CELL-基本培养方法

单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,Your company slogan,细胞培养操作前及操作中应注意事项,无菌操作贯穿细胞培养的始终,一、培养操作前注意,1.,培养用物品的灭菌消毒（写出物品清单）。,2.,操作台消毒（各物品布局合理进行紫外线消毒,30,分钟）。,3.,洗手和着装（原则上与外科手术相同）。,4.,火焰消毒（酒精灯使用、金属器械、吸过培养液的吸管）。,二、培养操作中注意：,动作准确敏捷有序；,培养用液开口后应,45,度倾斜，不再重复使用的应立即封口；,一个吸管只能吸一种液体；,不能面向操作台讲话或咳嗽。,基本的培养方法,悬滴培养方法,：,悬滴培养用的凹载玻片 单位：,mm,（一）单盖玻片培养方法,左图；,凹载玻片支架,右图：单盖玻片培养法操作图解 1、胚胎浸出液2、血浆3、心肌块 4、混合待凝固5、涂凡士林6、扣压7热溶石蜡密封,a,为正确操作,b,错误操作,8,、将密封好的凹玻片放到凹玻片支架上，放到培养箱内培养,9,、培养,7-8,个小时，组织块向外生长，培养,24,小时在组织块外周形成生长晕（一圈薄而透明的细胞圈），,48,小时候生长减慢甚至停止。需要重新加入鸡胚浸出液。,盖玻片法再培养 1、2、眼科刀切除生长晕 3 方型培养物切为两到四片 4、5培养物漂洗 6、7、再培养,此方法易污染,（二）双盖玻片悬滴培养法,双盖玻片图解：,1、载体盖玻片 2、带培养物盖玻片,与单盖玻片不同之处：,1、载体盖玻片加一滴消毒纯水贴到带有组织块的另一面。,2、再培养时：直接取下带培养物的盖玻片漂洗，换一张新的载体盖玻片,可减少污染。,二、培养瓶培养方法,20世纪50年代,Carrel,设计了卡氏瓶,Earle,设计了,T-,培养瓶,用血浆固定组织块的培养方法,图:卡氏瓶培养组织块 1.消毒卡氏瓶 2.火焰略烧瓶口 3.取少量血浆加入瓶底 4.再加等量胚胎浸出液 5.接种组织块 7.上盖,8.,消毒 9加入培养液 10,.,通气,用透明纸固定组织块的培养方法,图:内放有孔透明纸的培养瓶培养,a.,一个,T,培养瓶内放有有孔透明纸,b.,卡氏瓶接种后图解 1.有孔透明纸 2.组织块 3.培养液,旋转管培养法：,与前两种培养方法不同之处：细胞或组织块交替与培养液和空气直接接触，有利于细胞的生长。,旋转管培养方法用具,a.,简易旋转鼓，可放入培养箱内,b.,带旋转鼓装置的培养箱,c.,培养用的旋转管 1.示血浆的高度 2.示接种组织间间距 3.示加培养液 4.示可放旋转鼓内培养,d.,放旋转管的支架.(1.接种组织块时用 2.观察时用),四.灌注小室培养法,优点,1.,连续观察活细胞的动态变化,2.,研究理化性质对培养细胞的影响和作用,3.,活细胞的反应.,不锈钢培养小室图,A,中央切面图,B,侧面图(,mm),灌注小室及灌注系统示意图,A.,排液瓶,B.,受液瓶,C.,不锈钢灌注小室,D.,扁锥型小孔道,E、F、J.2,号注射针头,G、H.,塑料导管,I,玻璃导管,K、L.14,号注射针头(塞以棉花),五.培养板培养方法,无菌条件下操作，,在超净工作台下进行,培养过程：,1,、取材并制备拟用于培养的细胞悬液,2,、接种细胞，取下培养板的盖子，用吸管吸取一定量的细胞悬液，加到培养板的各孔内,3,、给培养板各孔补加足够的培养液,4,、加盖，放入,CO2,培养箱中培养。（贴壁能力弱的细胞在接种后放置于,CO2,培养箱中培养,3-5,小时，使细胞黏附牢靠后再补加充足的营养液，继续培养）,5,、每隔,2-3,天换液，换液时先将旧的培养液吸出，加入平衡盐溶液洗涤，吸出平衡盐溶液，再加入新的培养液。盖上盖子继续培养。,六、转瓶培养,生物观测台,