肺炎支原体明胶颗粒凝集试验及其临床应用--课件

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,ppt课件,*,肺炎支原体,明胶颗粒凝集试验,及其临床应用,肺炎支原体（,Mycoplasma pneumoniae,，,Mp,）是引起非典型性肺炎的常见病原体。支原体肺炎的发病率可占到所有肺炎病例的,20,30%,Mp,主要的易感对象为儿童和年轻人，但近年来发现,65,岁以上老年人群发生的社区获得性肺炎中有,15%,是,Mp,引起的，且,5,岁以下的婴幼儿也可发生感染,Mp,感染可发生在一年中的任何季节，没有明显的季节流行特征。支原体肺炎同时具有地方性和周期流行性的特点，流行周期一般为,3,7,年，在流行的高峰时，其发病率可达到肺炎总发病率的,70,80%,Mp,感染临床上主要表现为气管炎和上呼吸道感染症状。约,15%,的感染者没有临床症状，只有,5,10%,会发展成为肺炎。其主要特点是起病较慢，有头疼、发热、咽喉疼痛、不适以及最典型的干咳等症状。一般情况下，支原体肺炎的死亡率不高，但少见的肺外感染（累及神经、心脏、关节、红细胞等）却往往表现出更严重的症状,肺炎支原体概况,精品资料,你怎么称呼老师？,如果老师最后没有总结一节课的重点的难点，你是否会认为老师的教学方法需要改进？,你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？,教师的教鞭,“不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我笨，没有学问无颜见爹娘”,“太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早”,可引起非典型肺炎的病原体很多，单凭临床症状和影象学检查不能明确区分,Mp,和其它病原体所引起的感染，因此实验室检测结果就显得尤为重要：,一般实验检查,白细胞计数(,25%,升高)；血沉(,30%,升高)；痰液检查(无革兰阴性菌)；肝肾功能(可能出现一些非特异性的异常),培养,根据临床上的情况，咽拭子、痰液、胸水、肺活检组织等均可用于培养。应注意床边接种及使用运送培养基（,SP4,肉汤）。培养需要营养要求很高的专用选择性培养基，耗时长(,3,5,周)且敏感性一般,血清学试验,是目前实验室检测的主要方法,抗原检测,使用抗原捕获酶免疫测定,据称可达到较高的敏感性和特异性。但该方法有被分子生物学方法取代的趋势,分子生物学检测,近年来各种分子杂交和,PCR,检测方法在科研中的应用越来越多，今后有可能成为,Mp,实验室诊断的常规方法之一,肺炎支原体的实验室检测,人类对,Mp,无先天免疫性，尚无可实际应用的有效疫苗，感染后也不能产生完全的保护性免疫,Mp,特异性的,IgM,抗体在发病后不久即可出现升高，,14,周内达到峰值，然后在几个月内逐渐下降到没有临床意义的水平。急性感染后,IgM,的持续时间在不同个体中差异较大。儿童的,IgM,反应一般强于成人，约,50%,的成人患者无法在,Mp,感染后测到,IgM,的升高,IgG,的出现时间晚于,IgM,，,5,周左右达到峰值，上升速度较慢且在体内的持续时间较长（,4,年左右），但在感染数月后就会下降到较低水平。有些儿童无法测得明显的,IgG,反应,特异性,IgA,的免疫反应与,IgM,类似，但其在成年人尤其是老年人中的反应水平更高,肺炎支原体的免疫性,冷凝集试验,：冷凝集素是对,Mp,最早的体液反应，,50%,的病人在,Mp,感染第,2,周时的滴度可达到,1:32,以上，而,6,周内即降至感染前的水平。冷凝集试验虽然简便、快速，但它不是针对,Mp,的特异性试验，多种其他微生物感染（如,EB,病毒、巨细胞病毒、肺炎克雷伯菌）和自身免疫性疾病时冷凝集素滴度均可升高。同时，该试验的敏感性也只有,5060%,，对于,12,岁以下的儿童其敏感性则更差,补体结合试验,(CFT),：十几年前，,CFT,仍是,Mp,血清学试验的标准方法，但越来越多的研究表明该方法的敏感性和特异性都不够高。