乙肝丙肝核酸检测的新平台临床课件

*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,乙肝丙肝核酸检测的新平台临床,乙肝丙肝核酸检测的新平台临床,目前乙肝和丙肝临床治疗过程中遇到的主要问题,治疗终点无法准确判定,有些病人经一段时间治疗后,DNA/RNA,检测结果忽阴忽阳，但临床症状依然明显,不能及时预测耐药（病毒学突破）,核苷（酸）类似物治疗后病毒,DNA/RNA,快速下降至检测限以下，不久却发现病毒出现反跳,疗效的准确监测？,治疗后,12,或,24,周病毒,DNA/RNA,下降幅度直接决定预后,问题的根源在哪里？,目前乙肝和丙肝临床治疗过程中遇到的主要问题治疗终点无法准确判,内 容,HBV,核酸检测的现状与需要,HCV,核酸检测的现状与需要,罗氏的,CAP/CTM,能带来什么益处,总结,内 容HBV核酸检测的现状与需要,HBV DNA,监测在抗病毒治疗中的临床应用,HBV DNA,是,监测抗病毒治疗,响应和时间的关键标志物,HBV,治疗的路线图理念，为,HBV DNA,监测用于临床实践提供了指导,对,用药耐药性的监测,（拉米夫定,YMDD,，,）,肝移植,HBV,复发风险的降低（术前，术后）,HBV DNA监测在抗病毒治疗中的临床应用HBV DNA是监,HBV DNA,监测的临床应用,HBV,治疗路线图,Keeffe E. Clin Gastro Hepatology 2007;5:890-897.,侯金林等，慢性乙型肝炎抗病毒治疗方案优化，中国肝脏病杂志,HBV DNA监测的临床应用Keeffe E. Clin G,国产试剂现状,目前使用的国产试剂能解决的问题，不能解决的问题：,HBV,试剂盒说明：,500,510,7,IU/mL,较可信的测试范围：,10,4,510,7,IU/mL,对部分发生,HBV,病毒突变的病人无法准确检测,注：,1 IU/mL= 1 copy/mL,国产试剂现状目前使用的国产试剂能解决的问题，不能解决的问题：,内 容,HBV,核酸检测的现状与需要,HCV,核酸检测的现状与需要,罗氏的,CAP/CTM,能带来什么益处,总结,内 容HBV核酸检测的现状与需要,HCV DNA,监测在抗病毒治疗中的临床应用,HCV,病毒感染是可治愈的疾病,HCV RNA,检测可以有效指导临床用药,治疗的终点,是核酸检测为阴性（核酸检测可以直接指导停药时机）,HCV DNA监测在抗病毒治疗中的临床应用HCV病毒感染是可,Schering-Plough Corp.,CAP/CTM HCV,样本管/反应管管盖抓手,Peginterferon alfa-2a,HEPSERA (Adefovir dipivoxil) package insert Gilead Sciences.,COBAS AmpliPrep / COBAS TaqMan 96系统（带连接系统）,HCV RNA检测可以有效指导临床用药,侯金林等，慢性乙型肝炎抗病毒治疗方案优化，中国肝脏病杂志, Journal of Medical Virology 2005, 77:486490,治疗结束后24周，未检测到HCV RNA,可针对疑难病例、低病毒载量、长期用药或高端病人,治疗期间曾有HCV RNA低于检出限，但尚未停药即出现HCV RNA重新升高,真正实现 “样品进，结果出”,Christoph Sarrazina et al.,检测通量可达4*24测试,北京友谊医院（贾继东）,TYZEKA (Telbivudine) Package Insert.,0 in serum and plasma matrices.,慢性,HCV,治疗方案,治疗应答名称,描述,快速病毒学应答（,RVR,）,4,周时未检测到,HCV RNA,早期病毒学应答（,EVR,）,-,完全早期病毒学应答（,cEVR,）,未,RVR,，但,12,周时未检测到,HCV RNA,-,部分早期病毒学应答（,pEVR,）,未,RVR,，,12,周时,HCV RNA,拷贝数下降,2log10,，但仍检测到,HCV RNA,没有应答,12,周时,HCV RNA,拷贝数下降,2log10,治疗结束（,EOT,）,治疗结束,未检测,到,HCV RNA,持续病毒学应答（,SVR,）,治疗结束后,24,周，未检测到,HCV RNA,反弹,治疗期间曾有,HCV RNA,低于检出限，但尚未停药即出现,HCV RNA,重新升高,复发,治疗期间,HCV RNA,低于检出限，但治疗结束（停药）后,HCV RNA,重新升高,Schering-Plough Corp.