dd第四次实验血钙血磷测定

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,遵义医学院,临床生化实验,PowerrPoingt,Email:,第四次实验 钙、磷、试剂空白测定,目的与要求,1.,掌握钙、磷的测定原理和操作方法,2.,掌握试剂空白测定的应用,3.,了解钙、磷的测定的临床意义,一、血清钙离子测定,甲基麝香草酚蓝比色法,邻甲酚酞络合酮法（临检中心推荐）,原子吸收光谱法,离子选择电极法,(,一,),实验原理,血清中钙离子在碱性溶液中能与甲基麝香草酚蓝染料结合，生成有色复合物。,(,二,),试剂,显色试剂,碱性试剂,标准液,MTB,8-,羟基喹啉,乙醇胺,碳酸钙,2.50 mmol/L,工作液：显色试剂与碱性试剂等量混合,(,三,),操作,1.,检测参数,主波长：,612nm,温度：室温。,2.,空白管 标准管 样本管,工作液,2.0ml,去离子水,20ul,）,工作液,2.0ml,工作液,2.0ml,钙标准液,20ul,血,20ul,3.,分别混匀各管，室温放,5,分钟，以空白管校零，记录各管吸光度。,4.,结果,钙,(mmol/L)=,样本管吸光,度,标准管吸光度,标准液浓度,(,四,),临床意义,1.,参考值：,2.12.9mmol/L,。,生命危急值：,1.7mmol/L,，,3.3mmol/L,。,2.,增高：甲旁亢、多发性骨髓瘤、,VitD,增多症、代酸等,3.,降低：甲旁减、尿毒症、佝偻病等。,(,五,),方法评价,1.,重复性、准确度较好、简便、易于自动化。,2.,线性：在样本浓度,0-3.75mmol/L,范围内,线性良好。,3.,精密度：批内,CV5,。批间相对误差,5,4.,易受干扰。,三、无机磷的测定,磷钼酸还原法,临检中心推荐,染料结合法,氧化酶法,同位素质谱法决定性方法,原子吸收光谱法,(,一,),实验原理：,血清中无机磷在酸性溶液中与钼酸铵反应生成在,340nm,处有吸收峰的磷钼酸铵，其吸光度的变化与无机磷含量成正比。,(二)试剂,磷试剂,硫酸,220mmol/L,钼酸铵,1.0mmol/L,表面活性剂 适量,校准液：,磷酸二氢钾,1.29mmol/L,防腐剂 适量,(,三,),测定步骤,混匀，以,3710,在,340nm,波长处比色。,结果,无机磷含量,=A,样本,/A,校准,C,校准,空白管,校准管,标本管,磷试剂,纯化水,校准液,标 本,(ml),1.0,1.0,1.0,0.02,0.02,0.02,(四)临床意义,1.,参考值：成人：,儿童：,2.,增高：甲旁减、慢性肾炎晚期、多发性骨,髓瘤、骨折愈合期等。,3.,减低：甲旁亢、肾小管变性病变时等。,(,五,),方法性能,精密度,:,批内变异,CV5,。,线性范围,:,0-4mmol/L,。,三、试剂空白测定,1.,定义：用蒸馏水调零测定仅仅未加样品的试剂管，用以扣除试剂干扰对结果所造成的系统误差。,本次实验用钙离子测定的方法进行试剂空白实验。,2.,操作,试剂空白,标准管,测定管,工作液,2.0ml,2.0ml,2.0ml,标准液,-,0.02ml,-,蒸馏水,0.02ml,-,-,标本,-,-,0.02ml,室温放,5,分钟，以蒸馏水调零，,612nm,测定。,计算,空白值,=,空白,OD/,标准,OD,标准浓度,样本值,=,标准浓度,样本,OD-,空白,OD,标准,OD-,空白,OD,3.,试剂空白的选择原则,（,1,）试剂中某组分在测定波长下对光有吸收；,（,2,）被测试样本身在测定波长下没有光吸收；,（,3,）被测试样中的其他成分与显色剂作用后在测定波长下没有光吸收；,（,4,）利用改变加入试剂的次序使试样不显色。,预习下次课内容：总蛋白测定及回收试验。,