梅毒实验室检测解析培训课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,梅毒实验室检测解析,*,*,病原体,为梅毒螺旋体，属于密螺旋体属，苍白密螺旋体苍白亚种,(Treponema pallidum subspecies pallidum),苍白亚种 梅毒,苍白螺旋体 地方亚种 地方性梅毒,极细亚种 雅司病,密螺旋体属,品他螺旋体 品他病,1,梅毒实验室检测解析,10/11/2024,病原体为梅毒螺旋体，属于密螺旋体属，苍白密螺旋体苍白亚种(T,梅毒螺旋体的生物学特性,1,、直径,0.100.15m,，有,814,个致密而规则的,小螺旋，两端尖直。,2,、原生质圆柱体上紧绕着,34,根周浆鞭毛，故运,动活跃，运动方式多样。,3,、,G-,，但不易着色。,Fantana,镀银染色呈棕褐色。,4,、在无活细胞的人工培养基中难培养，生长慢。,5,、抵抗力极弱，对温度和干燥特别敏感；对青霉,素、四环素、红霉素等抗生素敏感。在干燥条件下不易生存。肥皂水和一般消毒剂以及加温,42,以上均极易将其杀灭。,2,梅毒实验室检测解析,10/11/2024,梅毒螺旋体的生物学特性1、直径 0.100.15m，有8,梅毒螺旋体,3,梅毒实验室检测解析,10/11/2024,梅毒螺旋体3梅毒实验室检测解析10/3/2022,传播途径,性接触是主要的传染途径,未经治疗的患者在感染后的,1,年内最具有传染性,随着病期的延长，传染性越来越小,到感染后,2,年，通过性接触一般无传染性,母婴传播,在妊娠,7,周时，梅毒螺旋体即可通过胎盘传染未经治疗者，虽已无性传播（病期,2,年），但妊娠时仍可传染给胎儿,病期越长，传染性越小,;,输血传染,间接传播：日常用品、接吻、哺乳、医疗器械等途径（接触部位附有梅毒螺旋体） 。,4,梅毒实验室检测解析,10/11/2024,传播途径 性接触是主要的传染途径4梅毒实验室检测解析10/3,梅毒的分期,5,梅毒实验室检测解析,10/11/2024,梅毒的分期5梅毒实验室检测解析10/3/2022,梅毒的诊断,梅毒的诊断,早期梅毒（一期、二期和早期隐性梅毒）和晚期梅毒（三期和晚期隐性梅毒）,必须依靠病史、症状及实验检查进行综合分析,梅毒的实验室检查,结果对诊断有决定性意义,6,梅毒实验室检测解析,10/11/2024,梅毒的诊断梅毒的诊断6梅毒实验室检测解析10/3/2022,常用梅毒实验室检测方法,病原学检测,血清学检测,7,梅毒实验室检测解析,10/11/2024,常用梅毒实验室检测方法病原学检测7梅毒实验室检测解析10/3,病原学检查,取材方法,一期、二期梅毒时，取硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等皮损部位组织液或淋巴结穿刺术得到的组织液,暗视野显微镜、镀银染色法和直接荧光法,在暗视野显微镜下，光线从聚光器的边缘斜射到涂片上的梅毒螺旋体而发出亮光，从而可根据其特殊形态和运动方式进行检测。,白色发光，螺旋整齐，运动规律（,旋转、伸缩或蛇行,运动）,8,梅毒实验室检测解析,10/11/2024,病原学检查取材方法8梅毒实验室检测解析10/3/2022,病原学检查的临床意义,病原学方法直接镜检到梅毒螺旋体，在临床可确诊梅毒，且具有快速、方便、易操作的特点。,螺旋体检查是诊断早期现症梅毒的最佳方法，对于患者的早期诊断、及时治疗、预后和尽早切断传染源都有十分重要的意义。,如未见到梅毒螺旋体，并不能排除患梅毒的可能性。