ABO血型系统及定型-正反不符dy

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,ABO,血型系统及定型,上海市血液中心,郭忠慧,正定型（细胞定型）,用已知抗体特异性的试剂血清检查红细胞的抗原,玻片法 试管法 微量板法,ABO,常规定型,ABO,常规定型,反定型（血清定型）,用已知血型的试剂红细胞检查血清中的抗体,试管法 微量板法,正反定型结果相符时，才可以记录血型结果。,ABO,正反不符时,受检红细胞是洗涤后悬浮于,NS.,吗?,是用最敏感的试管法吗,?,受检者年龄,60吗?,病人的丙种球蛋白减低吗,?,病人血清与,O,型普检红细胞的反应与试剂红细胞一样吗,?,病人是白血病、肠道阻塞、胃癌、结肠或直肠癌吗？,混合视野反应是输血后标本吗？,技术上错误的常见来源,血液标本或试管鉴定不当,红细胞悬浮液过浓或过淡及纤维蛋白、小血凝块的干扰,人为的书写错误,标本混乱,忽略观察溶血现象,未加入试剂,未按照试剂生产商的说明操作,离心机校准不良,试剂受到污染,温度在离心过程中增高,造成正反定型不符的,4,种变异情况,减弱的或减少的抗原反应,未知的抗原反应,减弱的或缺少的抗体反应,未知的抗体反应,减弱或减少的抗原反应,A,或,B,抗原的亚血型,A、B,及,AB,型,RBC,与试剂抗血清作实验时，预期反应：,4,细胞分型法减弱的凝集反应：健康献血员可能,A/B,亚型,抗,AB,血清能检出某些不与抗,A/,抗,B,试剂发生反应的,A/B,亚型,减弱或减少的抗原反应,疾病状态下,抗原强度减弱,如,:,A,型白血病,/,肿瘤患者在疾病活动期改变为,A2,或,A3,亚型,疾病缓解期复原,疾病状态下,血型物质过量,中和抗,A/,抗,B,试剂,造成假阴性,/,弱凝集,:,卵巢囊肿 胃癌 胰腺癌 肠道阻塞,对策,:,试管法 红细胞三洗,未知抗原反应,获得性,A,奇异变形杆菌感染的,O/B:,与抗,A,反应呈混合视野,未知抗原反应,获得性,B,RBC,反应象,AB,型,血清中有抗,B,抗体,细胞分型法,:,A,抗原,B,抗原,获得性,B,的成因,Gerbal,等假设细菌的脱乙酰基酶,deactetylases,可以将,A,的免疫结构域糖,N,乙酰氨基半乳糖胺转化为半乳糖胺。,这个半乳糖胺与,B,的免疫多糖半乳糖非常的相似，可以与某些抗,B,发生反应。,抗体致敏的红细胞,抗体吸附于红细胞表面，可显示直抗阳性,自身免疫性溶血性贫血,抗高血压药物,输血反应,新生儿溶血病,放散技术移去抗体,减弱或缺少抗体反应,年龄,70,丙球蛋白过低血症,丙球蛋白缺乏血症,未知的抗体反应,缗钱状凝集,冷自身抗体,未知的,ABO,同种抗体,未知的其它同种抗体,ABO,抗体的区别,特异性,血,清,其它来源,血型,频率,性 质,抗,B,A,全部,常属,IgM,效价,8-512,初乳 唾液泪液,(,IgA,),抗,AB,O,、,Oh,全部,常属,IgG,与,Ax,A3,凝集,抗,A,在蜗牛鱼卵中也可发现,抗,A,B,全部,常属,IgM,效价,32-2048,抗,A1,A2B,A2,Ax,22-35%,1-8%,大多数,少数报告有输血反应,用,A2,细胞吸收过的抗,A,血清,;,双花扁豆,(,Doliekos,biflorus,),抗,H,Oh,非,Oh,全部,部分,被,H,物质抑制,欧洲荆豆,(,Ulex,europaeus,),天然抗体和免疫抗体,天然抗体,未经可察觉的抗原刺激而产生的抗体,O,型血清中多为,IgG,抗,A,和抗,B,A/B,型血清中大多为,IgM,抗体,免疫抗体,妊娠,/,输血等,缗钱状凝集,球蛋白浓度增高,:,多发性骨髓瘤,/,原发性巨球蛋白血症,纤维蛋白原增高,血管扩张剂,霍奇金淋巴瘤,新生儿脐带血中的华尔道胶,冷自身抗体,抗,I,是反定型中最常见的自身抗体,有时也见抗,i,和抗,Pr,抗,I,通常凝集所有供者,RBC,包括患者自身及反定型所用,RBC,抗,I,引起的凝集比抗,A,抗,B,所引起的凝集弱,脐带血所,带的,I,抗原量少通常不被凝集,抗HI,与冷凝集有关的最常见的特异性抗体是抗,I,有些冷抗体与,I,和,H,抗原强的细胞如（,O,和,A2,细胞）反应最强，称之为抗,HI,联合抗体。