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Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,血清,(xuqng),总蛋白测定,双缩脲法,第一页,共十页。,实验,(shyn),目的,熟悉(shx)血清蛋白的测定方法双缩脲法。,掌握血清总蛋白测定的临床意义。,进一步稳固掌握721E型分光光度计的使用。,第二页,共十页。,实验,(shyn),原理,尿素被加热,那么两分子(fnz)的尿素放出一分子(fnz)氨而形成双缩脲。双缩脲在碱性环境中,能与硫酸铜结合成紫色的化合物,此反响称为双缩脲反响。,第三页,共十页。,蛋白质分子中含有肽键与缩脲结构(jigu)相似,故也能进行此反响。双缩脲反响可作为蛋白质定量测定的依据。,第四页,共十页。,双缩脲反响并非是蛋白质特有(t yu)的颜色反映!,凡分子内含有2个或2个以上甲酰基氨基-CONH2-均可呈双缩脲反映。,第五页,共十页。,实验,(shyn),试剂,生理盐水:NaCl 0.9g 溶于100ml蒸馏水,双缩脲试剂:硫酸铜 3.0g溶于500ml蒸馏水,加酒石酸钾钠9.0g,碘化钾5.0g,完全溶解后,参加24%NaOH100ml,用蒸馏水稀释到1L,置聚氯乙烯瓶内盖紧保存。,蛋白质标准液:收集混合血清,经凯氏定氮法定值,用作蛋白质标准液。贮于冰箱中备用(biyng)。也可用100mg/ml牛血清白蛋白替代。,待测血清用生理盐水1:10稀释。,第六页,共十页。,实验,(shyn),操作,取3支试管,(shgun),,按下表操作。,测定管,标准管,空白管,血清(ml),蛋白质标准液(ml),生理盐水(ml),双缩脲试剂(ml),1.00,5.0,1.00,5.0,1.00,5.0,第七页,共十页。,混匀,37水浴放置(fngzh)10分钟,以空白管调零点,在540nm波长处进行比色,分别读取各管的吸光度。,计算P60,第八页,共十页。,临床意义,血清蛋白升高,(shn o),血清蛋白降低,第九页,共十页。,内容,(nirng),总结,血清总蛋白测定。尿素被加热,那么两分子的尿素放出一分子氨而形成双缩脲。双缩脲在碱性环境中,能与硫酸铜结合成紫色的化合物,此反响称为双缩脲反响。生理盐水:NaCl 0.9g 溶于100ml蒸馏水。蛋白质标准液:收集混合血清,经凯氏定氮法定(fdng)值,用作蛋白质标准液。混匀,37水浴放置10分钟,以空白管调零点,在540nm波长处进行比色,分别读取各管的吸光度。血清蛋白降低,第十页,共十页。,
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