抗精子抗体检测课件

Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,抗精子,抗体,的检验诊断,攀枝花中西医结合医院检验科：周丽,在男性,：,抗,精子抗体,（,antispermatozoa antibody,AsAb,）,属于自身抗体，它通过影响精液的质量而降低生育能力。,在,女性,：,抗,精子抗体属于同种异体抗体，是女性免疫性不孕的重要原因。,（一）、男性抗精子抗体的产生,男性产生的主要机制是,血睾屏障,因疾病或创伤受损，使隐蔽的精子或其可溶性膜抗原溢出，刺激机体免疫系统产生抗精子自身抗体,。,抗,精子抗体的产生可以抑制精子的活动和受精，造成男性不育。,（二）、女性抗精子抗体的产生,精子抗原对女性属同种异体，正常情况下并不产生精子抗原产生精子的免疫反应。,原因：,1,、精子膜不表达经典,MHC-I,类抗原,2,、阴道上皮是复层鳞状上皮,3,、精浆中存在抑制精子抗原表达的免疫抑制物质,4,、性交后，进入输卵管精子数目少,5,、独特型抗体和抗独特型抗体网络，控制着体内免疫反应,6,、酶系统，能降解精子抗原,（二）、女性抗精子抗体的产生原因,1,、,独特型抗体和抗独特型抗体,网络功能紊乱,2,、酶系统缺陷,3,、对精子过敏与感染有关,4,、生殖道病毒和细菌感染,5,、生殖道创伤及炎症至生理屏障破坏,致使进入的精子抗原得以保持完整，而作为同种异体抗原刺激女性免疫系统产生抗精子抗体影响生育。,（三）、抗精子抗体分类,1,、根据抗体存在的部位：循环抗体，局部抗体,2,、根据球蛋白类型：,IgG,、,IgM,、,IgA,3,、根据作用部位：头部、顶体、体部、尾部,4,、根据抗原性质：不同的精子抗原成分产生相应的 不同抗体，主要有一下几种：,（,1,）精子特异抗原：,7,种抗原：,3,种特异性，,4,种精浆交叉抗原,（,2,）精子膜抗原来自精囊液,（,3,）精子酶：,LDHx,透明质酸酶,（,4,）组织交叉抗原：精子表面有脑、肾上腺、甲状腺等组织 的交叉抗原,（,5,）血型抗原：,A,、,B,血型抗原,（,6,）组织相容性抗原,HLA-A,、,HLA-OR-H-Y,抗原,（,7,）细菌交叉抗原,（四）、抗体导致不孕的机制,影响精子运动,抑制精子活动,AsAb,的,Fc,段与宫颈粘蛋白结合,补体参与使精子死亡,抗体调理作用促进精子被吞噬,补体参与,受精卵,死亡,（五）,、,抗精子抗体,的,检验方法,抗精子抗体按对精子的作用分为凝集性、制动性、和结合型三类。据这些特点设计了多种方法，目前常用的方法有,：,试管,玻片凝集试验测定抗精子抗体：,2,.,精子,制动试验测定抗精子抗体：,3.ELISA,法测抗体：,4,.,间接,免疫荧光法测定抗精子抗体,：,5.,免疫,珠试验测定抗精子抗体：,1.,试管玻片凝集,试验,（,TSAT,）,测定抗精子抗体：,原理：精子悬液与待测血清在缓冲盐水中反应，待测血清中的,AsAb,与精子表面抗原结合，使精子出现头对头，尾对尾或头对尾的凝集现象。,结果：,10%,凝集为阳性。,评价,：此法最易检测头对头精子凝集，主要用于分析女性血清，方法简便，但可受多种因素干扰，如微生物、组织碎片、血中雄激素升高，均可发生非特异性凝集。,每次试验应设对照组。,2.,精子制动试验测定抗精子抗体：,原理：在补体存在的条件下，精子制动抗体与精子表面抗原反应，使补体,活化,，,导致精子失去活动能力,。,结果,：若为制动抗体，使精子失去活力，制动值,2,为阳性。,评价：此,法仅能检测作用于精子尾干的抗体，特异性强，敏感性差，假阴性率较高。,精子制动试验,阳性者的妊娠率明显低于低于精子凝集试验阳性者。