,冷自身抗体之鉴别,抗,I,抗,i,抗,H,抗,HI,抗,Pr,成,OI + - + + +,成,AI + - - - +,脐,Oi,- + + - +,酶,OI,+ - + +,+,抗,HI： O,成,A2,成,B/A,成脐,O,脐,AB,未知的同种抗体,ABO,同种抗体,:,A2/A2B,中的抗,A1,A1/A1B,中的抗,H,未知的同种抗体,:,筛选细胞及反定型中的,O,细胞,一组谱细胞鉴定抗体特异性,ABO,亚型,A,抗原中主要为,A1,和,A2,其它,A,亚型：,A3、Ax、,Aend,、Am、Ay、,和,Ael,B,亚型一般,比,A,亚型更少：,B3、,Bx,、,Bm,和,Bel,等,判断,ABO,亚型,:,1,红细胞与抗,A,抗,A1,抗,B,及抗,AB,的凝集程度,2,红细胞上,H,物质活性的强弱,3,血清中是否存在抗,A1,4,分泌型人的唾液中,A、B,和,H,物质,A1,和,A2,的鉴别,项目,A1,细胞,A2,细胞,与抗,A,反应,4,2,与抗,A1,反应,成人抗原位点,100,万,25,万,脐血抗原位点,31,万,25,万,乙酰,D,半乳糖胺转移酶,PH 6,时最多,PH 7,时最多,各种弱,A,亚型的鉴别程序,红细胞,弱凝集,混合外观,(,Mf）A60,A3,与抗,A,A3 Ax,10, 红细胞呈十分弱的,mf,凝集,Aend,及/,或抗,Aend,只与抗,AB,呈弱凝集,Ax,A1B,反应,不凝集,容易吸附放散抗,A,Am,能吸附,分泌型唾液中有一定量的,A,物质,及放散,不容易吸附放散抗,A,Ay,抗A,分泌型唾液含少量的,A,物质,Am Ay,吸附放散抗,A,Ael,Ael,分泌型唾液只含,H,物质无,A,物质,A2,与人源性抗,A,试剂的反应强度为,4,与抗,H+/2+,可能有不规则抗,A,1,存在,(,sometimes),1-8% A,2,和22-35%的,A,2,B,存在抗,A,1,血型物质,A H,举例 抗,A,抗,B Ac,Bc Oc,4+ 4+ + - -,A2,A1,和,A2,决定簇的区别是仅存在量的差异,还是抗原决定簇结构不同？,用,A2,细胞重复吸收来源于,B,型个体的抗,A,血清可以移去所有抗体，表明二者之间仅是量的差别。,A2,和,A2B,个体常常产生抗,A1，,说明,A2,细胞上缺乏,A1,细胞上的一种决定簇。,血型前体物质：,Type1 Gal,13GlcNAc,1R（,血清）,Type2 Gal,14GlcNAc,1R （,红细胞）,Type3 Gal,13GalNAc,1,R（,红细胞）,Type4 Gal,13GalNAc,1R （,红细胞）,Type5 Gal,13Gal,1R（,人工合成）,Type6 Gal,14Glc,1R,A1,和,A2,同样存在质的区别,A1,细胞出现重复的,3型,A,抗原结构，但,A2,细胞却没有。,抗,A1,是3型或4型,A,特异性的，或者抗,A1,可以优先与,3,型或,4型,A,反应。,只有,A1,转移酶能够转化,3型,H,加一个,N,乙酰氨基半乳糖基成为,3型,A,因此,A2,细胞上可以检测,到3型,H,而不是,3型,A,抗原。,双花扁豆植物血凝素检测,N,乙酰氨基半乳糖胺，当过量的浓度下，它可以凝集,A2,细胞，因此将它用作,A,亚型分型试剂更多是依赖,A1,和,A2,表现型数量上的差异。