慢性HCV治疗方案,慢性,HCV,治疗方案,用药,12,周早期病毒学反应,HCV RNA,下降,2log,继续治疗至,48,周,继续治疗至,24,周,考虑停药,慢性HCV治疗方案用药12周早期病毒学反应HCV RNA下,国产试剂现状,目前使用的国产试剂能解决的问题，不能解决的问题：,HCV,试剂盒说明：,500,510,7,IU/mL,较可信的测试范围：,10,4,510,7,IU/mL,注：,1 IU/mL= 1 copy/mL,国产试剂现状目前使用的国产试剂能解决的问题，不能解决的问题：,内 容,HBV,核酸检测的现状与需要,HCV,核酸检测的现状与需要,罗氏的,CAP/CTM,能带来什么益处,总结,内 容HBV核酸检测的现状与需要,全世界第一台用于体外诊断的全自动荧光定量分子诊断系统,真正实现 “样品进，结果出”,全球安装超过,2,000,台，国内安装超过,40,台,COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan,系统,COBAS AmpliPrep / COBAS TaqMan48,系统,COBAS AmpliPrep / COBAS TaqMan 96,系统（带连接系统）,COBAS AmpliPrep / COBAS TaqMan 96,系统（无连接系统）,全世界第一台用于体外诊断的全自动荧光定量分子诊断系统COBA,COBAS AmpliPrep,仪器简介,全自动系统，自动进行核酸提取纯化和,PCR,反应体系配制,基于,MGP,磁珠,分离技术，确保高质量的核酸提取纯化,最多,72,个样品可以同时上机，运行中可连续装载上架，提高工作效率,包括耗材、,样品、,试剂均可以连续上样,COBAS AmpliPrep仪器简介全自动系统，自动进行核,DNA,或者,RNA,1.,裂解、稳定和去蛋白,2.,核酸捕获,病毒或细胞,3.,冲洗,4.,洗脱,37C,孵育,COBAS AmpliPrep,仪器,MGP,磁珠分离技术,室温,80C,孵育,DNA1.裂解、稳定和去蛋白2.核酸捕获病毒或细胞3.冲洗4,取,SPU,枪头,样本管,/,反应管管盖抓手,样本初始体积感应器,取试剂钢针,CAP,机械臂介绍,样本管,/,反应管结构,CAP机械臂介绍样本管/反应管结构,COBAS,TaqMan/COBAS TaqMan 48分析仪简介,检测通量可达,4*24,测试,独立的,24,孔热循环仪,TaqMan 48,有,2,个模块，,TaqMan 96,有,4,个模块,最多可同时进行,4,个不同的分析检测,操作简单，核酸扩增和检测全部自动完成,实时定量,PCR,检测技术，卓越的检测性能，灵敏度高和特异性好，动态范围宽,COBAS TaqMan/COBAS TaqMan 48分析,HBV-DNA,定量测试,用于药品,FDA,注册试验,通用名,商品,名,FDA,批准日期,关键,的,HBV-DNA,测试,Interferon alfa-2b,-2b,干扰素,INTRON,A,1991,N/A,Lamivudine,拉米夫定,EPIVIR-HBV,1998,杂交研究解决,方案,1,Adefovir dipivoxil,阿德福韦酯,HEPSERA,2002,Amplicor Monitor,2,Entecavir,恩替卡韦,BARACLUDE,2005,Cobas Amplicor,3,Peginterferon alfa-2a,聚乙二醇干扰素-2,a,PEGASYS,2005,Cobas Amplicor,4,Telbivudine,替比夫定,TYZEKA,2006,Cobas Amplicor,5,Tenofovir,替诺福韦,VIREAD (HIV),Phase 3,Cobas TaqMan,6,INTRON A (Interferon alfa-2b) package insert. Schering-Plough Corp. Kenilworth, NJ 2. EPIVIR-HBV,(Lamivudine) package insert GlaxoSmithKline, Research Triangle park, NC 3.,HEPSERA,(Adefovir dipivoxil) package insert Gilead Sciences. Foster City, CA,4.,Pegasys (Peginterferon alfa-2a) package insert. Hoffmann-La Roche Inc. Nutley, NJ 5.,TYZEKA (Telbivudine) Package Insert. Novartis Pharmaceuticals Corp. E Hanover, NJ 6. Marcellin P et al. Hep DART 2007 Meeting,Abstract 63, Dec 9-13 2007, Lahaina, HI,HBV-DNA定量测试用于药品FDA注册试验通用名商品名 