,9,梅毒实验室检测解析,10/11/2024,病原学检查的临床意义病原学方法直接镜检到梅毒螺旋体，在临床可,梅毒血清学检测方法,10,梅毒实验室检测解析,10/11/2024,梅毒血清学检测方法10梅毒实验室检测解析10/3/2022,梅毒血清学检测分类,非梅毒螺旋体抗原血清学试验,（非特异性梅毒抗体）,梅毒螺旋体抗原血清学试验,（特异性梅毒抗体）,11,梅毒实验室检测解析,10/11/2024,梅毒血清学检测分类非梅毒螺旋体抗原血清学试验11梅毒实验室检,非梅毒螺旋体抗原血清学试验,原理,（抗心磷脂抗体）：,人体感染了梅毒螺旋体后，组织受到破坏，释放出来的一种类脂成分，与梅毒螺旋体结合形成完全抗原，刺激机体产生类脂质抗体（反应素）。,主要是,IgM,和,IgG,混合抗体。,抗体产生时间,感染,3,周,-4,周，硬下疳出现,1,周,-2,周,一般在感染后,5,7,周（或硬下疳出现后,2,3,周）产生。,抗体作用,无保护作用，治疗监测。未经治疗的病人，其血清内的反应素可长期存在。经正规治疗后，反应素可以逐渐减少至转为阴性。,12,梅毒实验室检测解析,10/11/2024,非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理（抗心磷脂抗体）：12梅毒实验,原理和方法,反应原理,抗原抗体结合形成复合物，凝集成网状沉淀颗粒被肉眼所见,抗原基本成分,心磷脂、卵磷脂和胆固醇,方法包括：,快速血浆反应素环状卡片试验,(RPR),不加热血清反应素,(USR),甲苯胺红不加热血清试验（,TRUST,）,性病研究实验室试验,(VDRL),等。,13,梅毒实验室检测解析,10/11/2024,原理和方法反应原理13梅毒实验室检测解析10/3/2022,四种非特异性试验方法比较,VDRL,USR,RPR,TRUST,抗原成分,心磷脂、卵磷脂、 胆固醇,同前,+EDTA+,氯化胆碱,同前,+EDTA+,氯化胆碱,+,活性炭,同前,+EDTA+,氯化胆碱,+,甲苯胺红,抗原稳定性,不稳定,1,天,稳定,4,8 ,保存,12,个月,稳定,4,8 ,保存,12,个月,稳定,4,8 ,保存,12,个月,血清试验前处理,需灭活,不需灭活,不需灭活,不需灭活,反应板及结果判断,玻片，肉眼或显微镜,玻片，肉眼或显微镜,纸卡片，肉眼,纸卡片，肉眼,注释,唯一用于检查脑脊液的试验，诊断神经梅毒,结果容易判断,结果容易判断,一期敏感性,（未经治疗）,74%-87%,77%-88%,77%-99%,77%-99%,二期敏感性,（未经治疗）,100%,100%,100%,100%,晚期敏感性,（未经治疗）,98%,99%,98%,99%,14,梅毒实验室检测解析,10/11/2024,四种非特异性试验方法比较VDRLUSRRPRTRUST抗原成,RPR/TRUST,检测流程,试验前期准备,RPR,仪,(,水平旋转仪器,),必须滴！,试剂,50l,移液器、吸头,记号笔、废物缸,工作服,一次性手套、口罩、帽子,生物安全柜,15,梅毒实验室检测解析,10/11/2024,RPR/TRUST检测流程试验前期准备15梅毒实验室检测解析,梅毒自动旋转仪,16,梅毒实验室检测解析,10/11/2024,梅毒自动旋转仪16梅毒实验室检测解析10/3/2022,测速,:100,转,/MIN,（,2,转）,17,梅毒实验室检测解析,10/11/2024,测速:100转/MIN （2转）17梅毒实验室检测解析10,检测流程（定性）,加样：,吸取,50l,血清（浆）放在卡片圈中，并均匀地涂布在整个圈内。,加抗原,：,将抗原轻轻摇匀，用试剂盒提供的针头加,1,滴抗原。,反应,：,将卡片置梅毒自动旋转仪,8,分钟立即在亮光下观察结果。,18,梅毒实验室检测解析,10/11/2024,检测流程（定性）加样：18梅毒实验室检测解析10/3/202,检测流程（定量）,稀释液准备：,在圈内加入,50l,生理盐水（根据需要确定稀释度），勿将盐水涂开。,加样,：,吸取,50l,血清,(,浆,),与各圈中盐水作系列稀释，并涂布满整个圈内。