,A3,最早由,Friedenreich,在1936,年描述,与抗,A,和抗,AB,共同孵育时：“混合视野外观”（,mixed field agglutination）。,即：小的凝集块周围是大量未凝集的细胞。,与抗,A,反应强度低于,A2,与抗,AB,反应呈混合视野,但并不增强,偶有抗,A1 (occasionally),血型物质,A H,A3,不像是,A2,和,O,细胞的嵌合体,Aend,（,Afinn,，,Abantu,）,Aend,最早由,Weiner,等于,1959,年描述,类似于,A3,细胞：它们与一些抗,A,和抗,AB,表现很弱的混合视野外观,Aend,分泌型的唾液中只有,H,物质，但是无,A,物质,抗,A1,出现在部分,Aend,个体的血清中,10,细胞凝集（,Mf）,Am,Am,细胞不能被抗,A,和抗,AB,凝集，或者仅能发生很弱的凝集。,Am,细胞可以吸附放散抗,A 。,Am,分泌型的唾液中包含正常含量的,A,和,H,物质，,Am,血清中通常无抗,A1。,Am,作为,ABO,位点上一个稀有的等位基因遗传,Am,在法国献血者的频率是,150 000,中有,1,例。（,A,型人中占,0.0015%,），中国台湾的数据是,400 000,万人中,1,例。,Am,抗原性较弱 抗,A: - / w+,抗,H 4+(,甚至会超过,Oc,),无抗,A1,产生,与抗,AB,反应不增强,血型物质,:,A H,Ax,Ax,表现型最初由,Fischer,和,Hahn,于1935,年报道，它的主要血清学特点是：,红细胞与多数来源于,B,型血清的抗,A,不发生反应，但是可以被大多数来源于,O,型个体的抗,AB,凝集，没有混合视野表现。,血清中含有抗,A1，,后者有时候可以凝集,A1,和,A2,细胞。,除了,H,物质，,Ax,分泌型个体唾液中可以捡出痕量的,A,物质,Ax,抗,A: -/ w+,抗,H:4+(,与,Oc,的抗,H,差不多,),常有抗,A1(Frequently) ,比,A2 A3,都高,与抗,A+B,的反应比抗,A,明显增强,血型物质,H,Ax,Ax,表现型具有很高的遗传异质性：,许多家系资料表明,Ax,以,ABO,位点上一种稀有的等位基因的方式遗传,在一些家庭中遗传背景不清楚,在两项独立的研究中，法国,Ax,的频率为,1/77000 (,A,型人中,的0.003%)和1/44000,Aint,与抗,A1,反应较弱,2+,与抗,A,及抗,H,反应较强,4+/3+,仅有,A1,和,Aint,的细胞与抗,A1,发生反应,Aint,Landsteiner,和,Levine：,有些,A,型个体的红细胞既不能定义为,A1,也不能定义为,A2,Aint,在黑人中较白人更为常见，,Aint,是作为,ABO,位点上的一个等位基因遗传的。,它的,H,抗原强度象,A2,一样强，甚至更强。,Ael,在通常的条件下，,Ael,细胞与抗,A,和抗,AB,不发生凝集，虽然它们可以结合这些抗体，结合的抗体可以通过吸收放散技术检测到,Ael,分泌型唾液中无,A,物质，仅有,H,物质，血清中常含有抗,A1，,也可以含有能够凝集,A2,细胞的抗体,Ael,在,Ael,血清和红细胞膜上不能检出,A,转移酶。,在法国,150000,例献血者中，没有检测到,Ael,表现型，在中国台湾,400000,人中捡出,5例,Ael,个体,Ael,以,ABO,位点上的一种稀有的等位基因遗传的。,Aw,Olsson,等,对其它弱,A,亚型的,ABO,基因的外显子、剪切部位和启动子进行序列测定,那些表现型不太容易被划分到任何现存的分类中。这些异常的基因被称作,Aw（15）。