F,国外发表的文献,Evaluation of initial virological response to adefovir and development of adefovir-resistant mutations in patients with chronic hepatitis B. Gallego et al., Journal of Viral Hepatitis, , 15, 392398,Evaluation of an automated, highly sensitive, real-time PCR-based assay (COBAS AmpliprepTM/COBAS TaqManTM) for quantification of HCV RNA. Christoph Sarrazina et al., Journal of Clinical Virology , , 43, 162168,COBAS AmpliPrep-COBAS TaqMan Hepatitis B Virus(HBV) Test: a Novel Automated Real-Time PCR Assay for Quantification of HBV DNA in Plasma. Tiziano Allice et al., Journal of Clinical Microbiology, Mar. 2007, p. 828834,Evaluation of the COBAS AmpliPrep-total nucleic acid solation-COBAS TaqMan hepatitis B virus (HBV) quantitative test and comparison to the VERSANT HBV DNA 3.0 assay. Ronsin C et al., Journal of Clinical Microbiology 2006 vol.44(no.4),Comparison of the COBAS TaqManTM HBV Test With the COBAS Amplicor MonitorTM Test for Measurement of Hepatitis B Virus DNA in Serum. Simon Siu-Man Sum et al., Journal of Medical Virology 2005, 77:486490,Hepatitis B virus (HBV) genotype determination by the COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HBV Test, v2.0 in serum and plasma matrices. Goedel S et al., Journal of Clinical Virology Jul;45(3):232-6,Comparison of Versant HBV DNA 3.0 and COBAS AmpliPrep-COBAS TaqMan assays for hepatitis B DNA quantitation : Possible clinical implications. GARBUGLIA A. R. et al., Journal of virological methods 2007, vol. 146, no1-2, pp. 274-280,Performance of the Cobas AmpliPrep/Cobas TaqMan Real-Time PCR Assay for Hepatitis B Virus DNA Quantification. Stephane Chevaliez et al., Journal of Clinical, May , p. 17161723,国外发表的文献Evaluation of initial v,HBV,的定量检测性能指标,国产,HBV,试剂,CAP/CTM HBV,灵敏度,(LOD),500 IU/mL,？,12 IU/mL,检测范围,10,4,510,7,IU/mL,54 - 1.110,8,IU/mL,定量方法,外标法定量,内标法定量,其它,对部分发生,HBV,病毒突变的病人无法准确检测,涵盖亚型,: A-G,加强,pre-core,突变检测,注：,国产试剂,1 IU/mL= 1 copy/mL,HBV的定量检测性能指标国产HBV试剂CAP/CTM HBV,HCV,的定量检测性能指标,国产,HCV,试剂,CAP/CTM HCV,灵敏度,(LOD),500 IU/mL,？