,重复定性试验后两步。,19,梅毒实验室检测解析,10/11/2024,检测流程（定量）稀释液准备：19梅毒实验室检测解析10/3/,凝集反应强度分级：,3+,4+,：圆圈内出现中到大的红色絮状物，液体清亮。,2+,：圆圈内出现小到大的红色絮状物，液体较清亮。,1+,：圆圈内出现小的红色絮状物，液体浑浊。,：圆圈内仅见红色集中于中央一点或均匀分散。,20,梅毒实验室检测解析,10/11/2024,凝集反应强度分级：3+4+：圆圈内出现中到大的红色絮状物，,RPR,定量试验,中等至大的凝块为阳性（圈,4,和,7,）有明确但很小的凝块为弱阳性（圈,2,和,3,）颗粒均匀分布（圈,1,5,8-10,）或稍粗糙（圈,6,）为阴性,21,梅毒实验室检测解析,10/11/2024,RPR定量试验中等至大的凝块为阳性（圈4和7）有明确但很小的,22,梅毒实验室检测解析,10/11/2024,22梅毒实验室检测解析10/3/2022,临床意义,早期梅毒（一期、二期）经足量规则抗梅毒治疗后,3,个月，,VDRL,试验抗体滴度下降,2,个稀释度，,6,个月下降,4,个稀释度。,一期梅毒,1,年后转为阴性,二期梅毒,2,年后转为阴性。,晚期梅毒治疗后血清滴度下降缓慢，,2,年后约,50%,病人血清反应仍为阳性,早期梅毒硬下疳出现,1,周,-2,周后，血清可呈阳性。,经治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为疗效观察、判愈、复发或再感染的指征。,23,梅毒实验室检测解析,10/11/2024,临床意义早期梅毒（一期、二期）经足量规则抗梅毒治疗后3个月，,假阳性问题,假阳性：非梅毒患者的血清反应呈阳性,技术性假阳性,由于标本的保存不当（如细胞污染或溶血）、试剂质量差或过期、或实验室操作错误所造成。,生物学假阳性,是由于患者有其他疾病或生理状态发生变化，使梅毒血清试验出现阳性,24,梅毒实验室检测解析,10/11/2024,假阳性问题假阳性：非梅毒患者的血清反应呈阳性24梅毒实验室检,急性生物学假阳性反应的疾病,风疹,水痘,传染性单核细胞增多症,传染性肝炎,上呼吸道感染,肺炎球菌性肺炎,病毒性肺炎,牛痘疹,25,梅毒实验室检测解析,10/11/2024,急性生物学假阳性反应的疾病风疹25梅毒实验室检测解析10/3,慢性生物学假阳性反应的疾病,系统性红斑狼疮,自身免疫性溶血性贫血,盘状红斑狼疮,结节性多动脉炎,类风湿性关节炎,桥本氏甲状腺炎,风湿性心脏病,干燥综合征,毒品瘾者,慢性肾炎,肝硬化,老年,麻风,(,是唯一产生慢性生物学假阳性的感染性 疾病,),26,梅毒实验室检测解析,10/11/2024,慢性生物学假阳性反应的疾病系统性红斑狼疮 风湿性心脏病,妊娠的假阳性反应,这是一种生理情况下的生物学假阳性,假阳性发生率较低有报告为,0.4%,，滴度低。,27,梅毒实验室检测解析,10/11/2024,妊娠的假阳性反应这是一种生理情况下的生物学假阳性27梅毒实验,假阳性问题,梅毒假阳性反应的处理,技术性假阳性反应一般是由于操作错误引起的假阳性反应，经过重复试验即可除外。,对急性生物学假阳性反应，应做,TPHA,（,TPPA,）等试验进行排除。,28,梅毒实验室检测解析,10/11/2024,假阳性问题梅毒假阳性反应的处理28梅毒实验室检测解析10/3,前带现象,原理,指二期梅毒患者非梅毒螺旋体抗原血清试验中，有时血清中存在高浓度的抗体时出现的弱阳性、不典型或阴性反应的结果。,处理,将血清稀释后再进行试验。,29,梅毒实验室检测解析,10/11/2024,前带现象原理29梅毒实验室检测解析10/3/2022,血清固定,耐血清性（血清固定）,指经抗梅毒治疗后，非梅毒螺旋体抗原血清试验在一定时期内不阴转。