血清浆脂类及脂蛋白测定

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,血清（浆）脂类及脂蛋白测定,董雷鸣,血脂的组成：,甘油三酯(少量甘油二酯和甘油一酯),磷脂,胆固醇和胆固醇酯,非酯化脂肪酸（游离脂肪酸）等,血脂的运输形式,脂蛋白,1、定义：,指,血浆脂质与载脂蛋白组成的可溶性的生物大分子。,磷脂,胆固醇,载脂蛋白,甘油三酯,胆固醇酯,2、结构：,脂蛋白微粒,表面,核心,3、分类,(1)按密度不同,HDL,LDL,IDL,VLDL,CM,(2)按电泳时区带的泳动位置不同,CM,HDL,VLDL,LDL,CM,-LP,前-LP,-LP,-LP,前-LP,-LP,CM,临床血脂测定的常见项目：,实验51：,磷钨酸-镁沉淀法测定高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）,提取HDL 测定胆固醇,实验原理：,超速离心法,层析法,电泳法,沉淀法,提取HDL的方法：,沉淀法原理,：,ApoB+多阴离子化合物,沉淀,硫酸葡聚糖-Mg,2+,肝素-Mn,2+,磷钨酸-Mg,2+,多阴离子（polyanion）化合物,过氧化物酶,胆固醇+O,2,胆甾烯酮+,H,2,O,2,H,2,O,2,+酚+4-氨基安替比林,亚胺醌,+H,2,O,胆固醇测定（酶法）：,试剂：,沉淀剂,酶试剂,参考血清（TC测定用的定值血清）,操作步骤：,取血清和沉淀剂各200l，充分混匀，置室温放置10min后，2500r/min，15min，吸取,上清液,按表进行操作。,1、提取HDL,加入物(l),空白管,标准管,测定管,上清液,50,参考血清,50,蒸馏水,50,酶试剂,2000,2000,2000,混匀，37水浴,15min,；空白管调零，0.5cm比色杯，500nm比色。,2、测定胆固醇,计算：,参考值：,HDL-C(mmol/L),测定管吸光度,标准管吸光度,=,定值血清胆固醇浓度,5.17,0.92.0mmol/L,2,注意事项：,1、血清标本要及时测定,（在室温条件下，各型脂蛋白之间会发生脂质交换）；,（游离的胆固醇会不断酯化）。,2、离心过程中防止温度过高（室温1525），离心后放置时间不能过长。,（温度过高使沉淀不完全）。,临床意义：,具有抗动脉粥样硬化作用，是冠心病的保护因素。,磷酸甘油氧化法测定血清甘油三酯（TG）,实验49：,甘油三酯(TG)的结构：,甘油三酯测定的方法：,化学法,酶法,化学法,（KOH）,（过碘酸）,皂化,氧化,抽提 甘油 甲醛 显色,甘油三酯,甘油,甲醛,变色酸,紫红色,甘油三酯,3-磷酸甘油 +ADP,+ATP,O,2、,H,2,O+,磷酸二羟丙酮+H,2,O,2,甘油,+脂肪酸,+酚、4-氨基安替比,亚胺醌,+H,2,O,LPL,GK,GPO,POD,酶法,（磷酸甘油氧化酶法）,试剂：,酶试剂,2.26mmol/L的三油酸甘油酯标准液,操作：,加入物(l),空白管,标准管,(2),测定管,(2),上清液,20,参考血清,20,酶试剂,2000,2000,2000,37水浴10min；空白管调零，0.5cm比色杯，500nm比色。,计算：,TG(mmol/L),测定管吸光度,标准管吸光度,=,标准液浓度,参考值：,0.561.70mmol/L,2.26mmol/L,临床意义：,增高:,与动脉粥样硬化关系密切、家族性的脂代谢紊乱、糖尿病等。,降低:,营养不良、消化吸收综合征、消耗性疾病等。,注意事项：,标本：,标本要求是餐后12-14h的空腹血液,（血清TG易受饮食影响）。,标本存放不宜超过3天,（避免TG水解而释放出甘油）。,试剂：,酶试剂应4避光保存，出现红色不可再用。,免疫透射比浊法测定血清载脂蛋白A,1,和载脂蛋白B,实验53：,抗原,抗原抗体复合物,抗体,+,ApoA,1,ApoB,ApoA,1,抗体,ApoB抗体,比色,原理：,ApoA,1,与高脂血症、冠心病呈负相关；,ApoB 与高脂血症、冠心病呈正相关。,临床意义：,