作简单，易普及，应用广泛,2.朗伯-比耳定律,A=ECL,吸收系数：摩尔吸收系数,研究分子结构,百分吸收系数,含量测定,3.,测定方法,要求供试品溶液的,A,应在0.3,0.7,1,）对照品比较法：,A,供,A,对,C,供,C,对,制剂：,原料药：,A,X,A,R,W,X,W,R,2,）吸收系数法：,注意：应,100,应注意仪器的校正和检定：作为计算浓度的因数进行定量的方法，不是任何情况下都适用的，特别是单色光不纯的情况下，,A,会随仪器不同而变化，误差较大。,但若认定一台仪器，固定其工作状态和测定条件，则,C,和,A,间的关系在多数情况下仍符合,Lambert,Beer,定律。,3,）计算分光光度法：,多种，具体按每种药物规定的方法进行 如：,V,A,的三点校正法,4,）比色法,加入显色剂后，按照对照品比较法测定,影响显色因素很多，故需注意平行操作,空白溶剂：溶剂,+,显色剂，同法处理,（二）荧光分析法,灵敏度高,，可达10,-10,g/ml,10,-12,g/ml,在,低浓度,进行测定，防止自熄灭作用,1.,特点,用,基准溶液,校正,仪器灵敏度,制备荧光,衍生物,，可提高灵敏度和选择性,干扰因素多,，,需做,空白实验,样品用,量少,，操作,简单,，应用,范围,较,广,2.,含量测定,原理：当激发光强度、波长、所用溶剂及温度等条件固定时，物质在一定浓度范围内，其荧光强度,R,与,该物质浓度,C,成正比,方法：对照品比较法,计算：,根据混合物中各组分的,色谱行为差异,，先行分离后再在线或离线对各组分逐一进行分析的方法，,是分离分析混合物的最有力手段,。,按分离原理：吸附；分配；离子交换；排阻色谱,分类,按分离方法：,PC；TLC；,柱色谱；,GC；HPLC,特点：高灵敏度、高效能、高速度、应用广泛,四、色谱分析法,1.对仪器一般要求,固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意改变,其他均可适当改变,色谱图,20分钟,内记录完毕,2.系统适用性试验,色谱柱的,理论板数,：,n,=5.54(,t,R,/,W,h/2,),2,分离度,：,R,=2（,t,R1,t,R2,)/(,W,1,+,W,2,);,应大于1.5,重复性：,对照液连续进样,5,次，峰面积,RSD,2.0,拖尾因子,：,T,=,W,0.05h,/2,d,1,应在0.9,1.05,（一）,HPLC,法,流动相,真空脱气机,四元泵,自动进样器,紫外检测器,荧光检测器,蒸发光散射检测器,液质联用仪,质谱检测器,流动相：对于以,C,18,为固定相的,反相色谱系统,，,常用甲醇,-,水,，间或加以乙腈、缓冲液等为流动相，有机溶剂比例通常不低于,5,四元泵,自动进样器,色谱柱,填充剂常用：十八烷基硅烷键合硅胶,检测器,测定方法,1),内标法加校正因子测定供试品中主成分含量,对照液（,R）：A,R,C,R,峰面积 含量,内标液（,S）：A,S,C,S,供试液（,X）：A,X,C,X,f=,A,S,/C,S,A,R,/C,R,f=,A,S,/C,S,A,x,/C,x,C,x,=f,A,x,A,S,/C,S,例,2),外标法测定供试品中主成分含量,对照液（,R）：A,R,C,R,供试液（,X）：A,X,C,X,C,X,C,R,A,X,A,R,C,X,C,R,A,X,A,R,要求：进样量准确、操作条件稳定,（二）,GC,法,1.对,GC,仪器一般要求,载 气：,氮气,色谱柱：,填充柱或毛细管柱,填充柱：内径,2,4mm,，长,1,10m,，内装吸附剂,高分子多孔小球或涂渍固定液的载体,毛细管柱,：内径,0.2,0.5mm,，长,10,100m,，,一般为空心柱，内壁或载体经涂渍或,交联固定液,检测器：,氢火焰离子化检测器,色谱图：,30,分钟内记录完毕,2.色谱适用性实验：同,HPLC,3.,测定法：同,HPLC,