早期的耐血清性常与治疗量不足或不规则治疗、复发、再感染或有神经系统梅毒等因素有关。,30,梅毒实验室检测解析,10/11/2024,血清固定耐血清性（血清固定）30梅毒实验室检测解析10/3/,梅毒螺旋体抗原血清学试验,31,梅毒实验室检测解析,10/11/2024,梅毒螺旋体抗原血清学试验31梅毒实验室检测解析10/3/20,试验原理,检测血中特异性抗梅毒螺旋体特异蛋白为抗原的抗体（,IgG,和,IgM,）。,特异性,IgM,型抗梅毒螺旋体抗体，感染,2,周后即可测出。,32,梅毒实验室检测解析,10/11/2024,试验原理检测血中特异性抗梅毒螺旋体特异蛋白为抗原的抗体（ I,实验方法,梅毒螺旋体颗粒凝集试验,(TPPA),梅毒螺旋体血球凝集试验,(TPHA),梅毒酶联免疫吸附试验（,TP-ELISA,）,梅毒免疫层析法,-,梅毒快速检测,(RT),荧光螺旋体抗体吸收试验（,FTA-ABS,）,化学发光免疫分析法（,CLIA,）,梅毒螺旋体蛋白印迹试验（,WB,）,33,梅毒实验室检测解析,10/11/2024,实验方法梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)33梅毒实验室检测,TPPA/TPHA,原理,TPPA,试验原理与,TPHA,试验基本相同,TPPA,试验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒,TPHA,试验中梅毒螺旋体致敏羊红细胞,特点,梅毒螺旋体,(Nichols,株,),全抗原,34,梅毒实验室检测解析,10/11/2024,TPPA/TPHA原理TPPA试验原理与TPHA试验基本相同,操作步骤,1.,试剂准备：试验前将试剂和待检标本恢复到室温。,2.,加稀释液：每份样本做,4,孔，加标本稀释液加至微量反应板孔内，第,1,孔,100,微升，第,2,4,孔各,25,微升。,3.,样本稀释：取血清,25,微升加至第,1,孔，混匀后取,25,微升至第,2,孔，混匀后取,25,微升至第,3,孔，混匀后取,25,微升至第,4,孔，混匀后弃去,25,微升。,4.,加对照液：第,3,孔加未致敏颗粒,25,微升，第,4,孔加致敏颗粒,25,微升。,5.,混合：将反应板置振荡器振荡,30,秒。,6.,反应：置有盖湿盒，孵育,2 h,，或放,4,冰箱过夜观察结果。,35,梅毒实验室检测解析,10/11/2024,操作步骤1. 试剂准备：试验前将试剂和待检标本恢复到室温。,结果判断,1.,观察加未致敏颗粒的第,3,孔，不出现凝集为有效试验。,2.,观察凝集反应强度：分级如下。,4+,：颗粒光滑覆盖整个孔底，有时边缘有折叠。,3+,： 颗粒光滑覆盖大部分孔底。,2+,：颗粒光滑集聚覆盖孔底，周围有一颗粒环。,1+,：颗粒光滑集聚覆盖孔底，周围有一明显颗粒环。,：颗粒沉集孔底，中央形成一小点。 一：颗粒紧密沉积孔底中央。,36,梅毒实验室检测解析,10/11/2024,结果判断1.观察加未致敏颗粒的第3孔，不出现凝集为有效试验。,37,梅毒实验室检测解析,10/11/2024,37梅毒实验室检测解析10/3/2022,荧光螺旋体抗体吸收试验（,FTA-ABS,）,原理,将有完整形态的梅毒螺旋体作为抗原，加上经吸收剂（用,Reiter,螺旋体制备而成）吸收过的梅毒患者血清形成抗原抗体复合物，再加入异硫氰酸荧光素（,FTIC,）标记的抗人免疫球蛋白，与抗梅毒螺旋体抗体结合，形成荧光的抗原抗体复合物。在荧光显微镜下，螺旋体显出苹果绿色的荧光，即为阳性反应。,曾经认为,FTA-ABS,试验是检测梅毒的“金标准”试验。,38,梅毒实验室检测解析,10/11/2024,荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）原理38梅毒实验室,