,15 IU/mL,检测范围,10,4,510,7,IU/mL,43 6.910,7,IU/mL,定量方法,外标法定量,内标法定量,其它,未知,1-6 型 (能区分 0.5 log浓度变化),HCV的定量检测性能指标国产HCV试剂CAP/CTM HCV,定量原理,外标法定量（国产试剂）,使用一组（,4,管）外部标准品定量，分别为,510,4,到,510,7,IU/mL,未考虑,各患者血液成分间的差异性,对结果的影响,定量原理外标法定量（国产试剂）使用一组（4管）外部标准品定,定量原理,内标定量,Internal Quantitation Standard,(CAP/CTM),内标是已知拷贝数的人工构建核酸，加入每一反应管，与靶核酸竞争扩增，管内定量,可提示反应是否存在反应抑制，,避免假阴性结果,充分考虑管间反应效率的差异,，得到可靠精确的结果,定量原理内标定量Internal Quantitation,Nutley, NJ 5.,全自动系统，自动进行核酸提取纯化和PCR反应体系配制,INTRON A (Interferon alfa-2b) package insert.,治疗结束后24周，未检测到HCV RNA,HEPSERA (Adefovir dipivoxil) package insert Gilead Sciences.,Pegasys (Peginterferon alfa-2a) package insert.,12周时HCV RNA拷贝数下降2log10, Journal of Clinical, May , p.,肝移植HBV复发风险的降低（术前，术后）,HCV核酸检测的现状与需要,全世界第一台用于体外诊断的全自动荧光定量分子诊断系统,北京大学人民医院肝炎所（魏来）,EPIVIR-HBV,检测通量可达4*24测试,HEPSERA (Adefovir dipivoxil) package insert Gilead Sciences.,COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan,系统,封闭样品管输入，封闭,PCR,管输出 标准化，重复性,纯化好,的核酸,主反应液,PCR,反应体系的配制,试剂、样品和耗材的装载上机,样品处理单元,K-,枪头,K-,管,样品,试剂,Nutley, NJ 5.COBAS AmpliPrep/,Branchburg生产厂房罗氏 超过亿美金，建成全球最大分子诊断试剂生产基地目前每月生产14万套试剂,Branchburg生产厂房罗氏 超过亿美金，建成全球最,罗氏分子诊断严格的生产和质控体系为整个行业设定了高标准,1.,原料严格把关,3. GMP,生产,2.,原料质检,4. GMP,生产,6.,成品质检,5.,试剂盒成品,7.,资料入档,罗氏分子诊断严格的生产和质控体系为整个行业设定了高标准1.,COBAS AmpliPrep /COBAS TaqMan,全自动荧光定量分子诊断系统的应用,抗病毒治疗评估和监测（,HBV/HCV,）,，为临床医生和病人提高更准确的结果，指导用药。可针对疑难病例、低病毒载量、长期用药或高端病人,肝移植,的术前术后监控,全国药物、诊断试剂,临床评估,实验基地,CAP,室间质评时有,与国际接轨,的平台，评价更科学,基础研究,的工具，文章可信度大大增加,COBAS AmpliPrep /COBAS TaqMan,国内部分用户,省份,用户,主要检测项目,仪器类型,北京,北京大学人民医院肝炎所（魏来）,HBV/HCV,CAP/CTM 48,北京,北京大学基础医学院（庄辉）,HBV/HCV,CAP/CTM 48,北京,北京友谊医院,（贾继东）,HBV/HCV,CAP/CTM 48,浙江,浙江大学附属第一医院（李兰娟）,HBV/HCV,CAP/CTM 48,广东,南方医院（侯金林）,HBV/HCV,CAP/CTM 96,北京,北京大学第一医院,HBV/HCV,CAP/CTM 48,北京,北京协和医院,HBV/HCV/HIV,CAP/CTM 48,上海,上海瑞金医院（张欣欣）,HBV/HCV,CAP/CTM 48,四川,华西医科大学附属华西医院（唐红）,HBV/HCV,CAP/CTM 96,湖北,武汉同济医院,HBV/HCV,CAP/CTM 48,广东,广州第八人民医院,HBV/HCV/HIV,CAP/CTM 48,上海,上海公共卫生中心,HBV/HCV/HIV,CAP/CTM 48,重庆,西南医院,(,毛青,) (,装机中,),HBV/HCV,CAP/CTM 48,重庆,重医大附二院,(,任红，张大志,) (,装机中,),HBV/HCV,CAP/CTM 48,国内用户现已超过,40,家,国内部分用户省份用户主要检测项目仪器类型北京北京大学人民医院,谢谢观看！,谢谢观看！,