血清谷丙转氨酶

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,血清谷丙转氨酶活性的测定,实验目的,掌握谷丙转氨酶活性测定的,原理和方法,血清谷丙转氨酶作用于由丙氨酸及,a,一酮戊二酸组成的基质。产生丙酮酸及谷氨酸,血清加基液保温后产生丙酮酸的多少，即反应出谷丙转氨酶活性的大小。,丙酮酸与,2,，,4-,二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在酸性溶液中显,黄色,，在碱性溶液中成醌型显,棕红色,。,实验原理,本实验是在碱性条件下，生成醌类化合物的量反应丙酮酸的量，即反应了谷丙转氨酶的活性。,本法以,lml,血清与基质液在37，保温30分钟生成,2.5g,丙酮酸为谷丙转氨酶活性,1单位,求酶活性单位的方法：,1、标准品对照法：,检品与标准丙酮酸液同样处理呈色，进行比色，计算出酶活性单位。,2、标准曲线法：,取含待测物的一系列标准溶液，作标准曲线，由标准曲线查得活性单位。,一、标准品对照法,取试管4支，标号，按下表加试剂：,基质液,血清,丙,酮,酸,水,4个管同时放入37水浴中。,准确保温30分钟，,呈,色,试,剂,基,质,液,A（检品）,0.5,0.1,0.5,B（检对照）,0.1,0.5,0.5,S（标准）,0.5,0.1,0.5,S（标对照）,0.1,0.5,0.5,实验操作,56放置5分钟。,加0.4N NaOH液5.0ml,慢慢加入,（约1分钟），边加边混匀。,室温放置 30分钟，,测OD值，波长 520nm，用,蒸馏水,调零点。,计 算,（ODA-ODB）,（ODs-ODs）,=,X（待测样品丙酮酸含量）,50ug/ml,0.1 ml,X,=,（ODA-ODB）,（ODs-ODs）,5,SGPT单位=,（ODA-ODB）,（ODs-ODs）,5,0.1,2.5,=,（ODA-ODB）,（ODs-ODs）,20,二,、,标准曲线法,配制一系列不同浓度的标准丙酮酸液，并且各加以适量的基质液，,作成标准曲线。具体做法如下表。,管号,1,2,3,4,5,空白,标准丙酮酸（50g/ml）,基质液ml,蒸馏水ml,丙酮酸含量g,相当GPT单位,0.05,0.5,0.45,2.5,10,0.1,0.5,0.4,5.0,20,0.2,0.5,0.3,10,40,0.3,0.5,0.2,15,60,0.4,0.5,0.1,20,80,-,0.5,0.5,-,0,。,各管混匀，放37水浴5分钟,加0.4N NaOH液5.0ml,慢慢加入,（约1分钟），边加边混匀,然后各加呈色试剂0.5ml，混匀,56放置5分钟。,室温放置 30分钟,测定OD值,波长 520nm，用,蒸馏水,调零点。,A,B,S,S,OD值,一标准对照法,.,原始数据记录,2、公式计算酶活性单位（要求带入数据，写出结果,）,二、标准曲线法,.原始数据记录,1,2,3,4,5,空白,OD标准,OD标准,OD空白(纵坐标),-,标准GPT单位(横坐标),10,20,40,60,80,-,2、绘制标准曲线，（要求规范作图）,3、通过方法一的ODA-ODB，在标准曲线中，查得酶活性单位,实验结果,注意事项,操作中加 0.4N NaOH液时，需以较慢速度加入，并且边加边摇匀加快时则a一戊酮二酸引起的发色增强。,本实验中各试剂加量都需要准确，并且要注意控制条件，保温时间要严格,本法测定SGTP正常值为40单位以下。,分析实验误差产生的原因,血清GPT活性测定的意义,实验讨论,