,CFT,所用的抗原为,Mp,的氯仿,-,甲醇糖脂抽提物，它可与人类、细菌及植物的某些抗原表位发生交叉反应（如脑膜炎时，,CFT,滴度可明显升高）。,CFT,测定的主要是,IgM,，对,IgG,不很敏感，导致其整体敏感性偏低。,肺炎支原体的血清学试验（一）,间接血凝试验,(PHA),：,将提纯的,Mp,抗原连接到红细胞（禽类或羊）上，与血清中的抗,Mp,抗体可发生凝集反应。该试验的敏感性和特异性均明显优于,CFT,。,PHA,不能区分抗体的类型，因此单份测定出现低滴度的抗体阳性结果并不能确定是既往感染还是新近感染。最好能间隔,23,周再采取第,2,份血样进行测定，观察抗体滴度是否有,4,倍以上的增加（血清转化）。单次测定出现高滴度抗体阳性（大于,1:8,）也有助于对,Mp,新近感染的判断,明胶颗粒凝集试验,(PA),：,其原理与间接血凝试验基本相同，只是用人工合成的明胶颗粒取代了红细胞作为凝集试验的载体，从而使结果判定更清晰，静置稳定性更好，非特异性反应大大减少，检测的敏感性也有了进一步提高（对,IgM,和,IgA,更敏感）,肺炎支原体的血清学试验（二）,酶联免疫吸附试验（,ELISA,）：,是目前,Mp,血清学试验中常用的方法，可分开检测,IgM,、,IgG,和,IgA,，敏感性和特异性均能达到较高的水平。虽然单次测定,IgM,（或,IgA,）阳性即可基本判定为,Mp,的新近感染，但阴性时却无法排除感染的可能性。,IgG,一般须进行间隔,2,周以上的双份血清测定，有,4,倍以上滴度上升时才能做出,Mp,新近感染的诊断。因此，在,ELISA,测定中应强调同时检测,IgG,和,IgM,（或,IgA,），且最好能对间隔,2,周以上的双份配对血清进行抗体转化情况的测定，从而做出明确的诊断,金标快速检测：,具有简便、快速的优点。但也同样应强调,IgG,和,IgM,的同时检测。由于只能进行定性测定，无法观察血清转化情况，限制了其在临床诊断中的价值,其它方法：,间接免疫荧光试验（,IFA,）、乳胶凝集试验（,LA,）、免疫印迹测定（,WB,）、黏附抑制试验、放射免疫沉淀试验、补体介导的杀伤试验等,肺炎支原体的血清学试验（三）,对肺炎支原体的治疗原则,对仅有上呼吸道症状的肺炎支原体感染，不需要进行抗生素治疗,支原体肺炎虽然有一定的自限性，但仍应进行抗生素治疗以缩短病程并减少其传染性,在非典型性肺炎的病原体未完全确定时，可以采取一些经验用药，对,Mp,有效的药物也能覆盖一些其他病原体（非病毒类）,抗生素的使用：首选为大环内酯类，也可选用四环素类（老年人）和喹诺酮类。,Mp,对,-,内酰胺类抗生素天然耐药，磺胺类对,Mp,也没有作用,抗生素使用一般应持续,710,天，但口服用药延长至,1421,天也是合适的,除使用抗生素外，还应采取一些对症治疗措施（止咳药、退烧药、止痛剂等）,赛乐迪亚（Serodia）M,YCO,II 肺炎支原体抗体明胶颗粒凝集试验,凝集试验与,ELISA,的原理比较（一）,ELISA,Color,凝集试验,凝集试验与,ELISA,的原理比较（二）,ELISA,凝集试验,凝集试验与,ELISA,操作步骤的比较,ELISA,凝集试验,加入样品和稀释液,第一步反应,洗涤,洗涤,第二步：酶反应,显色,第三步：,加入底物,结果判读,孵 育,凝集图像,反应温度对凝集试验及,ELISA,的影响,凝集试验,10 20 30,反应温度（,）,反应,ELISA,不同类型样品对,凝集试验及,ELISA,检测结果的影响,X,：假阳性,O,加热灭活,X,：与底物有关,O,溶血,O,黄疸,O,脂血,O,O,血浆,O,O,血清,ELISA,凝集试验,样品类型,O,：无影响,：部分有影响,X,：有影响,明胶颗粒的制备,明 胶,阿拉伯胶,醋 酸,染料,/,色素,偏 磷 酸,乙 醇,水,3.0m,表面电荷,-0.760,-0.830,明胶颗粒（电镜照片）,明胶颗粒的致敏,5%,明胶颗粒,/0.15M