网织红细胞的检测及临床应用

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,网织红细胞的检测及应用,覃乃辉,网织红细胞？,网织红细胞(,reticulocyte,Ret),未完全成熟的红细胞,(过渡型细胞),生成,去向,寿命,发现:,1865 年,Dr.Wilhelm.H.Erb,亚甲蓝对血液进行活体染色,形态分型,(国际血液学标准化委员会),型（丝球型）,型（网 型）,型（破网型）,型（点粒型）,Heilmyer,分五型：增加0型（花冠型）,临床应用,1、,铁缺乏、缺铁性贫血的诊断和治疗,2、,再生障碍性贫血的诊断和治疗,3、,VitB,12,治疗巨幼红细胞性贫血的疗效监测,4,、,骨髓移植,5、,肿瘤治疗,监测,6、,监测药物的骨髓抑制毒副作用,（一）铁缺乏、缺铁性贫血的诊断和治疗,铁缺乏常用诊断方法：,骨髓铁染色,SF（,血清铁蛋白）,血清铁,总铁结合率,sTfR（,血清转铁蛋白受体）,TSAT（,转铁蛋白饱和度）,新参数：,CHr（,平均网织红细胞血红蛋白含量）,CHr,的优点：,1、不受急性时相反应的影响,2、灵敏度、特异性好,优于,SF（,血清铁蛋白）、,sTfR（,血清转铁蛋白受体）、,TSAT（,转铁蛋白饱和度）,若以平均红细胞血红蛋白含量,CH27.0,，,CHr 29.1,为,IDA,的诊断标准,灵敏度为100%,特异性98.8%,CHr,及,CH,两个参数联合应用时是诊断,IDA,时灵敏度和特异性最高的指标,（一）铁缺乏、缺铁性贫血的诊断和治疗,铁剂治疗监测,网织红：,Ret#,明显增高(第4 天),CHr、MCVr,及,CHCMr,恢复正常(第7 天),血细胞分析：,Hb,次之(4,wk,后),MCV、CH、CHCM(7wk,后),RDW,最晚(120,d),IDA,患者铁剂治疗后，,Ret,参数恢复是迅速的,特别是%,Hretic,和%,MRetic,的升高。成熟红细胞参数恢复是缓慢的。通过,Ret,参数可以早期观察,IDA,病人骨髓对铁剂治疗的反应，进行诊断和鉴别诊断，为临床早期合理用药提供帮助。,指导终末期肾病（,ESRD）,贫血患者的静脉补铁治疗,（一）铁缺乏、缺铁性贫血的诊断和治疗,（二）再生障碍性贫血的诊断和治疗,再生障碍性贫血的网织红细胞计数极低（0.0310,12,/,L），,不成熟细胞比率 5%预示在7-14天内多形核细胞将上升并 0.510,9,/,L。,（,三）,VitB,12,治疗巨幼红细胞性贫血的疗效监测,VitB,12,治疗巨幼红细胞性贫血的早期反应为网织红细胞体积变小，以至小于外周血循环中的成熟红细胞体积，即,MCVr/MCV,比值倒置。随后比值才逐渐恢复正常。,（四）,骨髓移植,移植后网织红细胞较白细胞提前3-4天,（五）,肿瘤治疗,监测,在化疗开始时,高核酸浓度网织红细胞百分率（%,HRetic）,和中核酸浓度网织红细胞百分率（%,MRetic）,在化疗后降至0%或很低水平,同时%,HRetic,和%,MRetic,的降低早于中性粒细胞和血小板；%,HRetic,升高可作为骨髓恢复期的早期敏感指标,较白细胞升高早1 周,较网红绝对数升高早2 周。提示幼稚网织红细胞的变化是肿瘤化疗时,骨髓受抑制和恢复期开始的较敏感指标。,（六）监测药物的骨髓抑制毒副作用,网织红细胞的检测,传统的手工染色和计数法全自动分析仪测定法,手工计数,染料,标本,染料/标本,普通光学显微镜计数,1000个红细胞,百分率表示,手工计数缺陷,精密度差,在正常参考范围内的网织红细胞计数精密度(,CV),在20%25%的范围,甚至高达46.0%；而处于低值的网织红细胞计数精密度可高达70%。,采用,Miller,窥盘进行网织红细胞计数的精密度可15%。,传统染色计数法仍然是对自动化网织红细胞计数结果复核 的一种参考方法,全自动分析仪测定法,流式细胞仪法,专用网织红细胞分析仪：日本,Sysmex,公司在,1988,年推出,血液细胞分析仪法：,美国贝克曼,-,库尔特,(,Beckman-Coulter),、,日本希森美康,(,Sysmex),、,美国雅培,(,Abbott),、,美国拜耳,(,Bayer),、,法国,ABX,精密度更有明显提高。统计表明对低网织红细胞标本，仪器法,CV,在,10%20%,之间；对正常范围的标本，,CV,值在,3%16%,之间；高值标本，,CV,更可降低到,2%10%,ADVIA120,测定原理,直接由仪器自动吸入和快速进行氧氮杂芑750(,Oxazine 750),染色处理和孵育。网织红细胞被染色后，通过流动细胞池(,flowcell),时被激光束激发出特定波长的荧光，通过测量网织红细胞结合荧光染料后发出的荧光来区分成熟红细胞和网织红细胞，同样也可根据网织红细胞发射荧光强弱来对应网织红细胞的成熟程度，不同成熟阶段的网织红细胞含有不同量的,RNA，,从而获得低核酸网织红细胞(,L Retic)、,中荧光强度网织红细胞(,MRetic),和高荧光强度网织红细胞(,H Retic),群。仪器还通过其他的检测方法检测得到各种有关网织红细胞的研究参数。,Two microliters(2 l)of an EDTA anticoagulated whole-blood sample are mixed online with 1250l of the ADVIA120 autoRETIC reagent.,ADVIA 120,测定网红具有准确度高、重复性好、检测快速,(,75,份,/,小时,),且操作简便等优点,适合大批标本的快速常规检测,Sample Collection,Collect whole blood in an evacuated blood collection tube containing EDTA as an anticoagulant.Blood samples should be refrigerated at a temperature from,2,to 8,if they will not be analyzed within eight(8)hours of phlebotomy.If a specimen has been refrigerated,allow it to equilibrate slowly to room temperature(15 to 30)before mixing.,Sample Dilution,Dilution of whole-blood specimens for RETIC analysis is not recommended.,Sample Stability,Two whole-blood specimens drawn from 15 normal,apparently healthy donors were assayed shortly after phlebotomy and then again at intervals of 8,24,36,48,56,and 72 hours.,One of the whole blood specimens from each pair was stored at room temperature while the corresponding specimen was stored at 2,to 8,in capped blood collection tubes that contained EDTA as the anticoagulant.,The results indicate that RETIC parameters are stable within 2 standard deviations(within run precision)of the initial recovery for the specified time interval.The stability of calculated parameters is limited to the stability of the least stable primary parameter.,Parameter Room TemperatureStability(hours)Refrigerated TemperatureStability(hours),%RETIC 24 72,CHr 24 72,ADVIA(R)120 Hematology System Operators Guide:Reticulocyte Method(Regulatory Info.)Version 1.02.01,Copyright?1997-1999 Bayer Corporation,谢谢！,