实验六植物组织中总糖和还原糖含量的测定(DNS法)20111017

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验六、植物组织中总糖和还原性糖含量的测定,1,、实验目的,掌握总糖和还原糖含量的测定方法,学习总糖和还原糖提取的方法,2,、实验重点和难点,利用,3,5-,二硝基水杨酸法测定还原糖含量的实验原理,多糖在酸性加热条件下会降解为还原糖,3,、实验原理,3.1,、还原糖的概念,指含有游离的半缩醛（酮）基糖。单糖都是还原糖；某些二糖是还原糖（如麦芽糖、乳糖等）；多糖多为非还原糖。,葡萄糖分子中含有游离醛基，果糖分子中含有游离酮基，乳糖和麦芽糖分子中含有游离的醛基，故它们都是还原糖。,3.2,、,3,5-,二硝基水杨酸比色法,总糖的提取及双、多糖的酸水解。利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量。,还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，,3,5-,二硝基水杨酸,(,黄色）,则被还原为棕红色的,3-,氨基,-5-,硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在,540nm,波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。,由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以,0.9,。,相对密度法,折光法,旋光法,物理法,3.3,、糖含量测定方法,化学法,还原糖法,碘量法,比色法,直接滴定法,(,改良的兰,爱农法）,高锰酸钾法,萨氏法,3,，,5,二硝基水杨酸,酚,硫酸法,蒽酮法,半胱氨酸,咔唑法,纸色谱,薄层色谱,GC,HPLC,半乳糖脱氢酶测半乳糖、乳糖,葡萄糖氧化酶测葡萄糖,发酵法,测不可发酵糖,重量法,测果胶、纤维素、膳食纤维素,色谱法,酶法,4,、操作步骤,4.1,、制定标准曲线,管号,0,1,2,3,4,5,标准葡萄糖溶液,/,mL,0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,蒸馏水,/,mL,1.0,0.8,0.6,0.4,0.2,0,DNS,试剂,/,mL,2.0,2.0,2.0,2.0,2.0,2.0,沸水浴中准确煮沸,5min,，取出，用自来水冷却至室温,蒸馏水,/,mL,9.0,9.0,9.0,9.0,9.0,9.0,葡萄糖浓度,/mg/,mL,0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,A540,4.2,、植物组织中总糖与还原糖溶液的获取,(1),还原糖：,30mL,水冲研钵,2-3,次,1g,土豆,研成匀浆,3mL,水,三角瓶中,50,水浴,0.5h,冷却定到,100mL,混匀,过滤,取滤液作为还原糖提取液,(2),总糖,：,1g,土豆,研成匀浆,3mL,水,三角瓶中,沸水浴,0.5h,冷却,用,NaOH,中和,加水定容到,100mL,混匀,过滤,取滤液作为总糖提取液,12mL,水冲研钵,2-3,次,10mL6MHCl,I,2,-KI,检测,4.3,、用,3,5-,二硝基水杨酸法测还原糖、总糖含量,管号,空白对照,还原糖,样液管,总糖样液管,样液,/,mL,0,1.0,1.0,水,1.0,0,0,DNS,试剂,/,mL,2.0,2.0,2.0,沸水浴中准确煮沸,5min,，取出，用自来水冷却至室温,蒸馏水,/,mL,9.0,9.0,9.0,A540,5,、数据处理与问题,5.1,、计算浓度,5.2,、本实验的注意事项？,预习实验,102.1,酵母醇脱氢酶的提纯,3,5-,二硝基水杨酸法标准曲线,