,Subgroups of A,Pheno,-type,Red cells,tested,With anti-sera,Serum tested,with,Known red cells,Salivaof,secretors,Anti-A,-B,-AB,-A1,-H,A1,A2,B,O,A1,V,_,V,V,_,_,_,V,_,A and H,Aint,+,_,V,+,+,_,_,V,_,A and H,A2,+,_,V,_,+,Some-times. +,_,V,_,A and H,A3,+mf,_,+mf,_,+,Occa-sionally,. +,_,V,_,A and H,Am,-/w+,_,-/w+,_,V,_,_,V,_,A and H,Ax,-/W+,_,+/+,_,V,Fre-quently,+,_,V,_,H,B,亚型,弱的,B,变异型是很少的。,可能是由于在许多群体中,B,基因的频率要相对低得多。,弱,B,亚型较难以分类。,Salmon,做出结论：,B,亚型最好的分类应参照,A,变异型：,B3、,Bx,、,Bm,和,Bel,，,另外加上那些不符合其它,4,种类型的,Bw,。,B3,1972,年,Wiener,和,Cioffi,首先报道一例,ABH,非分泌型,B3。,它被作为最稀少的一种,B,亚型,这种表现型以与抗,B,和抗,AB,呈现混合视野反应为特点,血清中缺乏抗,B,唾液中含有正常含量的,B,抗原,B3,通常是由于,ABO,位点上的稀有等位基因所致。,Bx,一种异质性的血型,典型的,Bx,红细胞与抗,B,和抗,AB,呈弱凝集。,血清中含有弱的抗,B,Bx,分泌型唾液中含有一些,B,物质，后者常常仅能通过,Bx,细胞与抗,B,的凝集抑制试验才能检测到,Bx,是,ABO,位点上的一种稀有的等位基因。,Bm,Bm,细胞不能被抗,B,或抗,AB,凝集,B,抗原仅能通过敏感的技术比如吸收放散抗,B,才能检测到。,Bm,分泌型唾液中,B,物质的含量接近正常,B,Bm,个体的血清中不含有抗,B。,通常,Bm,是作为,ABO,位点上一个变异的基因来遗传的，但是有几个例外报道。,Bel,Bel,红细胞与抗,B,和,AB,不发生凝集反应，但是它们的确可以结合抗,B，,抗体可以通过放散技术被检测到。,Bel,分泌型唾液中不出现,B,物质，血清中可能存在抗,B,抗体。,Bel,作为,ABO,位点上的稀有基因而遗传，,Bw,Olsson,等确认了,7,种新的等位基因，它们与正常,B,基因相比有,1,个核苷酸改变，导致一个氨基酸的取代（见表,2.19,Bw2,到,8,），所有这些等位基因与,B,的弱表达相关，但是没有做进一步分类。,正反不符的解决,正定型中意外阳性或阴性,洗涤细胞,加入自身对照,增加血清,/,细胞比例,降低孵育温度,延长孵育时间,4,/22,/37, 15,min-30min,镜检,用不同来源的抗体试验,用人源性试剂作吸收放散,(,并作相应对照,),吸收放散试验 检测红细胞上的弱,A/B,抗原,NS.,三洗受检,1,ml,红细胞,加入等量人源性抗,A,或抗,B,充分混匀,4,1,小时，离心去上清,4,冷盐水充分洗涤细胞,58,次（留末次洗涤液）,56,热放散,检测放散液及最后一次洗涤液,注意：要有阴阳性对照,正反不符的解决,反定型中意外阳性或阴性,A1,细胞阳性,A2,细胞和筛选细胞阴性,自身阴性,:,可能是含有抗,A1,的,A,或,AB,型,部分筛选细胞阳性,自身阴性,:,血清中可能含有意外抗体,用一组谱细胞,确定抗体特异性,正反不符的解决,室温盐水反应抗体,:,MN、P、Lewis,抗人球试验阳性抗体：,Ss,Rh,Kell,Duffy Kidd,排除冷抗体及缗钱状凝集 ：,HI,抗体,排除多凝集 ： 同型成人新鲜血清、脐带血清 植物血凝素（,Tn,、T,抗原活化）酶处理的成人,O,细胞,