减数分裂的制片与观察

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,植物花粉母细胞减数分裂制片技术和染色体观察,一、实验目的,1,、观察染色体在减数分裂中的行为和变化，识别减数分裂各个时期特点，加深对减数分裂遗传学意义的理解；,2,、掌握动、植物减数分裂的制片技术。,二、实验原理,减数分裂是性母细胞在配子形成过程中一种特殊的细胞分裂方式。,在减数分裂过程中染色体只复制一次，而细胞却连续分裂两次，因此一个二倍体的性母细胞便形成为四个单倍体的性细胞。,高等植物花粉母细胞经减数分裂产生四个小孢子，染色体数目已减半为,n,。,小孢子进一步发育为花粉粒。,减数分裂过程,1,、,间期,(前间期,),2,、,减数第一分裂,3,、,中间期,4,、,减数第二分裂,前期,I,中期,I,后期,I,末期,I,前期,II,中期,II,后期,II,末期,II,在适宜的时期采集植物的花蕾，经固定液杀死固定，使细胞保持活体时形态。然后进行压片染色等处理，在显微镜下进行观察，可以看到小孢子母细胞的减数分裂过程，研究染色体在形态和数量上的动态变化特点。,三、实验用品,实验材料：玉米,（,Zea,mays,2n=20,）,雄花序或小麦、,蚕豆,(,Vicia,faba,2n=12,),花蕾、,蝗虫,(grasshopper,初级精母细胞,2n=22+X,),精巢,仪器物品：显微镜、水浴锅、镊子、解剖针,实验药品：卡诺,氏,固定液、,70%,乙醇、改良品红或醋酸洋红。,四、实验操作流程,取材 固定,剥离花药,染色 压片 镜检,1.,取材：,选取适当大小的花蕾，是观察花粉母细胞减数分裂的关键性步骤。不同植物取材时期不同。,玉米：抽雄前两周（大喇叭口期），,雄穗尖端露出以前,7-10d,时，先以手指挤摸穗尖的外部，觉得松软时,在雄花序所在部位用刀片纵向划一切口，用镊子取出花序分枝。此时雄花序先端小穗颖长,4mm,左右，花药长,2,3mm,。,每小穗中有两朵小花，各有花药,3,个 。通常从一个分枝上从幼嫩的部位向较为成熟的区域混合制片。,小麦：孕穗期以后，旗叶抽出,1,2cm,，,取出穗子。,时间一般在上午,9,时,10,时，不同材料间稍有差异。,玉米大喇叭口期,玉米小穗,玉米雄花序,小麦孕穗期,小麦的小花,实验中注意观察：每一分枝是中上部还是下部小穗发育最早？,2,固定：,取下的材料应立即放入固定液中杀死固定。,一般采用卡诺氏固定液，无水酒精：冰醋酸,3:1,，一般固定,424h,。可用,95, 乙醇代替无水乙醇。,如需长期保存，可先用,70%,酒精冲洗,2,次然后转入,70%,酒精中保存。,注意：固定液时应现配现用，固定时不要在阳光下暴晒。,3,、剥离花药,取出保存的花序，吸去小穗过多保存液，置于载玻片中央，挑出花药,4,染色：,在剥离的材料上滴加,1,滴染液，在室温下,染色,1015min,。,5.,压片,盖上盖玻片，在盖玻片上垫,1,2,层吸水纸，用一只手稳住载玻片和盖片,防止滑动,，另一只手用解剖针的针柄敲击盖片,6.,镜检观察,先用低倍镜观察，找到一个好的分裂相，再转用高倍镜观,察。要求能够分辨减数分裂的各个时期，特别是能够独立,辨认第一次减数分裂前期的各个时期,7.,观察永久制片,在显微镜下观察，并与自己的制片比较，掌握各个时,期的特点。,注意： 怎样区分各个时期？,五、实验结果与分析,1,绘出自己所制作片子的分裂相,(3,个以上时期），,说明其时期和特点。,2.,分析自己制片操作过程中出现的问题及可能原因。,注意事项,爱护显微镜。,一次取材不要太多。,用过的载玻片必须刷洗干净，用过的盖玻片丢入垃圾桶，不得直接冲入水池。,减数分裂前期,I,细线期,偶线期,偶线期,粗线期,双线期,终变期,中期,后期,后期,前期,II,中期,II,后期,II,末期,II,四分体,小孢子,玉米减数分裂中期,I,玉米减数分裂中期,II,M1,中期与,M2,中期的比较,前期,I,细线期,偶线期,粗线期,双线期,终变期,中期,I,后期,I,末期,I,前期,II,中期,II,后期,II,末期,II,取材及固定,捕捉雄性蝗虫，直接投入到卡诺固定液中固定,24,小时，然后转到,70,的酒精中保存。,雌雄虫辨别,（外观）,雄性蝗虫虫个体小，雌虫较大；,雌性蝗虫尾部有产卵瓣，雄虫无,。,解剖取出,精巢,：,先将蝗虫翅膀剪去，在翅基部的后方，相当于腹部背侧的前端，用解剖剪将其体壁剪开，上方两侧的黄色团块就是精巢。精巢由许多排列在一起的精小管组成。,将精巢取出置于一洁净的培养皿内，用蒸馏水洗涤干净。用解剖针将精巢轻轻分离开，即可看到大量的精细小管。,取,1,2,根精小管放在干净的载玻片上，用吸水纸将上面的水吸净，,在精小管位置上滴加一滴改良苯酚品红染液，在室温下染色,10-15min,。,附：显微镜操作和使用,开关显微镜，移动显微镜。,调节,目镜间距和目镜微调,，使两个眼睛视野相同和清晰，防止眼睛疲劳。,先低倍镜，后高倍镜观察，高倍镜下不准用粗调。,高倍镜下不得取、放载玻片。,使用结束：电压或光亮度调至最小,，关闭并拔下电源，降低载物台，,最低倍物镜或无目镜的镜筒居中,，防尘罩，,填写使用记录,，请老师验收方可离开。,调节,目镜间,距和目镜微调,