,3.ELISA,法测抗体：,原理：以特异性精子可溶性抗原包被反应板微孔，待测血清中如存在,AsAb,，则可与之结合，再加入酶标抗人,IgG,抗体和酶底物,/,色原溶液，出现呈色反应。呈色强度可反应,AsAb,的水平,。,结果：显色深浅与抗精子抗体的量成正比。,评价：结果客观准确。由于完整精子包被易致非特异性吸附，因此若以可溶性精子膜抗原包被，则本法敏感、特异、客观、定量能确定抗体类型，且易操作。,生物素,-,亲合素酶联免疫吸附法（,BA-ELISA,）,（,BA-ELISA,）是在常规,ELISA,基础上发展起来的新一代,定量检测法，其敏感法性、特异性超过常规法。但很难购到交理想的试剂盒，通常试剂盒难尽人意思，结果不太稳定，假阳性太多。,4.,间接免疫荧光法测定抗精子抗体：,原理：将正常人精子充分洗涤后，包被于载玻片上，依次加待测血清河异硫氰酸荧光素标记得抗人,IgG,、,IgA,、,IgM,多价或单价抗体，反应后洗涤，置荧光显微镜下观察。,评价：试验中需要甲醇固定，致使精子膜损伤，内部抗原外露，而内部抗原的抗体在常人中普遍存在，故假阳性多，无临床实用价值。,改进：作液相培养，试验过程中无需固定，又重新确定了本法的使用价值。此法灵敏度高，可作抗原定位，但重复性差。,5.,免疫珠试验测定抗精子抗体,：,免疫,珠试验是,WHO,推荐用于检测精子表面,IgG,、,IgA,、,IgM,类抗精子抗体的,一种方法,。,利用,兔,抗人免疫球蛋白,抗体（,抗,人,IgG,、抗人,IgA,、抗人,IgM,）,包被的,聚丙烯酰胺微珠,能结合于结合了精子表面的精子抗体,，,在显微镜下可看到免疫珠随精子运行。,结果：若结合一个或多个免疫珠的精子比例,10%,，为阳性。,评价：此法可确定抗体的部位、类型及结合精子的比例，能测出活精子表面结合的抗体。敏感性、特异性及重复性较好，操作稍繁琐，检测所需样本少，可用于宫颈粘液、输卵管液等微量样本检测。,蛋白质印迹法,提取精子抗原进行聚丙烯,酰氨凝胶电泳,SDS-PAGE,，然后将膜抗原转移到醋酸纤维膜上进行电转移，在电场作用下，蛋白子进入,醋酸纤维,膜而固化，随后与待检标本（一抗）温育，再与结合有辣根过氧化酶的兔抗人,IgG,（二抗）温育洗涤后，加入酶底物显色处理，其醋酸纤维膜经扫描分析，即可检测抗精子抗体量。,评价：可检测微量或极微量低效价的抗精子抗体，尤其适合体外受精系统检测抗精子抗体量，并可分析抗精子抗体在受精卵结合中的生物学活性，有助于从分子水平研究免疫性不孕不育的机制。,不育症患者血清中抗精子抗体检出率为,20%-30,%,，而梗阻性无精症病人中，检出率可达,60%,。,不育症患者血清中抗精子,抗体通常以,IgG,、,IgM,为主，而精浆中以,IgG,、,IgA,出现较多。,鉴于抗精子抗体的异质性以及很多抗精子抗体针对的靶抗原与生育并不相关，因此，对抗精子抗体阳性结果必须结合临床加以考虑。,内容总结,抗精子抗体的检验诊断。抗精子抗体（antispermatozoa antibody,AsAb）属于自身抗体，它通过影响精液的质量而降低生育能力。抗精子抗体属于同种异体抗体，是女性免疫性不孕的重要原因。抗精子抗体的产生可以抑制精子的活动和受精，造成男性不育。5、独特型抗体和抗独特型抗体网络，控制着体内免疫反应。1、独特型抗体和抗独特型抗体网络功能紊乱。致使进入的精子抗原得以保持完整，而作为同种异体抗原刺激女性免疫系统产生抗精子抗体影响生育。1、根据抗体存在的部位：循环抗体，局部抗体。抗精子抗体按对精子的作用分为凝集性、制动性、和结合型三类。2.精子制动试验测定抗精子抗体：。2.精子制动试验测定抗精子抗体：。精子制动试验阳性者的妊娠率明显低于低于精子凝集试验阳性者。免疫珠试验是WHO推荐用于检测精子表面IgG、IgA、IgM类抗精子抗体的一种方法。蛋白质印迹法,