PBS,（,pH7.2,）,5ppm,丹宁酸,/0.15M PBS,（,pH7.2,）,孵育（,37,，,15min,）,生理盐水洗涤（,2000rpm,，,5min,）,活化的明胶颗粒,/0.15M PBS,（,pH5,9,）,抗原,孵育（,37,，,60min,）,生理盐水洗涤（,2000rpm,，,5min,）,5%,致敏明胶颗粒,/,悬浮液,*,冷冻干燥,*,0.15M PBS,（加入正常兔血清、明胶、阿拉伯胶等）,SERODIA-,MYCOII,操作步骤,SERODIA-,MYCOII,的结果判读,最终稀释倍数,非特异性反应,滴度,40,80,160,320,640,1280,2560,5120,10240,20480,对照,肺炎支原体,（,Mac,株）,+,+,+,640,人形支原体,（,PG21,株）,40,唾液支原体,40,口腔支原体,40,口腔支原体,II,型,40,发酵支原体,40,咽支原体,40,SERODIA-,MYCOII,的特异性,正常人肺炎支原体抗体滴度的分布,Myco II,测定的抗体滴度达到,1:40,：抗,Mp,抗体阳性,Myco II,测定的抗体滴度达到,1:160,：提示新近感染,以,p180,免疫印迹法作为参考方法，用,56,份血清样品对,5,种,Mp,抗体商品化试验进行评估,p180/,其它方法,血清份数,CFT,IFA,ELISA,PA,LA,33,33,33,33,33,21,20,19,22,21,0,0,0,0,0,2,3,4,1,2,总体一致率,96.4%,94.6%,92.8%,98.2%,96.4%,敏感性,100%,100%,100%,100%,100%,特异性,91.3%,87.0%,82.6%,95.6%,91.3%,CFT,：补体结合试验；,IFA,：间接免疫荧光试验；,ELISA,：酶联免疫吸附试验；,PA,：明胶颗粒凝集试验；,LA,：乳胶凝集试验,S,ERODIA-,MYCOII,与其它方法比较（一）,p180,免疫印迹图象出现显著变化的,6,对血清样品的血清检测结果,患者号,(,性别,/,年龄,),日期,月,/,日,p180,印迹,CFT,IFA,ELISA,PA,LA,O.D.,值,比率,1(,男,/3,岁,),1/08,1/25,0,+,8,32,64,128,0.01,0.27,27,40,1280,2(,男,/4,岁,),10/16,12/17,0,+,8,32,64,512,0.21,0.41,2,40,5120,+,3(,男,/4,岁,),1/16,2/17,0,+,256,0.34,0.87,2.5,320,2560,+,4(,男,/19,岁,),10/16,11/03,0,+,1024,0.31,0.31,1,40,20480,5(,男,/12,岁,),3/19,3/31,+,+,8,64,64,1024,0.39,0.94,2.4,40,20480,6(,女,/26,岁,),1/06,1/19,+,+,8,64,64,256,0.27,0.48,1.8,640,1280,+,CFT,：补体结合试验；,IFA,：间接免疫荧光试验；,ELISA,：酶联免疫吸附试验；,PA,：明胶颗粒凝集试验；,LA,：乳胶凝集试验,SERODIA-,MYCOII,与其它方法比较（二,）,某市,2003,年就诊患者,Mp,抗体检测阳性率月份分布,全年平均阳性率为：,40.1%,（,5254/13094,）,SERODIA-,MYCOII,临床应用（一）,诊断标准,大于等于,1:160,小于,1:160,总计,检测阳性数,112,171,283,出院确诊数,101,132,233,诊断符合率,90.18%,77.19%,82.3%,2004,年,1-3,月某医院病房送检,Mp,结果与临床诊断符合率,说明：在,283,例,M p,阳性病例中，有,50,例的出院第一诊断为非,Mp,感染疾病，不排除同时有,MP,感染的可能。,SERODIA-,MYCOII,临床应用（二）,SERODIA-