5.3血红蛋白的提取和分离(1)

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,课题,3,:,血红蛋白的提取和分离,PCR,反应需提供的条件,1:,缓冲液,中,进行,2:DNA,模板,3:,分别与两条模板链相结合的两种引物,4:,四种脱氧核苷酸,5,：耐热的,DNA,聚合酶,6,：同时通过控制温度使,DNA,复制在体外反复进行,5,引物1,5,引物2,第二次复制,第一次复制,5,5,5,5,5,5,模板DNA,5,5,5,5,5,5,5,5,2530 次循环（复制）后，模板DNA的含量可以扩大100万（2,20,）倍以上。,体内DNA复制与PCR的技术区别：,体内复制,PCR技术,解旋,引物,一般用DNA片段,DNA聚合酶,细胞自身的DNA聚合酶（不耐高温）,TaqDNA聚合酶,复制特点,半保留复制，边解旋边复制，多起点复制。,半保留复制，完全解旋后复制，从模板链的一端开始复制。,复制的方向,子链的5,端向 3,端延伸,子链的5,端向 3,端延伸,在解旋酶作用下，细胞提供,ATP,，部分解开,加热到,94oC,双链全部解开，不需解旋酶,一小段,RNA,血红蛋白介绍：,血红蛋白是高等生物体内负责运载氧的一种蛋白质，是使血液呈红色的蛋白。血红蛋白是由,574,个氨基酸脱水缩合而成的含有四条肽链的蛋白质（两条,链和两条,链，每一条链有一个包含一个铁,原子,的环状血红素）。氧气结合在铁原子上，被血液运输。,因含血红素血红蛋白呈红色。,血红蛋白占红细胞干重,97%,、总重的,35%,。平均每克血红蛋白可结合,1.34ml,的氧气，是血浆溶氧量的,70,倍。一个哺乳动物血红蛋白分子可以结合最多四个氧分子。血红蛋白也参与其他气体的转运：它能携带机体的部分二氧化碳（大约,10%,）。,回忆：,蛋白质,基本单位？合成场所？,蛋白质的分子结构具有多样性的直接原因？根本原因？,蛋白质的功能？,思考：蛋白质的分离和提取的原理是什么？,根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度和吸附的性质和对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同蛋白质。,主要功能,实例,组成细胞的,结构成分,细胞膜中的蛋白质，染色体中的蛋白质等,运输,功能,细胞膜上的载体蛋白、运输氧气的血红蛋白等,催化,功能,胃蛋白酶、纤维素酶等,调节,功能,生长激素、胰岛素等激素,免疫,功能,B,淋巴细胞受到抗原刺激后产生的抗体,一、基础知识：,凝胶色谱法（分配色谱法）：,1,、凝胶：,一些微小多孔的球体（内含许多贯穿的通道，由多糖类构成如葡聚糖、琼脂糖）,2,、,概念：根据,相对分子质量的大小,分离蛋白质的方法,3,、原理：,当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（），移动速度（），而（）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（）移动，路程（），移动速度（），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。,相对分子质量较小,较长,较慢,相对分子质量较大,凝胶外部,较短,较快,（分子筛效应）,用凝胶色谱法分离蛋白质时，分子量大的蛋白质,(),A,路程较长，移动速度较慢,B,路程较长，移动速度较快,C,路程较短，移动速度较慢,D,路程较短，移动速度较快,4,、具体过程,D,相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的进行过程可表示为图中哪一个,B,缓冲溶液：,2,、作用：,能够抵制（）对溶液的（）的影响，维持,PH,基本不变。,外界的酸或碱,PH,值,1,、组成：,由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成,如,:H,2,CO,3,/NaHCO,3,;CH,3,COONa/CH,3,COOH,，,NaH,2,PO4/Na,2,HPO4;KH2PO4/K,2,HPO4,等,3,、缓冲溶液的配制,:,通常由,1-2,种缓冲剂溶解于水中配制而成。,电泳：,1,、概念：,2,、原理：,指带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。,不同蛋白质的,带电性质、电量、形状和大小,不同，在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。从而实现样品中各种不同蛋白质分子的分离。,3.,分类：,琼脂糖凝胶电泳,和,聚丙烯酰胺凝胶电泳。,测定（）通常用,SDS,聚丙稀酰胺凝胶电泳,蛋白质相对分子质量,使用,SDS-,聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于,A,电荷的多少,B,分子的大小,C,肽链的多少,D,分子形状的差异,