糖化血红蛋白标准化及检测方法比较_课件

糖化血红蛋白标准化及检测方法比较_图文.pptx,内容目录,糖化血红蛋白标准化,糖化血红蛋白（,GHB,）,检测方法及产品示例,常用检测方法之比较,1,2,3,4,糖化血红蛋白（,GHb,）,GHb,是指结合了任何形式碳水化合物的血红蛋白，血红蛋白与糖基发生非酶促，形成了不可逆的复合物。,Hb,HbA,0,HbA,1,HbA1a,HbA1b,HbA1c,HbA,(,),HbA,2,(,),HbF,(,),95%,2%,1-3.5%,成人血红蛋白分三种，,HbA,为主要成人,Hb,非糖化,Hb,糖化,Hb,6-8%,87-89%,血红蛋白,1%,1%,4%-6%,糖化血红蛋白的形成,血红蛋白,HbA,由两个,亚基和两个,亚基组成，,和,亚基上都有糖化位点，其中,亚基第,1,位缬氨酸主链氨基糖化率最高。,根据糖种类，糖基化血红蛋白可分为葡萄糖糖化、果糖糖化及乳糖糖基化血红蛋白等。人体内游离的葡萄糖含量远高于其他糖类物质，,亚基的氮端缬氨酸主链氨基的糖化概率最高，因此体内大部分糖基化血红蛋白为,亚基氮端缬氨酸与葡萄糖的加合物，该物质被命名为,HbA1c,。,HbA1c,糖基化位点结构图,亚基,亚基,血红素,血红素,血红素,血红素,检测方法学分类,1,、亲和层析,2,、免疫法,3,、酶法,4,、显色法,根据,Ghb,和非,GHb,带电不同,01,基于,Hb,上糖基化基团的结构特点,1,、离子交换层析,2,、电泳法,3,、等电点聚焦法,02,检测方法：离子交换层析,主要有高效液相色谱法,( high performance liquid chromatography,，,HPLC),和手工微柱法。此方法是基于血红蛋白,链,N,末端缬氨酸糖化后所带电荷不同而建立。在中性,pH,条件下，,HbA1c,携带的正电荷相对较少，因此可通过离子交换层析法将其与其他组分分离。,检测方法：毛细管电泳法,毛细管电泳能分离检测糖化血红蛋白和血红蛋白的变异体，样品用量少、操作简便、重复性好、省时、高效。,完全自动化操作，简单易用，在减少人为误差的基础上，重复性也得到了极大提高。,SEBIA,全自动高压液相毛细管电泳仪,检测方法：琼脂凝胶电泳法,Hb,于酸性缓冲液条件下,(pH6.0),，在琼脂糖凝胶上的电泳迁移取决于,Hb,在凝胶上的吸附情况及其所带的电荷。,HbA0,因其末端的缬氨酸残基对凝胶的负电荷有高度的亲和力，因此它的迁移速率减慢。,HbA1c,因它所连接的糖的阻断作用，不可再与凝胶结合，利用,HbA1c,和,HbA0,对凝胶的亲和力不同，导致的电泳迁移速率也不同，通过电泳将各成分分开。,SEBIA,蛋白质电泳仪,检测方法：等电点聚集法,在聚丙烯酞凝胶中加入载体两性介质（如,ampholin,）的薄板上形成一个由阳极到阴极逐渐增加的,pH,梯度。溶血液中各个组分将移动到各自等电点的,pH,位置上，这样就得到比一般电泳法更好的分划效果和比较集中的色带。,GE Ettan IPGphor 3,等电聚焦电泳仪,检测方法：亲和层析法,由交联了,间氨基苯硼酸,的琼脂糖珠作为分离载体。当总的,GHb,通过载体时，硼酸可与整合在血红蛋白分子中的葡萄糖顺位二醇基发生可逆性结合，使糖化的,Hb,选择性地结合于凝胶柱上，其他非糖化,Hb,等随缓冲液流出；然后用另一种含糖或多羟化合物的缓冲液将,GHb,洗脱下来，利用两部分,Hb,本身的颜色，在,415nm,条件下测定并计算出亲和色谱所测的,GHb,。,伯乐,In2it,糖化血红蛋白仪,Alere Afinion AS100 Analyzer,检测方法：免疫法,化学发光法：又叫离子捕获法，采用离子捕捉免疫分析法，应用抗原抗体反应原理，联合荧光标记物，通过连接带负电的多阴离子复合物，吸附到带正电的纤维表面，经过一系列彻底清洗等步骤后，测定荧光强度变化率，计算浓度。,检测方法：免疫法,比浊法：又有胶乳凝集法和免疫比浊法两种。可实现和自动化分析仪很好地结合起来，具有快速、准确、特异性强、重复性好、灵敏度高、线性范围宽等优点，可以使用自动化分析仪进行批量检测。,检测方法：免疫法,免疫层析法：免疫层析法操作简便易,行、快速准确、试剂稳定。更易于实现,POC,检测，有助于医生即时获悉患者血糖水平，并及时给予患者医疗指导，以避免糖尿病诊断和治疗的延误，未来有着较为广阔的应用前景。,Bayer,拜安时手持式糖化检测仪,检测方法：酶法,全血经溶血处理后，用特异蛋白内切酶将酶解消化成果糖氨基酸，再经果糖氨基酸氧化酶作用下产生过氧,化氢（,H2O2,），,H2O2,的浓度与血液中,GHb,的含量呈正比。,H2O2,在过氧化物酶的作用下与相应的色原耦联，发生颜色变化，根据其变化程度可得,H2O2,浓度，进而得知样本中,GHb,的含量。,积水医疗酶法生化试剂,糖化血红蛋白检测标准化,瑞典,Mono S,方法,日本,JDS/JSCC,方法,美国,NGSP,方法,对不同的,HbA1c,检测方法采用统一参考标准,(,采用,HPLC Bio-Rex 70,阳离子交换柱,),进行校准，使不同方法所测结果具有可比性,2000,年，,JSCC,启用,KO500,阳离子,HPLC,，与,JDS,合作设计了新的,HbA1c,检测校准物，通过新校准品校准后的,KO500 HPLC HbA1c,检测法，成为,JDS/JSCC,的参考标准化方案,2004,年，,GE Healthcare,在其离子交换操作手册中，详细介绍了,Mono S HPLC,方法用于检测,HbA1c,的操作步骤。证实,Mono S 5/50 GL,柱检测精度上具有优越性。,IFCC,法：,2007,年国际临床化学联合会,(IFCC),重新明确了,HbA1c,的命名、性质、单位,:,全称为,链血红蛋白,链,N,末端脱氧果糖基血红蛋白,;,特别强调,HbA1c,测定的是“物质分数”，而不是“质量分数”,;,推荐使用,( mmol /mol),作为,HbA1c,的单位，此建议为,HbA1c,结果数据提供了非常明确的计量单位，可溯源到溯源链的最高等级国际单位制。,